Ztschr. f. iviss. Mikr., VII, p

3. Nocht, Zur Farbung der Malariaparasitcn. (Jeniralblatt f. Bakt., XXIV, p. 839-817, 1898, et XXV, p. 764, 1899.

montra que, dans le bleu polychrome et dans les solutions mûries de bleu de méthylène, il s'est formé un nouveau corps, qu'il nomma rouge du bleu de méthylène, sans se prononcer sur sa nature. Ce corps peut être extrait en agitant la solution de bleu de méthylène avec du chloroforme : ce dernier se colore en rouge et abandonne, par évaporation, un corps qui, associé au bleu de méthylène et à Téosine, produit à coup sur la coloration de Romanovsky. Donc, pour réussir la méthode de Romanovsky, il est nécessaire d'employer une solution de bleu de méthylène, renfermant du rouge du bleu de méthylène.

Nous étudierons plus loin, en traitant des colorants neutres, la nature de la réaction de Romanovsky. Pour le moment, nous devons chercher à savoir ce qu'est le rouge du bleu de méthylène ' découvert par Nocht. En réalité, on discute encore sur la véritable nature de ce corps. Il semble pourtant résulter des recherches de Giemsa, de Mac Neal et de Pappenheim, ({ue c'est un mélange d'azur de méthylène et de violet de méthylène. Au contraire, pour Michaelis 2, ce serait de l'azur de méthylène : ce qui fait l'erreur de Michaelis, comme Ta montré Pappenheim, c'est qu'il attribue à l'azur de méthylène, contenu dans le bleu polychrome, la propriété de colorer métachroraatiquement les granulations des labrocytes. Or Pappenheim a démontré que l'azur de méthylène pur ne donne pas celte coloration mélachromatique rougo, mais colore les granulations en bleu. Il y a donc, dans le bleu polychrome de Unna et dans les préparations analogues, trois corps en présence : du bleu de méthylène non altéré, du violet de méthylène et de l'azur de méthylène.

L'azur de mélhylène n'est donc pas autre chose qu'un produit de Foxydaliou du bleu de méthylène en solution alcaline. On l'obtient rapidement en traitant, à froid ou à chaud, le bleu de méthylène par la jiotasse, la soude, la lilhine, le borate de sodium, etc. Dans les vieilles solutions de bleu de méthylène, il se forme spontanément, sous rinfluence de petites quantités d'alcali qui proviennent du verre.

La propriété essentielle de l'azur de méthylène, celle qui lui donne une si grande importance dans la technique moderne, c'est qu'il produit une coloration spécifique de la chromatine et en général des substances dites azurophiles. Cette coloration spécifique ne peut se produire qu'en présence d'une couleur acide, particulièrement de l'éosine. Il faut bien savoir pourtant que l'éosine n'agit pas ici comme colorant, mais comme agent chimique et probablement comme mordant, car on peut la remplacer par d'autres corps, tels que la résorcine, la pyrocatéchine, rhydroquinone, etc. Non seulement la coloration de la chromatine est la plus intense

1. Ne pas le confondre avec le rouge de méthylène qui ne joue aucun rôle dans la réaction et qui est un composé bien défini.

2. Michaelis, Das Methylenblau und seine Zersetzungsprodukte. Centrabl . f. Bakt., Orig., XXIX, p. 763-769, 1905.

de toutes celles (ju'od puisse obtenir, mais encore elle est spécifique^ jjoiir la chromaline des Protozoaires. En effet, tandis que la cliromatine des Métazoaires se colore })ar une quantité de couleurs basiques, y compris Tazur et le bleu de toluidine, celle des Protozaires ne se colore que par le mélange d'azur de méthylène et d'éosine, non par l'azur seul, ni par aucune autre couleur d'aniline basique. Nous étudierons plus loin la nature de cette coloration, ainsi que celle des corps azurophiles.

On nomme corps azurophiles ceux qui ne peuvent être colorés que par Véosinate d'azur et non par d'autres colorants neutres ou basiques. L'azur seul, sans éosine, peut colorer vitalement les granulations azurophiles des leucocytes, mais non la chromatine des Protozoaires. Dans ces colorations vitales, les granulations sont colorées en bleu et non en pourpre.

Ce qu'il faut bien savoir, et ce qui a bien été mis en évidence par Pappenheim, c'est que l'azur seul n'est pas métachromatique, c'est-à-dire qu'il colore en bleu et non en rouge violacé la mucine et les granulations des labrocytes. L'azur seul ne colore pas la chromatine des Protozoaires; mais il coloi'e celle des Métazoaires et la plupart des corps basophiles en bleu, mais non en pourpre.

On a proposé de nombreux procédés pour préparer des solutions de bleu de méthylène riches en azur : tous reposent sur ce fait que le bleu de méthylène se transforme plus ou moins complètenient en azur de méthylène, en présence des alcalis et de l'oxygène. Ainsi, le bleu polychrome de Unna (p. 390), qui est très riche en azur, est préparé par l'action du carbonate de potassium sur le bleu de méthylène, à la température de l'ébullition. Michaelis prépare de même l'azur, au moyen de la soude caustique. Ces solutions, très fortement alcalines, doivent être neutralisées pour servir à la réaction de Romanovsky.

Un très bon moyen de préparer l'azur est le procédé dit du bleu Borrel, introduit dans la technique par Laveran 2. H repose sur l'action de l'oxyde d'argent sur le bleu de méthylène. Bernthsen s, à qui nous devons la plupart de nos connaissances théoriques sur le bleu de méthylène et ses dérivés, a montré en effet ({ue l'oxyde d'argent met en liberté, beaucoup mieux que les alcalis forts, la base du bleu de méthylène, qui est la tétraméthylthionine. Ce dernier corps, qui est très instable, se transforme en grande partie, par oxydation, en azur de méthylène. J'ai longuement décrit, en 1908 ^, la préparation du bleu à

1. Bien entendu il n'est ([ucstion ici que des couleurs d'aniline. Cela n'exclut pas la possibilité de la coloration par le carmin et l'hématoxyline ferrique.