OU LIQUEUR DE KLEINENBERG

L’acide picrique est, comme on l'a vu, un fixateur, mais on l’emploie rarement seul, et un de ses mélanges les plus avantageux est la liqueur introduite il y a une vingtaine d'années dans la technique histologique par Kleinenberg. Celte liqueur, liqueur de Kleinenberg, se prépare de la manière suivante : on fait une solution saturée d’acide picrique dans l'eau ordinaire; à 100 centimètres cubes de cette solution on ajoute 2 centimètres cubes d'acide sulfurique concentré. 11 se fait un précipité blanchâtre, on filtre et on dilue le produit de la tiltration dans trois fois son volume d’eau. Voici la formule :

Solution aqueuse saturée d’acide picrique. 100 cent, cubes Acide sulfurique 2 —

Filtrez et ajoutez trois fois le volume d’eau. On obtient ainsi un liquide jaune clair, parfaitement limpide, et qui est un fixateur de premier ordre.

1° Mode d'emploi. — La liqueur de Kleinenberg s’emploie de la manière suivante : un petit embryon soigneusement dépouillé de ses enveloppes, ou une pièce quelconque sont placés dans une quantité convenable de liquide (50 fois le volume de la pièce). On les y laisse de une à six heures, suivant leur grosseur, en ayant soin de changer le liquide chaque fois qu'il se trouble. On peut laisser séjourner une pièce pendant vingt-quatre heures dans le liquide de Kleinenberg, mais comme il est très pénétrant, il est rare qu’on ait à le laisser

M E T H O DES r, E X E R A L E S

agir pendant aussi longtemps; d’ailleurs il pourrait gonfler à la longue les objets, et il est bon de ne pas dépasser le temps nécessaire à la fixation. Une fois celle-ci achevée, c’est-à-dire lorsque la pièce est bien et entièrement pénétrée dans toutes ses parties devenues jaunes, ce qui ne demande guère plus de six heures pour un embryon du volume de 1 à 2 centimètres cubes, on la retire en se servant d'instruments en platine, — le liquide picro-sulfnrique attaque fortement les instruments en fer, même nickelés — et on la porte dans de l'alcool à 70°. Ce dernier prend la couleur jaune de l'acide picrique, on le renouvelle plusieurs fois dans la même journée et le lendemain, afin d’enlever toute trace du fixateur, ce qui s'obtient facilement, pourvu que l'on change souvent l’alcool déjà jauni. On pont d'ailleurs aider au pouvoir dissolvant de l’alcool en plaçant le flacon ou la boîte de verre qui contient la pièce dans l'étuve à 36 ou 40°. Dès que la pièce est entièrement blanche — et cela doit arriver dans les quarante-huit heures — on la transporte dans de l'alcool à 90° dans lequel on peut la conserver pendant très longtemps, en suivant les précautions indiquées plus haut, ou bien, comme la fixation est achevée dès le passage de la pièce dans l’alcool à 90", on peut utiliser immédiatement cette dernière pour faire des préparations.

2° Indications de la liqueur de Kleinenberg. — Cette liqueur est un fixateur excellent, éprouvé par une pratique déjà longue, et qui convient particulièrement pour les embryons de Vertébrés. Elle a servi dans nombre de travaux sur les premières phases du développement des êtres, pour lesquelles elle donne d’excellents résultats. Elle conserve bien les figures de division cellulaire, et bien que quelques cytologistes ne lui accordent pas une grande confiance, elle peut être employée néanmoins lorsqu’on veut reconnaître des phases de division cellulaire dans un tissu. Pour moi, qui l’ai beaucoup employée concurremment avec d’autres réactifs regardés comme cytologiques par excellence, tels que le liquide de Flemmtng (voy. plus loin), je crois qu’elle peut être considérée comme un excellent fixateur, à la condition

de l'employer très exactement comme il a été dit ci-dessus.

Bonne pour les organes riches en épithélium (glandes, etc.), la liqueur de Kleinenberg convient moins pour ceux qui renferment du tissu conjonctif, parce qu’elle gontle un peu ce dernier.

Elle ne convient pas non plus pour les pièces qui renferment des sels calcaires, parce qu’elle forme avec ceux-ci des , sulfates insolubles qui, restant dans la préparation, la gâtent complètement.

Elle permet toutes les colorations ultérieures.

— Acide

La solution d’acide osmique à 1 p. 100, qui sert d’habitude aux fixations, doit être préparée avec beaucoup de soin, et nous prions à ce sujet de se reporter aux indications détaillées données page 57.

Cette solution émet des vapeurs fort irritantes pour la conjonctive et pour les bronches. Aussi est-il bon de mettre les flacons qui en contiennent à l’abri sous une cloche. La teinte noire qui ne tarde pas à se produire dans l’étendue de la cloche, sur le plateau qui porte celle-ci, montre combien les vapeurs se répandent aisément en dehors des flacons bouchés à l’émeri.

Lorsqu'on ne peut éviter le contact des vapeurs osmiques, par exemple lorsqu’on fait une injection interstitielle de solution ou de mélanges osmiques, il est bon de se mettre au grand air, d’ouvrir largement les fenêtres.

Comme l'acide osmique noircit beaucoup la peau si on le

1° Mode d’emploi. — L’acide osmique est un fixateur de premier ordre; on le fait agir sur les tissus, soit en solution, soit à l'état de vapeurs ; celles-ci s'obtiennent du reste à l’aide

) de la solution ordinaire.

a. Pour employer sa solution, on en verse la quantité néees-