Culture dans CO - ou II avec la inac/iinc jinruina
TECHNIQUE DES CULTURES
liqiie à mercure. — Reliez le tube double ou simple à la machine pneumatique à mercure, comme il a été dit ci-dessus. Faites le vide. Faites passer une première fois CO- ou H dans le tube, extrad ez le gaz; remplissez alors une fois encore avec CO- ou H, et fermez le tube en B sous le courant de (juz. Portez la culture dans l'éluve.
3. Culture dans le vide avec la trompe à eau. — Disposez rextrémilé H du tube double ou du tube simple comme il est indiqué dans la figure 32, ou reliez-le à la branche C du tube ABC (V. fig. 33), suivant que vous aurez adopté l'un ou l'autre des dispositifs que nous avons indiqués (il va sans dire que Ton peut en imaginer tel autre aussi simple et pratique) .
Videz le tube d'air par le jeu de la trompe : il sera nécessaire ici, comme avec la machine pneumatique à mercure, de déterminer l'ébullition du liquide à basse température avec une petite flamme de gaz, et de faire éclater les bulles sur la paroi supérieure du tube légèrement chaulTée. Le vide étant partiellement fait, remplissez à deux ou trois reprises le tube de CO- ou de H que vous extrairez chaque fois à l'aide de la trompe, et après la dernière opération, le tube étant complètement privé d'air, fermez-le en fondant à la flamme du gaz le verre au niveau de l'étranglement B, audessus du tampon de ouate.
Portez le tube de culture à l'étuve.
4. Culture dmis CO- ou H à l'aide de la trompe à eau. — L'opération diffère peu : le vide étant fait dans le tube simple ou double, faites-y passer à plusieurs reprises CO- ou H pour chasser les dernières traces d'air; remplissez une dernière fois avec CO- ou H, et, le gaz passant toujours., fermez à la flamme le tube, qui restera ainsi rempli du gaz inerte.
CULTUKE DES MIGKOBES ANAÉROBIES.
Portez le lube à Fétuve.
« Pour l'aire une prise du liquide contenu dans l'intorieur du tube (simple ou double) sans introduire d'impureté dans la culture, il faut casser le tube etiilé R au-dessus du tampon de ouate, laisser rentrer Fuir (1) et incliner le tube jjour faire sortir un peu du liquide par l'effilure latérale préalablement ouverte et passée dans la flamme. L'introduction de l'air arrête la culture. Si on veut qu'elle continue, il faut ouvrir le tube de façon à ce qu'il se remplisse du gaz inerte. Pour cela, après avoir fait un trait à l'extrémité du tube B, on l'adapte à un tube de caoutchouc relié au gazomètre, on casse la pointe dans le tube de caoutchouc, et le gaz remplit l'appareil » (Roux).
II. Culture des anaérobies dans la gélatine (î) ensemencée par piqûre.
Cette culture peut se faire soit dans le vide, soit en présence de CO- ou de II .
Le tube qui sert à cette culture a été représenté fig. 12 dans le cliapitre IL
Nous le supposons rempli de gélatine stérile dans son quart inférieur et prêt pour l'usage.
On étranglera alors le tube B en un point c de sa longueur, et on poussera le tampon d'ouate jusqu'en c. Ainsi préparé et rempli de gélatine l'appareil est prêt à fonctionner (lig. 30).
L'o|iération que nous allons décrire comprend les phases suivantes :
1° Luiiwfn'r l'i nclatinc;
2° Faire le ride dans le lutte, el chasficr l'air du milieu nutritif;
(1) L'iiir n'nlnuit lilli'e sur le t;irnpoii il niiatc.
(2) Ce quo nous (lirons (le hi f/rliitinr sera facilcnieiit ii[)pli(|UP à la gélose, le cas r'cliéaiit.
TECHNIQUE DES CULTURES
3" Faire solidifier de la gélatine dans un courant de gaz inerte CO- ou H ; 4" Ensemencer par piqûre à Vabri de Vair;
b" Fermer le tube, qu'on laissera vide ou rempli de CO- ou H.
Les instruments essentiels de l'opération sont donc la machine à faire le vide (pompe à mercure ou trompe à eau) et le gazomètre à CO- ou H.
a) Nous décrirons d'abord la manœuvre avec la pompe à mercure.
1° La première opération consiste à fermer le tube en c audessous du tampon de ouate ; on le porte ensuite à l'éluve ou dans un bain-marie pour liquéfier la gélatine.
2° On suspend la 36. tubulure A munie de
son tampon de ouate au caoutchouc S de la machine pneumatique à mercure ; on relie d'aut re part le flacon à gaz hydrogène ou acide carbonique à de la pompe à mercure: de la sorte le tube communiquera facilement par un jeu de robinets, que nous n'avons plus à expliquer, soit avec la machine à vide, soit avec le gazomètre. On dispose l'extrémité inférieure du lulie dans un bain-marie tiède, de façon à maintenir la
CULTURE DES MICROBES ÂNAÉRODIES
gélatine en liquéfaction jusqu'à ce que louliair en soit chassé, et on commence à l'aire le vide : la ifolatine entre bientôt en ébuUition, et de grosses bulles sont projetées vers l'extrémité supérieure du tube : on évite ces projections en chau fiant l'extrémité supérieure du tube avec un jet de gaz; au cas où l'ébullilion serait trop forte on l'arrêterait en laissant entrer du gaz inerte.
Le vide étant fait, on pourra remplir le tube à deux ou trois reprises avec le gaz inerte qu'on enlèvera ensuite.
3° On ferme la communication avec la machine à vide; on fait passer CO- ou H dans le tube, en même temps qu'an plonge l'extrémité inférieure du tube dans l'eau froide : la solidification de la gélatine se fait sous le courant du gaz inerte.
4° Lorsque la gélatine est prise on dispose un fil de platine d'une longueur telle qu'il puisse atteindre la surface de la gélatine, étant introduit par c et pénétrer dans son épaisseur. On stérilise ce fil et on le charge de la semence. On soulève alors le flacon à eau du gazomètre de façon à produire une légère pression dans le tube; on fait un trait de lime sur c, on flambe le verre en cet endroit et on casse la pointe avec une pince flambée : le gaz s'échappe par l'orifice et empêche Feutrée de l'air. On introduit le fil de platine avec précaution dans le tube et on pique la semence dans le cylindre de gélatine. On retire le fil, et on ferme c (fig. 30 bis).
.H" On peut alors ou vider complètement le tube du gaz inerte et le fermer ensuite; en fondant <l, ou le fermer immédiatement en d en le laissant plein du gaz CO- ou II.
b) L'opération avec la trompe à eau es! nlisoliimentla même. Kermcz d'abord c et li((uéliez la gélatine ; disposez alors le tul)e. en coinmuniratinii avec la trompe et le gazomètre par la hiiuilnie A
TECIlNinUE DES CULTURES.
au moyen d'un des deux appareils que nous avons c indiqués, soil le tube
eu TFE avec ses deux robinets, soit le tube ABC avec son robinet à j\ trois voies 0.
La marche générale de l'opération est identique à celle que nous avons décrite ci-dessus:
on fait le vide dans la gélatine liquéfiée ; on passe à deux ou trois reprises du gaz CO- ou H dans le tube ; on extrait ensuite ce gaz; on laisse solidifier la gélatine en la maintenant en communication avec le gazomètre, et lorsqu'elle a fait prise on l'ensemence par l'extrémité c qu'on a ouverte et flaml'i>'. 36 bis. hée, en ayant soin de
donner au courant de gaz une pression plus forte à ce moment. On ferme c ; et on vide l'appareil ou on le laisse rempli du gaz inerte ; on le détache enfin par un trait de chalumeau sur cl.
