CHAPITRE III

Il peut être utile pour le micrographe, et même pour le médecin, de savoir examiner extemporanément et colorer une coupe de tissus végétaux ou de rechercher un Champignon parasite dans une plante. Aussi, je donnerai quelques indications très sommaires de technique botanique élémentaire.

Fixation. — Elle diffère suivant le but qu'on se propose. Pour les recherches cytologiques, on se sert des fixateurs histologiques; pour les travaux anatomiques, il suffit de conserver le matériel dans Talcool ^ ou dans un mélange à parties égales d'alcool, de glycérine et d'eau.

Inclusion. — Les tissus végétaux peuvent être inclus à la paraffine et débités en coupes sériées, exactement comme les tissus animaux, pourvu qu'ils ne soient pas trop lignifiés.

Pour un examen rapide, ce mode d'inclusion n'est pas nécessaire ; on obtient d'excellentes coupes au microtome à main ou au microtome de Lelong, après enrobage dans la moelle du sureau (p. 327).

Pour couper les objets durs {bois, graines), il faut prendre un petit fragment; humecter la surface de section avec de l'eau ou de la glycérine, suivant le cas; faire des coupes aussi minces que possible et de très peu d'étendue, pour ne pas casser le tranchant du rasoir. Prendre une lame solide, à dos large (fig. 155, y) et à faces planes. Ne pas attaquer l'objet par la tranche, mais par la surface. Si le couteau pénètre trop, le retirer sans

1. Si le matériel vient à durcir au point d'être très fragile, il sui'rit, pour le ramollir, de le plonger quelque temps dans leau. On peut le remettre ensuite dans l'alcool fort, sans qu'il redevienne friable (de Vries).

M. Laxgkcdn. — Précis de Mioroscopie. -iO

722 INIKTHODES SPÉCIALES

essayer d'achever la coupe, car celle-ci serait Irop é[iaisse el ou risquerait crabimer le trauciiaut En ayant soin de tirer le rasoir comme il a été dit p. 'S±H, on arrive à enlever de petits copeaux très minces et surtisamment étendus pour Texamen microscopique.

Les matériaux lignifiés, conservés dans Talcool, peuvent être ramollis suffisamment par un mélange à parties égales d'alcool et de glycérine. Couper avec un rasoir à dos très large (tig. 155, y) et à faces planes.

Pour rincliision à la paraffine d'objets non fixés histologiqueinent, il est indispensable de prendre des tissus parfailenienl frais et bien lurgides et de les déshydrater très progressivement, en commençant par de l'alcool à 25°, auquel on ajoute peu à peu de l'alcool à 95° par petites portions et en agitant soigneusement.

Les coupes d'anatomie végétale ne peuvent généralement pas être collées sur lames : en eflet, les cellules doivent être vidées par l'hypochlorite de sodium et la plupart des colles ne résistent pas à ce réactif. x\ussi, la [)lupart du temps, emploie-t-on les coupes non collées, faites à la paraffine ou dans la moelle de sureau.

Bain d'hypochlorite. — Il est essentiel d'employer l'hypochlorite de sodium ou de potassium et non l'eau de Javel ordinaire, qui n'est généralement qu'une solution très impure d'hypochlorite de chaux. On pourrait toutefois précipiter la chaux par le carbonate de sodium ou de potassium et employer la liqueur filtrée.

11 ne faut pas prolonger trop longtemps l'action de l'hypochlorile, surtout avec les tissus jeunes qui |)ourraient être détruits. La durée des bains variera donc de quelques secondes à cinq ou dix minutes.

Laver ensuite dans l'eau acidulée par l'acide acétique ou dans le bisulfite de soude, puis à l'eau ordinaire.

Coloration. — 1" Carmin et vert d'iode. — La méthode classique est la double coloration par le carmin aluné et le vert d'iode (ou le bleu de méthylène aluné).

1° Colorer une heure au moins au carmin aluné de Grenacher (p. 371).

2" Laver rapidement à l'eau.

3° Colorer quelques secondes, dans un verre de montre renfermant quelques centimètres cubes d'eau à laquelle on a ajouté un peu de vert d'iode.

4" Monter à la glycérine gélatinée ou au sirop d'Apathy.