Laver à l'alcool à o0°, puis à Teau
3. Mordancer une heure et demie dans l'alun de fer à 3,5 ou 5 p. lUO;
4. Colorer cinq minutes au plus dans une solution à 1 p. 100 d'hématoxyline dans l'alcool à 96-, additionnée d'une solution aqueuse de carbonate de lithium jusqu'à obtention d'une teinte vineuse ;
0. Différencier sous le microscope dans l'alun de fer très dilué; 6. Laver, déshydrater, monter au baume.
Méthode de Minchin. — Minchio a exposé longuement ses idées sur la structure cytologique des Trypanosomes et sur les meilleures méthodes pour la mettre en évidence, dans les deux travaux cités plus haut (p. 481, notes 2 et 3). Je ne saurais trop engager ceux qui veulent se livrer à Tétude ap})rofondie de ces organismes, à lire les remarquables publications de Minchin. On y trouvera Texposé détaillé et la critique des procédés de préparation des Trypanosomes. Je ne donne ici que les principes essentiels des méthodes les plus importantes.
Fixation. — Minchin a obtenu les meilleurs résultais, en fixant en deux temps, d'après Weideni^eich (p. 629).
!"'■ temps. Fixation osmique. — Exécuter ra|)idement les frottis et, sans perdre de temps, plonger la lame dans un bocal bouché à Témeri, au fond duquel on a versé quelques gouttes de solution
\. Rosenbusch. Trypanosomen tStudien. Arch. f. Prolisienkunde, XV, p. 263- 296, 1909.
•2. Je crois quon peut, sans inrouvéniont, prendre de l'alcool à 95 ou mênieà90.
d'acide osmiqiie à A p. 100, à laquelle on ajoute 1 goutte d'acide acétique cristallisable par 20 gouttes. Laisser le frottis exposé aux vapeurs osmiques pendant 30 à 60 secondes.
2" temps. Fixation alcoolique. — Transférer le frottis dans un bocal d'alcool absolu (fig. 245), fixer pendant 10 minutes, puis sécher.
La fixation osmio-alcoolique, suivie de la dessiccation, convient surtout pour les préparations qui doivent être colorées au Romanovski. Elle a, d'après Minchin, finconvénient de lixer incomplètement le noyau. Lorsqu'on veut colorer par un autre procédé (hématoxyline, méthode de Twort), il faut faire des frottis humides et les fixer au subhmé ou au Mann (p. 285). Dans ce cas, il est préférable d'exécuter les frottis sur lamelle, afin de pouvoir les déposer brusquement face en dessous dans le fixateur. Comme Minchin le fait remarquer avec raison, les lames ne peuvent être immergées facilement que par une extrémité et il en résulte toujours des déformations dans les éléments.
Les meilleurs fixateurs liquides sont le sublimé acétique (p. 282), le sublimé alcoolique de Schaudinn (p. 283), et le liquide de Mann ^ (p. 285).
Coloration. — 1. Roman ovsky. — Minchin reconnaît que cette méthode est celle qui démontre le mieux les caractères généraux des Trypanosomes, surtout après la double fixation osmioalcoolique, suivie de la dessiccation. Mais, comme nous venons de le dire, il lui reproche d'exagérer et de voiler les détails de la structure nucléaire. Notons que les frottis ainsi fixés se colorent beaucoup plus intensément que les frottis simplement séchés, aussi faut-il surveiller attentivement la coloration, sous peine de voir le cytoplasme devenir opaque. Minchin emploie le liquide de Giemsa dilué dans la proportion de 1 goutte pour 1 cm^ d'eau distillée (p. 408). 11 colore de 3 à 18 heures, ou moins, suivant la méthode de fixation; il lave rapidement à l'eau distillée, différencie quelques secondes dans le tannin-orange de Unna (Griibler), puis lave une minute ou deux sous le robinet. On sèche ou bien on déshydrate par l'acétone et on monte au baume.
