Voir p. 730, note

3. Se prépare en arrosant d'ammoniaque de la tournure de cuivre. Doit dissoudre le coton.

raleinent mélangée d'une grande quantité de cldtinc, aussi ne donnet-elle aucune des réactions précédentes.

I/héinalun colore plus ou moins toutes les celluloses non lignifiées.

Membranes cutinisées. — Le Sudan III ' en solution alcoo!i(jue les colore en rouge intense, la cyanine en bleu.

Membranes lignifiées. — En f^énéral, les colorants directs de la laine et de la soie colorent bien le bois, tandis que les colorants directs du coton colorent les parties non lig^nifiées. 11 est bon de fixer la couleur par un bain d'alun à 10 p. lUO. Les meilleures colorations, pour mettre le bois en évidence, sont les suivantes : safranine anilinée (diiïérenciation dans l'alcool cblorbydriquc); carmin aluné et vert d'iode, vert de méthyle ou bleu de méthylène (p. 722): vert solide et dellapurpurine (p. 723); on peut encore colorer les coupes pendant quinze minutes dans une solution alcoolique concentrée de cyanine, laver à l'alcool, puis colorer quinze minutes dans une solution de rouge congo dans l'ammoniaque à 5 p. 100, alcool, xylol, baume. Les membranes lignifiées sont bleues, les autres rouges,

La fuchsine ammoniacale donne aussi une bonne coloration du bois, du suber et de la cutine : on sature d'ammoniaque une solution alcoolique de fucbsine, jusqu'à obtention d'une coloration jaune paille. Cette solution ne se conserve que pendant quelques jours. Colorer quelques minutes, laver à l'eau distillée, puis à l'eau acétifiée, et colorer de nouveau, pendant quinze minutes, par le bleu de méthylène. Monter au baume. Notons enfin que le bois et le suber prennent le Gram.

Les réactions caractéristiques de la lignification sont les suivantes : coloration pourpre intense par l'action successive de la phloroglucine en solution alcoolique puis de l'acide chlorhydrique étendu: coloration jaune par le sulfate d'aniline suivi de l'acide sulfurique étendu. La solution aqueuse de fuchsine donne, après diOerenciation par l'alcool picriqué (une partie de solution alcoolique saturée pour deux parties d'eau), une coloration exclusive du bois.

Liège. — Se colore en rouge par le Sudan III et la teinture d'alkanna, en bleu par la cyanine en solution acjueuse, en brun par l'iode et l'acide sulfurique. 11 est insoluble dans l'oxyde de cuivre ammoniacal.

Il se colore électivement dans le violet de gentiane ammoniacal ou le vert acide ammoniacal : on les prépare en ajoutant peu à peu de l'ammoniaciue à une solution alcoolique de ces colorants jusqu'à décoloration presque complète. Après une aciion de (juelques minutes, on lave à l'acide chlorhydrlcjoe à 5 p. 10) pour dillcrencier la couleur; en lavant simplement à l'eau, le bois reste coloré.

Avec le vert acide, on peut faire une double coloralion, en ajoutant extemporanément, à la solution ammoniacale, un peu de solution aqueuse concentrée de rouge congo. On colore cinq minutes, puis on lave à l'eau. Le bois et le suber sont verts, le reste jaune.

Composés pectiques. — Ils se comportent comme des acides et prennent les colorants basi(]ues (de préférence en solution acidulée par 1 p. 100 d'acide acétique) mais non les colorants acides comme la cellulose. Le meilleur réactif de ces composés est le rouge de ruthénium, la coloration ainsi ohtenue se conserve très bien dans le baume. Le

\. Ce réactif a été introduit dans la technique botanique par Buscalioni (^Malpighia, XII, 1898. très nombreux détails dans ce mémoire).

violet neutre (p. 723) les colore en rouge brunâtre. Le bleu de nnplilylène les colore niétachromatiquement.

Béactions différentielles : la cellulose pure ne se colore pas par le bleu de méthylène et les matières pectiques ne prennent pas le congo ammoniacal.

Tannin. — Les composés lanniques se colorent en noir bleuâtre par le perchlorure de fer, en brun par le bicliromate de potassium, en rouge par la potasse, en bleu foncé par le bleu de méthylène. Ce dernier colorant donne une réaction très nette, môme en solution très étendue (1 p. 500000), avec des tissus frais, mais il ne faut pas oublier qu'il colore de même la phloroglucine.

Matières grasses. — Le réactif le plus commode est le Sudan III en solution alcoolique, qui les colore en rouge vif (ce réactif colore aussi les cires, les résines, la cutine, la subérine et le latex, mais ne colore ni la cellulose, ni la lignine, ni les mucilages). On peut faire une double coloration par le bleu de méthylène et le Sudan (A. Meyer). Fixer Tobjet sur la lame par une goutte de solution formolée, ajouter une goutte de bleu de méthylène à 0,5 p. 100 et colorer dix minutes; colorer ensuite par le Sudan alcoolique, en surveillant au microscope.

Huiles. — Les huiles grasses se colorent en rouge par le Sudan ; elles sont insolubles dans l'acide acétique et en partie solubles dans l'alcool: les huiles éthérées se dissolvent dans l'acide acétique et Talcool, elles se colorent en bleu par la cyanine.

Résines. — Elles se colorent en rouge par le Sudan III et la teinture d'alkanna.

Gommes. — 11 y en a deux sortes : les gommes pectiques qui se colorent comme les mucilages pectiques (rouge de ruthénium) et les gommes cellulosiques (gomme adragante) qui se colorent à la fois par le rouge de ruthénium et par les colorants de la cellulose.

Les vraies gommes ne se colorent pas par la coralline sodée et prennent une couleur rouge intense avec le mélange de phloroglucine et d'acide chlorhydrique. Lutz distingue les gommes de la cellulose par l'action successive du rouge neutre de Cassella ' et du vert acide J3E de Poirrier : la gomme est rouge, la cellulose pure verte.

Mucilages. — Les mucilages cellulosiques (les plus rares, salep) présentent les réactions de la cellulose, ils sont biréfringents; les mucilages pectiques (les plus fréquents, se gonflent et donnent des solutions filantes) se colorent par les colorants basiques et par le rouge de ruthénium (bonne conservation dans le baume); les mucilages callosiques se dissolvent sans se gonfler, se colorent par la coralline sodée et le bleu d'aniline en solution acétiflée, mais non par les colorants basiques. La distinction n'est pas toujours facile, à cause des mélanges fréquents de ces mucilages entre eux et avec les gommes.

Inuline. — Nous avons déjà mentionné (p. 207) les propriétés optiques des sphéro-cristaux d'inuline, obtenus en faisant macérer dans l'alcool des fragments un peu épais de tubercules de Dahlia. L'inuline ne se distingue optiquement des sphéro-cristaux de phosphate de calcium que par une biréfringence plus forte. On peut encore caractériser chimi([uement ces sphéro-cristaux en traitant les coupes d'abord par le naphtol a

L 0 gr. 2iî dans 20 cm' d'alcool et 30 cm' d'eau. 2. 0 p-r. 20 dans 20 cm' d'alcool et 30 cm' d'eau.

ou le thymol en solution alcooli(iue à 15 p. 100, puis par l'acide sulfurique concentré. La coloration obtenue est le violet foncé avec le nnphtol et le pourpre foncé avec le thymol. On peut aussi traiter les coupes à froid par une solution alcoolique d'oreine ', puis à chaud par l'acide «hlorhydrique : coloration rouge orangé.

Sucres. — Molisch les caractérise comme l'inuline par l'action successive du naphlol a ou du thymol et de l'acide sulfurique concentré. La réaction est nette et rapide (deux minutes), avec la saccharose, la lactose, la maltose, la dextrose et la lévulose; elle est moins rapide (15 à 30 minutes) avec les autres hydrates de carbone, qui doivent d'abord être transformés en sucre par l'action de l'acide sulfurique. Celte réaction est très sensible, elle permet de déceler 0.00001 p. 100 de sucre.

Oxalate de calcium. — Ce sel se présente généralement sous forme de raphides ou de druses (masses hérissées de pointements cristallins) : ces cristaux sont insolubles dans l'eau et dans l'acide acétique, assez solubles dans l'acide chlorhydrique. L'acide sulfurique les transforme (à chaud) en une masse d'aiguilles de gypse (sulfate de calcium). Pour distinguer l'oxalate de calcium du sulfate de calcium, employer une solution de chlorure de baryum dans Tacide chlorhydrique : ce réactif dissout l'oxalate et donne avec le sulfate un précipité de sulfate de baryum. En lumière polarisée, les cristaux d'oxalate de calcium peuvent, sous certaines orientations, ne pas s'illuminer entre les niçois croisés.

Phosphore et phosphate de calcium. — Voir p. 671 la méthode de Mac Callum. On peut aussi, d'après Lilienfeld et Monti, traiter les coupes par le molybdale d'ammonium pendant une heure au plus, les laver avec soin, puis les plonger dans une solution à 20 p. 100 d'acide pyroi^allique. La coloration des parties phosphorées varie du jaune au noir. On peut conserver les préparations dans le baume.

Le molybdate d'ammonium seul donne bien un précipité jaune caractéristique avec les phosphates, mais il ne faut pas le confondre avec la réaction xanthoprotéique, due à l'acide azotique du réactif. Le tartrate de potassium empêche la formation du précipité.

Enfin une réaction très sensible est celle du phosphate ammoniacomagnésien. Traiter les coupes par un mélange de 25 vol. de sol. aq. conc. de sulfate de magnésium, 2 vol. de sol. aq. conc. de chlorure d'ammonium, 15 vol. d'eau. On obtient des cristaux caractéristiques en forme d'X ou de couvercle de cercueil.

Quinine. — D'après Pozzi-Escot, ce corps donne, avec le chlorure de platine, des granulations fortement biréfringentes.

Réactions des principaux colorants :

Alkanna (teinture) : liège, matières grasses, résines.

Bleu coton : callose.

Bleu de métliylène pw : tannin : ahiné : bois et suber.

Carmin alunc : membranes non ligniliées.

Congo : bleuit avec les acides; Conjo ammoniacal : cellulose,

CoralUne sodée : callose (coloration fugace).

1. L'orcine est le princiiic colorant de Torseille. Cette dernière est le produit brut de la fermentation des Licliens à orseille (p. 401). au contact de l'air, de Tammoniaque et de la chaux. Ne pas confondre avec Vorcéine qui est produite aux dépens de l'orcine par l'action combinée de l'air et de l'ammoniaque. Le Persio est de l'orseille séctiée et pulvérisée.

730 Mlh[IODES SPKCIALIiS

Cyanine : bois, suber^ membranes cuLinisées, élaïoplasles, huiles élhérées.

Dellaparpurine (alcalinisée) : membranes non lignifiées.

Fuchsine ammoniacale : bois, suber, culine.

Phlovoijlucine et acide chlorliydriqiie : bois, gommes, inuline (coloration fugace).

Bouije de ruthénium : composés pecliques.

Safranine : bois et suber.

Sudan III colore électivement : suber. cutine, graisses, résines, huiles, cires; ne colore ni les tannins, ni les membranes non subérifiées.

Vert d'iode, vert de méthyle, vert solide : bois et suber.

Violet neutre : composés pectiques, bois et suber.

Méthode de Gram : bois et suber.

Cryptogames. — Toules les fois qu'il ne s'agit pas de recherches cytologiques, le lactophénol de Amann rend les plus grands services, quel que soit le groupe de Cryptogames qu'on désire étudier. Non seulement ce réactif facilite la conservation et l'étude microscopique du matériel frais, mais encore il permet de restaurer, d'une manière surprenante, le matériel desséché, conservé dans les herbiers. L'imbihilion par le lactophénol à froid, ou, dans certains cas, à chaud et même à l'ébullition, rend aux cellules leur turgescence et restitue aux organes la forme qu'ils avaient à l'état frais Ce liquide est donc indispensable })Our toutes les recherches de morj)hologie. Les préparations ainsi obtenues se conservent indéliniment; il suffit de les luter au lut de Krônig.

Les recherches cytologiques se feront par les méthodes habituelles; en outre, pour l'étude des éléments sexuels mobiles (anthérozoïdes), la méthode des frottis humides pourra rendre de signalés services, à condition que ces éléments soient en suspension dans une petite quantité de liquide.

Pour les Champignons^ se reporter à la technique mycologique (p. 702 à 720). J'ajouterai seulement quelques détails sur la manière de colorer les Champignons dans les lissus végétaux. Cette méthode^ s'applique surtout aux Peronosporées et utilise la richesse en callose de leur membrane. Les fragments -, frais ou desséchés, sont bouillis dans l'alcool pour enlever l'air. Blanchir pendant six à douze heures dans l'acide chlorhydrique au tiers, additionné de 5 p. 100 de chlorate de potassium. On con-