AU VIOLET DE GENTIANE ET A L* ORANGE G

Cette triple coloration a été proposée par Flemming; voici comment on l’obtient :

Les coupes sont colorées pendant vingt-quatre à quarante-huit heures dans le bain de safranine suivant le procédé indiqué ci-dessus. Au sortir de ce bain, les coupes lavées simplement à l’alcool à 90° sont portées dans une cuvette à rainures contenant la solution de violet de gentiane indiquée page Go, où on les laisse une heure ou deux. Au bout de ce temps on retire les lames de la solution qui peut servir plusieurs fois, et on lave les coupes à l’eau distillée. Elles ont pris une teinte d'un violet foncé uniforme assez opaque.

On verse alors sur elles quelques gouttes de la solution concentrée d’orange (p. GG), auxquelles, au bout d'une minute, on ajoute de l’alcool absolu; immédiatement des nuages violets apparaissent dans le mélange d'alcool et d’orange qui baigne les coupes, et ces dernières se décolorent. On prend la lame de la main gauche et on lui imprime divers mouvements qui ont pour but de promener le liquide sur les coupes. On lave rapidement à l’alcool absolu; dès que les coupes n’abandonnent plus de nuages violets la coloration est achevée, et on peut monter au baume, en éclaircissant par l’essence de bergamote et non par celle de girofle, qui décolore trop.

a. Propriétés de celle coloration. — Lorsque cette coloration est réussie, et cela n’arrive pas toujours, la chromatine des noyaux est colorée en violet, certains nucléoles en rouge, le fond de la coloration est jaune mais avec des teintes variées, ainsi le tissu conjonctif est jaune-orangé brillant, le protoplasma cellulaire offre toutes les teintes du brun très clair au brun acajou, les

METHODES GENERALES

muscles sont bruns, la substance fondamentale des os est d’un jaune-orangé très vif.

b. Indications. — Cette méthode peut être employée couramment. A vrai dire il est très difficile de la réussir complètement, mais lorsque Faction de la safran ine ne se montre pas, le seul

Coloration par la méthode de Flemming (coupe longitudinale d’un os long en voie d’ossification).

p. périoste. — o, ostéoblastes à la surface de la substance osseuse. — co, cellules osseuses. — so , substance osseuse. — m, moelle. — v, vaisseaux. Stiassnie, ocul. 2, object. 5.

fait de la coloration nucléaire par le violet de gentiane et du fond par l’orange donne une coloration double qui répond aux desiderata ordinaires. Si l’on est très pressé, on peut supprimer le passage dans la safranine et porter les lames, après lavage dans l’alcool, directement dans le bain de violet de gentiane où elles resteront deux heures, puis après lavage à l'eau on les traitera par l'orange comme il a été dit plus haut, on aura double coloration à la gentiane et à l'orange, mais il

COL O 11 A T IONS

vaut mieux suivre toute la série des matières colorantes indiquées, parce que la safranine alors même qu’elle ne se montre pas isolément sur certains éléments des cellules, contribue à donner des teintes variables aux parties. Cette coloration est en effet plutôt une coloration mixte qu’une coloration triple.

On peut d’ailleurs obtenir cette coloration d'une manière rapide, en employant les solutions colorantes indiquées plus haut. Pour cela, on plonge les coupes pendant un quart d’heure dans la safranine, on les lave à l’alcool absolu, puis à l’eau; on les met dans le violet de gentiane pendant un quart d’heure. Au bout de ce temps, on lave à l’eau, on traite par l’orange, et on achève comme ci-dessus. Cette méthode rapide donne souvent d’excellents résultats.

§ 7. — ■ Coloration au bleu polychrome

lu Mode d’emploi. — Des coupes fixées au liquide de Flemming ou à n’importe quel autre réactif, sont soigneusement lavées à l’eau. On verse sur elles, avec un entonnoir muni d’un filtre, quelques gouttes de bleu polychrome. O11 le laisse agir pendant un quart d'heure au moins, ou davantage dans quelques cas particuliers, mais en général il suffit d’un quart d'heure à une demi-heure. Au bout de ce temps on l’enlève, on lave à l’eau distillée, les coupes sont colorées uniformément en violet foncé. On dépose alors sur elles quelques gouttes de la solution étendue de glycerinæthermischung (eau distillée 20 centimètres cubes, glycerinæthermischungV gouttes) qui dissout certaines parties de la couleur, et laisse les autres en place en modifiant leur teinte (différenciation). On peut suivre la différenciation sous le microscope avec un objectif faible, lorsqu’elle paraît achevée on enlève le glycerinæthermischung, on lave soigneusement à l’eau distillée, on enlève cette dernière et on déshydrate rapidement par l’alcool absolu. L’alcool décolore encore beaucoup les pièces, et complète la différenciation de la matière colorante ; à cause de la décoloration qu il produit il importe de surveiller son action et daller vite. Dès que la déshydratation est obtenue, ce qui pour

METHODES G E N E R A L E S

des coupes très minces ne demande pas plus de deux minutes, pourvu qu’on ait soin de renouveler l’alcool absolu, on peut monter au baume. Pour cela on emploiera après l’alcool absolu l’essence de bergamote qui décolore moins que l’essence de girolle. Si même on craignait de trop décolorer les coupes on pourrait employer au lieu d’essence du xylol (voy. pour plus de détails au chapitre suivant).

2U Propriétés du bleu polychrome. — Le bleu polychrome donne à lui seul, comme le picro-carmin, des colorations mul-

Fig. 60.

Coloration au bleu polychrome (mésentère de la salamandre).

ml , muscles lisses. — globule rouge nucléé. — n, noyau. Stiassnic, ocul. 2,

object. 8.

liples très belles. 11 colore les globules rouges du sang en vert brillant, les noyaux en bleu pur, les granulations chromophiles des cellules nerveuses (granulations de Nissl) en bleu, les granulations du protoplasma de certaines cellules (mastzellen.

cellules plasmatiques, clasmatocytes) en rouge-violet, les fibres musculaires lisses et striées en vert, la mucine en rouge violacé.

3° Indications du bleu polychrome. — Cette matière colorante est très précieuse, elle est indispensable pour la recherche des cellules à granulations (clasmatocytes), et en dehors de ce cas où elle a une véritable valeur spécifique, elle peut être employée avec avantage pour toutes sortes de préparations. Elle donne d’excellents résultats pour l’étude du système nerveux central. Enfin elle offre la commodité très grande f de colorer d’emblée des préparations qui demanderaient plus de vingt-quatre heures pour être teintes à la safranine et à ses mélanges. Aussi quand on veut examiner rapidement pour faire un diagnostic des coupes fixées à la liqueur de Flemming, on les colore par le bleu polychrome, et en moins d’une heure les préparations sont achevées etprêtes pour l’examen.

§ 8. — Remarques et règles générales