CHAPITRE PREMIER

TECHNIQUE BACTÉRIOLOGIQUE

Nous serons très bref sur ce chapitre, qu'on trouvera traité avec de grands détails dans d'excellents ouvrages classiques *. Nous ne donnerons donc qu'une sorte d'aide-mémoire des colorations les plus usuelles, en insistant sur les procédés nouveaux. Il est bien entendu que, pour nous, la technique bactériologique est limitée aux procédés d'étude des Bactéries proprement dites, à l'exclusion des Protozoaires et des Champignons.

Nous laissons complètement de côté les méthodes de culture, nous bornant aux examens les plus courants.

La méthode fondamentale^ en bactériologie, est celle des frottis desséchés : le produit à examiner est étalé en couche mince sur une lame propre, desséché rapidement, fixé, puis coloré. La coloration des Bactéries dcnu les coupes se fait généralement par les mêmes méthodes que pour les frottis.

Principes de la coloration des Bactéries. — Il n'y a pas de méthodes spéciales pour la coloration des Bactéries : on utilise simplement les procédés histologiques généraux et principalement les méthode des colorants basiques (p. 382). La méthode de Jiomanovsky colore admirablement toutes les Bactéries; elle constitue souvent un procédé de recherche excellent, quoique généralement méconnu.

L'extrême résistance des Bactéries aux agents destructeurs a favorisé peu à peu l'emploi de méthodes brutales, aggravées encore par l'inexpérience de beaucoup d'opérateurs. Les Bactéries résistent tant bien que mal au flambage, à l'ébullilion, etc., mais les autres éléments du pus ou des liquides organiques sont

1. Bard, Précis des examens de laboratoire, et Bezançon. Précis de microbiologie clinique. Paris, INIasson, Collection des précis médicaux.

M. Langerox. — Précis de Microscopie. 44

délruils ou rendus méconnaissables. Les résullals oUenus seraient autremenl inslructifs si, en procédant avec un peu de soin, on ménao;eait les éléments leucocytaires ou autres. La méthode de Romanovsky (procédé panoptique et panchrome de Pappenheim) permet justement d'obtenir, avec le minimum de manipulations, la meilleure conservation possible de tous les éléments et de leurs rapports avec les Bactéries. Bien entendu, elle ne peut remplacer les procédés de dilférenciation, destinés à mettre en évidence telle ou telle Bactérie.

La théorie de la méthode de Gram a été laite p. 394; notons seulement ici qu'il y a, chez les Bactéries, parallélisme entre la réaction de Gram d'une part et, d'autre part, Tacido-résistance, Talcali-résistance et la résistance au ferment digestif.

Chaque fois que la méthode de Gram donne un résultat incertain et laisse des doutes, la méthode de Claudiiis (p. 396) tire d'embarras. Dans les deux cas la différenciation est suffisante lorsque, dans les leucocytes, le noyau seul reste coloré.

Fixation. — 11 est d'usage courant de fixer à la flamme les frottis renfermant des Bactéries. En principe, ce procédé est excellent, mais, en piati({ue, il est généralement très mal appliqué et transformé en llambage. A l'origine, on opérait presque exclusivement sur lamelles, ce qui facilitait beaucoup la fixation par 1^ chaleur, suivant le procédé classique : passer la lamelle trois fois dans la flamme d'un bec Bunsen, d'un mouvement lent, comme si on coupait du pain. Actuellement, on étale plutôt les produits sur lames, ce qui rend la fixation à la flamme bien plus difficile à pratiquer. Valcool méthy ligne fixe très bien en quelques secondes : on arrose le frottis avec ce réactif et on laisse évaporer.

Prélèvement. — Les liquides à examiner doivent être puisés

Fig. 255. - Fabrication des pipettes stériles, a. tube stérilise en réserve;

b, tube étiré; c, pipette isolée.

dans des pipettes stérilisées. Pour les fabriquer, on coupe un morceau de tube de verre de 5 à 6 mm. de diamètre en fragments de 20 cm. de longueur (cinq fragments dans un mètre). On bouche les deux extrémités avec un tampon d'ouate (fig. 255, a). On

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stérilise au four Pasteur ou à Fautoclave; on peut ainsi conserver et transporter facilement une provision de tubes ff[ stériles, qu'on étire au moment de Temploi.

Pour les prélèvements, faire un étranglement en arrière du coton, sans le brûler (iig. 256, B), puis faire un eftilure au milieu du tube, de façon à obtenir deux pipettes (tig. 255, h). W sera facile ensuite de sceller les deux parties effilées et d'enfermer le prélèvement dans la partie renflée. Dans certains cas, on emploiera la pipette à boule : pour la fabriquer, on commence par fermer un morceau de tube en TelTilant (fig. 258). On chautïe ensuite fortement la partie moyenne et, lorsqu'elle est portée au rouge^ on souffle la boule. On peut faire ensuite un étranglement en arrière de la place réservée au tampon de coton.

Travail du verre. — La fabrication des pipettes ordi- v» naires et à lioules est une opération très facile. Tout le ''' secret consiste à avoir une flamme assez chaude, bien réglée et à tourner continuellement le verre entre les doigts, tant qu'il est dans la llamnie; ne le retirer qu'au moment de l'étirer ou de le souftler, ces deux opérations devant toujours être elfecluées en dehors de la flamme. Le chalumeau à gaz n'est pas indispensable, on opère très bien avec un bec Bunsen ordinaire (lig. 2.j7). Si on n'a pas le gaz, on se servira d'une lampe éolipyle (lampe à souder) alimentée par l'essence minérale. Les lampes à alcool donnent une flamme relativement froide, avec laquelle on ne peut travailler que des tubes en verre mince et bien fusible. Il existe de petits chalumeaux à alcool très pratiques, soit le chalumeau de Goster, soit le petit appareil très puissant et très commode, imaginé par Souel de Lyon '.

Examen du pus. Coloration des Gonocoques ^ig. 256. - piet des Bactéries pyogénes. — Faire les frottis, sées^^'C ïôucomme il est dit p. 645, en prélevant le plis avec une chondecoton -, pipette stérile ou un fil de platine flambé -. Colorer ment. '^ au Romanovsky (p. 404), à l'azur II alcalinisé (p. 389) par la méthode de Sabrazès (p. 625) ou par le bleu de