TECHNIQUE

Pour effectuer mes recherches, j'ai employé la méthode des coupes à la main, ou la méthode habituelle des inclusions dans la paraffine en fixant les parties de la plante, soit avec le fixateur Flemming, soit avec l'alcool acétique, soit, dans la ma- Jorité des cas, avec l'alcool à 70°.

L'usage de l'hypochlorite rend impossible l'emploi des rubans de paraffine, lorsqu'ils sont collés sur lame. Je me suis servi du procédé indiqué dans sa thèse par M. Chauveaud (1), consislant dans l'emploi de microplynes et de poudre de verre; j'a combiné ce procédé avec la méthode habituelle des inclusions.

On met dans un microplyne, contenant déjà une couche de poudre de verre, le ruban de paraffine ; on se débarrasse de la

a) G. Chauveaud, Sur l'embrycgénie de l'appareil laticifère (Ann. Sc. nat., 7e série, t. XIV, 1891),

paraffine en mettant le tout dans le xslol; on étale ensuite encore une nouvelle couche de poudre de verre et on arrive à hydrater les coupes en passant le microplyne dans la série des alcools ; on soumet le microplyne contenant les coupes aux différents réactifs. À la fin, en renversant le contenu du microplyne dans un verre de montre rempli d’eau, les coupes flottent et on peut les prendre et les monter.

Pour observer le mode de développement des tubes criblés on doit suivre une technique spéciale, indiquée par M. G. Chauveaud (1). En signalant le premier, en 1897, une phase tout à fait spéciale dans la différenciation et dans le fonctionnement des tubes criblés primaires, phase qu'il a appelée « phase de différenciation marimum », cet auteur nous donne la méthode et le procédé de coloration qu'il faut suivre si l'on veut mettre en évidence les premiers tubes criblés. Depuis, dans les Mémoires qu'il a publiés (2), 1l insiste sur celte technique qu'il emploie et avec laquelle, d’une manière précise, on peut voir les premiers tubes criblés formés.

Je rappelle cette méthode qui est très simple : après avoir traité les coupes par l'hypochlorite de soude pour se débarrasser du contenu des cellules, on les soumet à l'action de la potasse assez concentrée (quelques pastilles de potasse dans un verre de montre) pendant trois à cinq minutes ; ensuite, après les avoir bien lavées à l’eau, on les traite par l’eau fortement acidulée par l'acide acétique. Ce traitement doit durer de cinq à dix minutes, puis sans laver les coupes, on les met dans le brun Bismarck (en solution alcoolique ou aqueuse). Les coupes sont laissées dans le colorant dix à douze minutes, puis on les lave soigneusement à l'alcool, et on peut ensuite les monter dans la glycérine ou dans le baume de Canada.

Le brun Bismarck présente encore un avantage en ce qui concerne la microphotographie, car les coupes se prêtent extrèmement bien à la photographie.

(1) G. Chauveaud, Sur l'évolution des tubes criblés primaires (C, R. Acad. des Sc., p. 546, t. CXXV, 1897).

(2) G. Chauveaud, Recherches sur le miode de formalion des tubes criblés dans la racine des Monocotylédones (Ann. des Sc. nat., 8° série, t. IV). — Recherches sur le mode de formation des tubes criblés dans la racine de Dicotylédones (Ann. des Se. nat., 8° série, t. XIT).

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