CHAPITRE PREMIER

LA MÉTHODE BIOCHIMIQUE:; SON PRINCIPE; LES INDICATIONS QU'ELLE FOURNIT; LES RÉSULTATS QU'ELLE A PERMIS D'OBTENIR JUSQU'A CE JOUR.

Avant d'exposer le principe de la méthode, il convient de définir exactement sous quelle forme ont été utilisés les ferments, invertine et émulsine, dont elle met à profit les propriétés.

Le ferment désigné ici sous le nom d'invertine est obtenu en tuant par l'alcool la levure de bière haute, fraiche, suivant le procédé indiqué par M. BourqueLor (1); quant à l’émulsine elle est préparée avec des amandes douces par le procédé indiqué par H. HéRISSEY (2).

La plante à étudier doit être traitée fraiche, et le plus rapidement possible après la récolte, la dessiccation entrainant souvent la destruction partielle des sucres et des glucosides.

On divise grossièrement le végétal à examiner et on projette immédiatement les fragments dans un ballon contenant de l’alcool à 90° bouillant qu’on a additionné préalablement d’une petite quantité de carbonate de calcium précipité.

L'emploi de l'alcool bouillant a pour but de tuer les ferments hydrolysants susceptibles d'agir sur les sucres et glucosides; l'addition de carbonate de calcium est néces-

(1) Recherche, dans les végétaux, du sucre de canne à l'aide de l’invertine,

et des glucosides à l’aice de l'émulsine (Journ. de Pharm. et de Chim. (6),

XIV, p. 481, 1901). | (2) Recherches sur l'émulsine. Thèse doct. Univ. (Pharmacie). Paris, 1899.

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saire pour saturer les acides végétaux qui pourraient également amener le dédoublement de ces principes.

On relie le ballon à un réfrigérant à reflux et on continue l’ébullition pendant 20 à 30 minutes. Après refroidissement, on broie la plante eton lui faitsubir un deuxième traitement à l'alcool bouillant de façon à l’épuiser complètement. On filtre avec expression et on distille le liquide alcoolique dans le vide partiel; on reprend le résidu par l’eau thymolée et on filtre.

On défèque une partie du liquide au sous-acétate de plomb liquide; on en fait l'examen polarimétrique et on y dose le sucre réducteur.

Au reste du liquide on ajoute de l’invertine dans la proportion de 1gr. du produit décrit ci-dessus pour 100” de liquide et on le place à l’étuve à 30-32°. On fait tous les jours l’examen polarimétrique du liquide et on y dose le sucre réducteur, après défécation, comme dans le premier cas. Quand on a constaté les mêmes chiffres deux jours de suite, l’action de l’invertine est terminée. On compare alors les résultats trouvés dans les deux cas. La plante contient-elle du saccharose ? on constate alors un recul vers la gauche de la déviation polarimétrique et une augmentation corrélative de la proportion du sucre réducteur; de plus, les changements optiques observés coïncident avec ceux qu'indique le calcul en considérant le sucre réducteur formé comme du sucre interverti. On porte alors le liquide au bain-marie bouillant, en vase clos, pendant 10 minutes, pour tuer l’invertine. Après refroidissement, on ajoute de l’émulsine dans la proportion de 0£',25 pour 100% de liquide et on place le flacon à l’étuve à 30°.

Les jours suivants, on renouvelle, après défécation préalable, l'examen du liquide au polarimètre et le dosage du sucre réducteur à la liqueur cupro-potassique.

Constate-t-on un retour à droite de la déviation polarimétrique et une augmentation de sucre réducteur, on peut conclure à la présence d’un glucoside.

La quantité de sucre réducteur formé fournit une indi-

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cation approximative sur la proportion de glucoside contenu dans un poids donné de la plante examinée.

La méthode indique donc, d’abord, si la plante renferme un glucoside dédoublable par l’émulsine, et, de plus, si ce principe existe en proportion suffisante pour que l’extraction puisse être tentée avec quelque chance de succès. L'application de la méthode aux divers organes d’une même plante indique si tous ces organes renferment le glucoside et permet de juger quel est l'organe le plus riche, et, par conséquent, le plus favorable aux tentatives d'extraction.

La méthode permet encore, dans certains cas, d’affirmer, avant toute extraction, si on se trouve en présence d’un glucoside connu ou d’un glucoside nouveau. En effet, la quantité de sucre réducteur formé pour un retour de 1° constitue en quelque sorte une constante caractéristique de chaque glucoside (1).

Il suffit donc de calculer ce rapport et de le comparer à ceux qui ont été trouvés pour les glucosides actuellement connus; c'est ainsi que J. ViNTILESGo (2) a pu constater, avant tout isolement, la présence de la syringine seule dans diverses espèces de Ligustrum et de Syringa. De même H. HÉRISSEY (3) a pu affirmer que les fruits mürs de l’Eryobotrya japonica ne renfermaient absolument que de l'amygdaline.

Au cours de l'extraction, l'application du procédé biochimique peut encore donner de précieuses indications.

On sait, en effet, que le glucoside qu'on se propose d'isoler est soluble dans l’alcool et dans l’eau puisque ces deux dissolvants ont été utilisés dans la méthode de recherche, mais on n’a pas d'indications sur sa solubilité dans les autres liquides.

Après avoir fait un extrait hydroalcoolique, on tente

(1) Em. BourQueLorT, Sur quelques données numériques facilitant la recherche des glucosides hydrolysables par l’émulsine (C. À. Soc. de Biologie, LX, 510, 1906, et Journ. de Pharm, et de Chim. (6), XXIII, 369, 1906.)

(2) Recherches sur les glucosides de quelques plantes de la famille des Oléacées. Thèse doct. Univ. (Pharmacie). Paris, 1906.

(3) Sur la nature du glucoside cyanhydrique contenu dans les semences de l'Eryobotrya japonica (Journ. de Pharm. et de Chim. (6), XXIV, 350, 1906).

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d'en séparer le glucoside par épuisement au moyen de l'éther acétique, par exemple. La méthode à l’émulsine appliquée, d’une part, au résidu extractif, de l’autre, à la solution éthérée préalablement évaporée et reprise par l'eau, indiquera si le glucoside est resté dans l'extrait ou s’il est passé dans l’éther acétique, et, dans ce dernier cas, s’il y est passé complètement ou en partie. On peut dès lors conclure si l’éther acétique convient à lextraction et déterminer les quantités de dissolvant qu'il faudra mettre en œuvre pour obtenir un épuisement complet.

Si l’éther acétique ne convient pas, on peut essayer le même dissolvant additionné d’alcool, comme je l'ai fait pour extraire le glucoside des Plantago, où employer d’autres dissolvants neutres.

Dans certains cas, on cherche à engager le glucoside dans des combinaisons insolubles obtenues à l’aide de l’acétate neutre de plomb, de l’acétate basique, de l’acétate ammoniacal, du tannin ou de l’acétate de cuivre, comme l’a conseillé dernièrement G. MeiLLëRe (1). Dans ces différents cas, en appliquant au liquide déféqué et au précipité, convenablement décomposé, la méthode à l’émulsine, on saura si le glucoside à été précipité ou s'il est resté en solution.

En résumé, l'application raisonnée et méthodique du procédé biochimique permet de savoir toujours où se trouve le glucoside cherché. On comprend facilement que, dans ces conditions, la recherche d’une méthode d’extraction convenable se trouve considérablement facilitée.

Par l’application systématique du procédé biochimique, M. le Professeur BouRQUuELoT et ses élèves ont obtenu des résultats qui sont déjà assez importants pour démontrer la fécondité de cette méthode.

Successivement, l’aucubine (2), la sambunigrine (3), la

(1} Isolement des hydrates de carbone et des glucosides par précipitation au moyen des sels métalliques (Journ. de Pharm. et de Chim. (6) XXVI, 300, 1907). (2) Em. BourqueLor et H. Hérissey, Sur un glucoside nouveau, l'aucubine, retiré des graines d'Aucuba japonica L. (C. R. Soc. de Biologie, LIX, p. 695 1902, et Ann.Chim. et Phys. (8), IV, p. 89, 1905). : (3) Em. BourQuELoOT et Em, Dansou, Sur la présence d’un glucoside cyanhydrique dans le sureau et sur quelques-uns des principes de cette plante (Journ.

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Jasmiflorine (1), la prulaurasine (2), la taxicatine (3), la bakankosine (4), glucosides nouveaux ont été isolés grâce aux indications fournies par l’application du procédé biochimique.

De même, la syringine (5), glucoside déjà connu, a été retrouvée chez diverses espèces de la famille des Oléacées dans des plantes ou des organes où on ne soupçonnait pas sa présence.

Dans le présent mémoire sont exposés les résultats de mes recherches par la méthode biochimique, recherches qui, entre autres résultats, m'ont permis :

1° D'isoler de divers Plantago un glucoside que j'ai reconnu identique à l’aucubine, retirée des graines de l’'Aucuba japonica L. par MM. BourQuELOT et HÉRISSEY.

2° D'extraire du Verbena officinalis L. un glucoside nouveau, la verbénaline.

de Pharm. et de Chim. (6), XXII, pp. 154 et 210, 1905), et Em. Danyovu, Application des procédés biochimiques à la recherche et au dosage du sucre de canne et des glucosides dans les plantes de la famille des Caprifoliacées, Etude de la sambunigrine. Thèse doct. Univ. (Pharmacie), Paris, 1906.

(1) J. Vinriesco, Recherches sur les glucosides de quelques plantes de la famille des Oléacées. Thèse doct. Univ. (Pharmacie). Paris, 1906.

(2) H. Hérissey, Sur la prulaurasine, glucoside cristallisé retiré des feuilles de Laurier-cerise (Jour de Pharm. et de Chim. (6), XXHI, p. 5, 1906).

(3) Ch. LEFEBvRE, La faxicatine, glucoside nouveau retiré du Taxus baccata L. (C. R. Soc. de Biologie, LX, p. 513, 1906), et Application des procédés biochimiques à la recherche et au dosage des sucres et des glucosides dans les plantes de la tribu des Taxinées. Etude de la faxicatine. Thèse doct. Univ. (Pharmacie). Paris, 1907,

(4) Em. BourqueLor et H. Hérissey,Sur un nouveau glucoside hydrolysable par l’émulsine, la bakankosine, retiré des graines d’un strychnos de Madagascar. (Journ. de Pharm. et de Chim. (6), XXV, p.417, 1907).

(5) J. Vixricesco, loco citato.