II. — Récolte des matériaux d'étude

A. — RÉCOLTE DES DÉCHETS AZOTÉS SOLUBLES, ÉVACUÉS DANS LE MILIEU EXTÉRIEUR.

Chez les vertébrés supérieurs, cette récolte ne présente aucure difficulté. L'urine, en effet, que l’on peut recueillir aisémel et en abondance, contient la presque totalité des déchets

azotés. La quantité des matériaux ‘azotés de désassimilation, qui est excrétée par la voie intestinale est si peu importante que, pratiquement, l'étude des constituants azotés de l'urine suffit à renseigner sur la désassimilation azotée.

Chez quelques invertébrés supérieurs seulement, il est possible de recueillir un liquide que l’on considère comme analogue à l'urine des vertébrés. Dans quelles proportions renferme-t-il les excreta azotés ? Il est difficile de le dire. Quoi qu’il en soit, chaque fois que cela a été possible, nous l’avons recueilli et analysé avec soin.

Pour récolter l’urine de Maja squinado, je me suis servi, avec quelques modifications, du procédé qui a été donné par P. MARCHAL (1892).

L'animal étant renversé et maintenu par un aide, on soulève avec des pinces l’opercule mobile comme une charnière, qui recouvre les canaux d’excrétion. L'on y introduit doucement et peu profondément une petite canule en verre à bords rodés, s’adaptant exactement à l’ouverture. Le liquide monte de luimême dans la canule, car il est contenu sous faible pression dans la vessie. La canule ne doit pas être enfoncée profondément, sinon on risque de perforer la cavité générale et de récolter de l’urine mélangée à beaucoup de sang, ce dont dn est averti par l’aspect et la coloration du liquide.

A l’aide d’un petit raccord en caoutchouc, la canule est reliée à une seringue de 10 ccm. Il suffit d’aspirer peu à peu pour vider la vessie. On vide de même l’autre vessie.

Ainsi que l'avait déjà signalé P. MarcHaAL, on obtient en quantité assez abondante (10 à 15 ccm. pour une Maja de 500 gr.) un liquide clair comme l’eau de mer, qui ne contient, le plus souvent, que quelques éléments en suspension, Cependant, à Noirmoutiers, en recueillant l’urine de douze animaux qui avaient séjourné quelque temps dans les bacs de l’Herbaudière, j'ai retiré, à deux reprises, un liquide coloré en vert. Je signale simplement le fait, n'ayant pas eu assez de liquide pour faire des recherches.

La récolte faite, on introduit aussitôt dans le liquide des cristaux d'acide trichloracétique (1 gr. pour 100 cem.), et l’on

agite fortement. L'albumine que contient le liquide en petite quantité se précipite peu à peu. Lorsque le précipité est bien formé, on filtre et l’on ajoute ensuite au filtrat acide un peu de chloroforme pour assurer sa conservation.

Pour recueillir le liquide urinaire de Sepia officinalis, il est utile, pour avoir une bonne récolte, d'opérer sur des animaux de grande taille. L'animal vivant est placé sur sa face dorsale et maintenu par un aide. On ouvre la cavité palléale en incisant largement le manteau sur la ligne médiane. On découvre entièrement la masse viscérale en réclinant les bords du manteau. A droite et à gauche du rectum apparaissent les deux orifices des glandes urinaires. Une très petite incision est faite au dessous de l’un de ces orifices, par laquelle on introduit dans les volumineux sacs urinaires l’extrémité d’un compte-gouttes. Il est facile de retirer par aspiration le liquide qu'ils contiennent (2 à 6 ccm. pour une Seiche de moyenne taille). Ce liquide, souvent trouble, contient en suspension, comme l'a depuis longtemps signalé Paul BERT (1867), des cristaux d’un beau rouge.

Au contact de l’air, il reste incolore ou blanchâtre. S'il est mélangé à un peu de sang, il bleuit et doit être rejeté.

Assez riche en albumine, comme l’avaient déjà signalé Paul BERT, OTTO V. FURTH, nous l’avons dilué de moitié avant de le désalbuminer, dans les mêmes conditions que pour l'urine précédente.

Pour tous les autres invertébrés étudiés, la récolte directe d'un liquide urinaire n’a pas été possible. D'ailleurs, chez presque tous, l’excrétion est très diffuse; plusieurs organes y participent, si bien que, pour capter les déchets, il faut avoir recours à une méthode indirecte.

Nous avons utilisé la seule technique possible, qui, d’ailleurs, entre les mains d'autres auteurs (R. Fosse, J. LESSER, PUTTER), a déjà donné des renseignements intéressants. Il faut cependant prendre beaucoup de précautions pour éviter les causes d’erreur.

Elle consiste à placer les animaux marins dans un cristalli-

prise

soir et à les faire vivre quelque temps sous une mince couche d’eau de mer ou d’eau douce, souvent renouvelée.

Le renouvellement de l’eau (toutes les 8 heures environ) empêche le contact prolongé de l’animal avec ses excreta. D'autre part, la faible épaisseur de la couche d'eau assure une plus grande surface de contact avec l'air, c’est-à-dire une aération maxima. Dans ces conditions, les animaux vivent bien et longtemps.

Même ainsi conduites, nos expériences ne sont pas à l'abri de critiques. Plusieurs causes d'erreur peuvent en vicier les résultats ,dont il y a lieu d'examiner maintenant l'importance.

La première est relative à l’altération possible sous l’action de microorganismes, des déchets azotés évacués par l'animal, en particulier la transformation de l’urée en ammoniaque.

Nous nous sommes assuré, par des expériences témoins, qu'à la température où ont été faites nos recherches (15° au maximum), l’urée n’est pas transformée. On dissout une petite quantité d’urée (10 mgr.) dans 500 ccm. d’eau de mer, et l’on plonge dans cette eau, pendant quelques minutes, les animaux d'étude. L'eau, conservée à 15°, renferme encore, après 24 heures, l’urée qui a été ajoutée.

La deuxième cause d'erreur est plus difficile à éviter. L'eau dans laquelle ont vécu les animaux contient, en effet, non seulement les véritables déchets azotés, c’est-à-dire ceux qui proviennent du fonctionnement cellulaire, mais aussi les corps azotés d'origine alimentaire, qui n'ont fait que traverser le tube digestif, sans être absorbés.

Ces derniers sont d’ailleurs mélangés à de vrais déchets d'origine intestinale, car la fonction excrétrice de l'intestin des invertébrés paraît avoir une importance plus grande encore que celle des vertébrés.

Cette cause d'erreur est surtout à prendre en considération pour les animaux qui absorbent une grande quantité de sable ou de terre pour s’alimenter. On peut l’éviter dans une certaine mesure par [etude comparée des liquides d'excrétion