MÉTHODE DE GRAM

ce troisième temps est quelquefois très long. Les tissus et les microbes qui ne « prennent pas le Gram » sont décolorés. On peut recolorer le fond. On éclaircit par le xylol, etc.

b. Méthode de Gram modifiée par Lôffler. — F. Lôffler (1906) remplace le violet de gentiane par le violet de méthyle 6B ou BN dissous dans l’eau phéniquée à 1/2 p. 100 dans la proportion de 1/10. 11 remplace aussi le Gram par le mélange de Unna (iodure de potassium à 5 p. 100 et eau oxygénée) qui fait agir l’iode à l’état naissant,

c. Méthode de Gram modifiée par Nicolle (1895) . — Il vaut mieux employer la méthode de Gram avec les modifications suivantes. Le violet phéniqué inaltérable est substitué au liquide d'Ehrlich ; la solution de Lugol est plus forte ; Y alcool-acétone inaltérable, et décolorant très rapidement, est substitué à l’alcool. L’opération est plus rapide, plus sûre ; les préparations ne brunissent pas à la longue, et la triple coloration est possible (voir coupes, p. 270).

Fixer, colorer, quatre à six secondes avec :

Sol. saturée de violet de gentiane dans alcool à 95° 10 cent, cubes.

Eau phéniquée à 1 p. 100 100 —

Différencier, sans laver, quatre à six secondes avec le liquide de Lugol fort 1 :

Iodure de potassium. .....

Iode

Eau distillée

qu’on renouvelle une ou deux fois.

Décolorer par l’alcool absolu additionné d’un cinquième d’acétone (< alcool-acétone ).

Si on veut une double coloration (exsudats, frottis), on fait agir rapidement la solution :

Sol. saturée d’éosine dans alcool à 95° 50 cent, cubes.

Alcool à 95° 100 —

1 Les solutions bromo-bromurée, iodo-bromurée, bromo-iodurée ont les mêmes propriétés que la solution iodo-iodurée.

2 grammes

Fig. 134.

Préparation d’un pus blennorragique coloré par la méthode de Gram-Nicolle. Schéma.

Les Gonocoques sont rouges et intra-cellulaires; les Staphylocoques pyogènes sont violets et extracellulaires. Gr. = 1 400 D.

La figure 134 montre fine préparation colorée par la méthode Gram-Nicolle. Les cellules, les Gonocoques (qui ne prennent pas le Gram) sont rouges, les Staphylocoques (qui prennent le Gram) sont restés violets.

Laver, déshydrater, monter.

Si on a un mélange de deux organismes dont l’un prend le Gram, et l’autre non ( Bacille de la morve et Staphylocoque, par exemple) on recolore avec :

Sol. saturée de fuchsine dans alcool

à 95° . . . 5 cent, cubes.

Eau distillée 100 —

à la place de l’éosine qui ne donnerait qu’un fond diffus.