CHAPITRE Il
Nous avons étudié, dans les expériences dont l'exposé constituera ce chapitre, le développement des germes d’un même échantillon d’eau, dans. des milieux phéniqués et non phéniqués. En même temps, nous avons recherché quels résultats on obtenaïit, pour ces mêmes échantillons, en employant des méthodes simples : indol, eau peptonée lactosée tournesolée, pro-
cédé de Besson. Nous exposerons ensemble tous ces
résultats, qu’on ne peu séparer, nous efforçant pour chaque expérience de tirer une conclusion et des directives pour éviter les irrégularités et les erreurs.
Tout d’abord, indiquons la façon de procéder au peptonage et au phéniquage d’une eau :
Sur un échantillon de 180 cc., on prélève 50 cc. avec une pipette stérile et on les introduit dans une fiole. Cette eau est peptonée à 1 0/0 en utilisant une solution de peptone concentrée à la dose de 1 cc. pour 50 cc. d’eau. On prélève ensuite dans le premier flacon deux fois 10 cc. qui sont mis dans deux tubes stériles,
puis 5 cc., puis 2, puis 1 qui sont ajoutés à des tubes d’eau peptonée ordinaire à 1 pour 100 de façon à avoir un volume total suffisant. 2 ce. sont rejetés pour
amener le volume du premier flacon exactement à 100 cc.
Le phéniquage du milieu à 0,84 p. 1.000 s’obtient en utilisant une solution d’acide phénique à 5 p. 100, à la dose ‘de I goutte (XXX gouttes au gramme du compte-gouttes employé) pour 2 cc. d’eau peptonée. Il en faudra donc pour :
DOC AN nee Ar A ne L gouttes 50 + ER OA CR AE NAMUR LOC UC R PORTER, V —
MCCACRAO Chr ee. VIII 22 2 cc. QE ER À HT TC Er ET SE VI = Loc CUD eo) ee V à VI —
Finalement, notre eau est peptonée à 1 pour 100, phéniquée à 0,84 pour 1.000 dans les volumes suivants : 100 - 50 - 10 - 10° - 5 - 2 et 1 cc. Ce qui correspond à 10, 20, 100, 200, 500 et 1.000 Colibacilles par litre. ù
,. $ IL — Expérience n° 1 Le +0 ANNE VAE e LYS PRIME F . Ce'premier échantillon est réparti en deux séries = phéniquée et non phéniquée — et placé à l’étuve à 4125:
Sur les cultures examinées au bout de 15 heures, on constate : | |
1° Dans les milieux non phéniqués, la présence — partout — d’un trouble prononcé avec voile.
2 Dans les milieux phéniqués :
Tubes 10 et 5 : trouble léger homogène sans voile.
Tubes. 2 et 1 : trouble très léger avec ondes.
Un, deuxième examen fait à la dix-huitième heure de culture donne :
1° Dans les milieux non phéniqués, le même aspect que précédemment.
2° Dans les milieux phéniqués, partout un trouble plus ou moins prononcé sans voile.
A chacun de ces examens, nous avons fait, pour tous les volumes, un repiquage sur gélose.. Puis, partant des colonies ainsi obtenues, un repiquage en eau peptonée, en eau lactosée au rouge neutre (tubes B), sur gélose lactosée tournesolée et en tubes à lait.
L’examen fait au bout de 24 heures (48 heures du
début de l’expérience) nous donne les résultats suivants :
1°, Cultures de 15 heures..— «) En milieu non phénique, un développement microbien présentant les caractères morphologiques et les réactions de fermentation du Colibacille.
b) En milieu phéniqué des cultures qui ne pré-
sentent aucun de ces caractères.
2° Cultures de 18 heures. — Dans les milieux non phéniqués, le même résultat que. pour les cultures de 15 heures; dans les milieux phéniqués, fe B. Coli ne peut être mis en évidence par aucun de ses caractères. |
Il est à constater que l’acide phénique a provoqué la disparition du Colibacille dans cet échantillon d’eau. Il est remarquable aussi que les culittres souillées. d'impuretés dans lesquelles le, B. Coli était bien visible au bout de 15 heures est, dans les culture: correspondantes de 18 heures, difficile à retrouver.
Enfin, les caractères indologènes vérifiés cadrent exactement avec les résultats précédents.
$ II. — Expérience n° 2 \
Un deuxième échantillon d’eau est ensemencé en eau peptonée non phéniquée et phéniquée, en milieu de Besson, en eau peptonée lactosée.
On obtient les résultats suivants :
QUANTITÉS ensemencêes
Milieu
non phéniqué
Très trouble, sans voile.
Quelques bulles
Odeur fécaloïde
Pas d'indol
Très trouble, sans voile
Odeur fécaloïde Pas :d'indol
Milieu phéniqué
Moins trouble Sans voile
Pas d'odeur
Pas d'indol
Milieu
de Besson
Réduction franche ét rapide Dégagement abondant de gaz
Moins trouble Sans voile
Pas d'odeur Pas d'indol
Ni réduction
Ni gaz
Moins trouble Voile épais
Pas d'indol
. [Trouble léger
Voile abondant Grimpant sur parois
Pas d'indol
les
Ni réduction
Ni gaz
Moins trouble Voile épais Pas d'indol
Trouble léger Voile
Pas d'indol
Ni réduction
Ni gaz
Trouble léger Voile
Pas d'indol
Trouble très léger, blanchâtre. Pas de
voile
Pas d'indol
Ni réduction .
Ni gaz
Très trouble Pas de voile Bords irisés
Pas d'indol
Trouble très léger, blanchâtre. Pas de
voile
Pas d'indol
Ni réduction
Ni gaz
Trouble très léger Pet voile
Pas d'indol
Trouble très léger
Voile Pas d'indol
Ni réduction
Ni gaz
eau peptonée lactosée
Sur 10 tubes ensemencés avec
10cc d'eau cha-
cun, tous ont donné une décoloration du tour-
nesol
Un a donné un dégagement abondant de gaz; un a donné un dégagement très
léger de gaz
DE Le Gp ER j Ces cultures de 18 heures, repiquées sur gélose, nous donnent après 12 heures environ :
. 1° Milieu non phéniqué.
100 : Culture coliforme. Petit bacille faiblement mobile. Gram négatif.
50 : Culture coliforme (impure) constituée également d’un petit bacille peu mobile à Gram négatif.
10: Culture coliforme d’un petit bacille peu mobile à Gram négatif.
25 et 2: Même aspect à l’examen macroscopique et microscopique. |
1 : Culture en grandes colonies plates et sèches. Bacille de grande taille à Gram positif.
2° Milieu phéniqué.
100 : Culture en grandes colonies plates envahissantes. Gros bâtonnets à extrémités carrées. Gram positif.
50 : Culture en grandes colonies plates envahissantes. Bacilles en longs filaments. Gram positif.
10 : Culture en grandes colonies plates envahissantes. Bacille Gram négatif sporule.
10° : Culture en grandes colonies plates envahissantes. Grand bacille Gram' positif. |
