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des animaux en pleine digestion et des animaux laissés à jeun ui teuips suf£sant pour que leur intestin soit vidé.

Enfin, une troisième cause d'erreur reste à examiner : dans aueile mesure l'azote excrété sous forme volatile (ammonia- Que, amines) peut-il être entraîné dans l'atmosphère et écharper ainsi à l’analyse chimique ?

Nous nous sommes assuré que la très petite quantité d’arnmoniaque excrétée en huit heures reste entièrement dissoute dans le liquide qui n’est pas agité et dont la température ne dépasse pas 15°.

Aussitôt après avoir été recueillis, les liquides sont filtrés, puis acidifiés par addition de cristaux d’acide trichloracétique (1 gr. pour 100 cem.) et agités. Il se produit un trouble plus ou moins intense dû à la présence de traces d’albumine, dont it est difficile de connaître l’origine. Elle peut aussi bien provenir de la peau de l’animal (mucus, etc.) que d'une excrétion de l’albumine plasmatique.

Le liquide, abandonné au repos quelque temps, est filtré jusqu’à obtention d’un filtrat clair et limpide, qui est additionné de chloroforme pour assurer sa conservation.

La récolte des déchets azotés de certains invertébrés terrestres (Gastéropodes pulmonés, Vers de terre) diffère un peu de celle des invertébrés marins, dont nous venons de parler.

Les animaux, bien lavés, sont placés dans un cristallisoir contenant seulement quelques cem. d’eau de source. Ils sont lavés toutes les huit heures environ, afin d'entraîner les excreta. Les liquides recueillis sont traités comme il a été déjà dit.

Pour abréger, nous appellerons ces divers liquides : liquides d’excrétion.

B. — RÉCOLTE DES DÉCHETS AZOTÉS CONTENUS DANS LES LIQUIDES DU MILIEU INTÉRIEUR.

Nous avons déjà signalé la difficulté de distinguer dans les liquides d’excrétion les véritables déchets azotés des matériaux d'origine alimentaire évacués par l'intestin. Il n’en est plus de

er gr même pour les excreta contenus dans le sang ou le liquide cavitaire, Ge telle sorte que, qualitativement tout au moins,

l'étude chimique de ces matériaux donnera des renseigne-

ments complémentaires utiles, sinon indispensables, au pont de vue chimique.

Au point de vue physiologique, l'étude comparative des Géchets azotés contenus dans les liquides cavitaires et les liquides d’excrétion n’est pas moins intéressante. Elle permet, en effet, d'aborder un problème du plus haut intérêt biologique, sur lequel il n’existe encore que bien peu de documents, celui de la puissance de sélection élective et de concentration &es appareils excréteurs des invertébrés.

La récolte des déchets comprend deux opérations distinctes : 1° La récolte du sang ou du liquide cavitaire; 2° La préparation des liquides désalbuminés.

Je serai bref en ce qui concerne le premier point, car j'ai déjà indiqué, en 1913, la technique utilisée pour recueillir chez quelques invertébrés les liquides du milieu intérieur.

Le liquide cavitaire des Astéries est obtenu facilement par section de l'extrémité d’un bras, l’animal'étant placé verticalement au-dessus d’un verre à pied; celui des Oursins, par section de la membrane péribuccale; Celui des Holothuries, par incision du tégument, en évitant soigneusement toute lésion du tube digestif.

Le liquide des Vers (Siponcle, Aphrodite) s'écoule par incision du tégument dans une région où l’on ne risque pas de léser l'intestin.

Pour recueillir le sang de l’Araignée de mer, on brise une des derniéres pattes. Après l’autotomie on introduit une canule en verre dans la plaie. Le sang de Seiche a été recueilli à l'aide d’une petite canule en verre introduite dans l'artère dorsale. Le sang d’Escargot est recueilli au niveau du cœur, chez l’animal débarrassé en partie de sa coquille, après incision du péricarde. Nous avons aussi recueilli l'éau des Huitres, etc.

. Aussitôt après avoir été recueillis, les liquides sont filtrés où

LRU centrifugés, pour les débarrasser des éléments figures en sus-

pension. Le plasma ainsi obtenu est désalbuminé par l'acide trichloracétique.

Lorsque les liquides contiennent peu d’albumine, la désalbumination est faite comme pour les liquides d’excrétion (addition directe de cristaux d’acide trichloracétique, etc.).

Lorsque le plasma est chargé d’albumine, il est dilué de moitié avant la désalbumination. Les filtrats acides, qui doivent être clairs et limpides, sont additionnés d'une petite quantité de chloroforme, pour assurer leur conservation.

Dans quelques cas, nous avons préparé l'extrait désalbuminé du liquide total (plasma et éléments figurés). Ces cas pariiculiers seront signalés à leur place.

C. — RÉCOLTE DES DÉCHETS AZOTÉS CONTENUS DANS LES ORGANES FRAIS ET AUTOLYSÉS.

1° Organes frais. — Aussi souvent que possible, les extraits désalbuminés des organes (hépato-pancreas, muscle, giande génitale, néphridie, etc.), ont été préparés immédiatement après le sacrifice de l’animal. Toutefois, lorsque les circonstances ne nous ont pas permis de faire sur place les manipulations, nous avons conservé les organes en les fixant dans une quantité suffisante d'alcool à 90° bouillant, la désalbumination étant pratiquée ensuite le plus tôt possible. La nécessité de fixer l’organe dans de l'alcool bouillant nous est apparue dès nos premières recherches. Certains organes, en effet, riches en diastases protéolytiques (foie de Seiche, par exemple), sont capables de s’autolyser en milieu alcoolique.

Pour la préparation de l’extrait désalbuminé, il suffit d’avoir à sa disposition un mortier en porcelaine, du sable lavé, de l’eau distillée bouillante, une solution d’acide trichloracétique à 20 0/0 et une série de fioles jaugées.

Soit un organe qu'il est facile d’avoir en quantité (hépatopancréas de Crustacé, par exemple), les manipulations sont les suivantes :

Avant d’être pesé, l’organe est essoré avec du papier filtre.

On en pèse 8 grammes que l'on introduit dans le mortier avec du sable lavé. On broye le plus finement possible, puis on verse une petite quantité d’eau bouillante. Agiter, laisser déposer et décanter le liquide surnageant. On broye de nouveau, puis on verse de l’eau bouillante, etc. Ces opérations sont renouvelées jusqu'à épuisement total des matières solubles. I1 ne doit finalement rester dans le mortier qu’un résidu insoluble. Les liquides, qui ont été versés dans un grand verre à expérience, au fur et à mesure de la décantation, sont introduits dans une fiole jaugée de capacité suffisante (200 ccm.) et l’on ajoute 20 ccm. de la solution d’acide trichloracétique à 20 0/0. Agiter, compléter à 200 cem. après refroidissement, et filtrer. 25 cem. du filtrat contiennent les déchets azotés de 1 gr. d’organe.

Le plus souvent, le filtrat est clair et limpide. Il ne doit pas contenir d’albumine. Pour s’en assurer, on verse dans un tube à essai 5 cem. du filtrat et 10 gouttes de réactif de TanrerT. Le liquide, porté à 100°, doit rester clair et limpide. Lorsqu'il contient des peptones, il se trouble pr refroidissement.

Malgré des filtrations répétées, certains extraits, qui ne contiennent pas d’albumine, restent plus ou moins troubles. Il en est ainsi lorsqu'ils contiennent beaucoup d’albumoses ou de peptones. Ces corps s’insolubilisent en partie et forment à la longue un léger dépôt dont il est facile de reconnaître la nature par la réaction du biuret.

Les extraits désalbuminés des organes riches en glycogène présentent une opalescence tout à fait caractéristique.

Suivant les cas, quelques modifications de détail ont dû être faites à la technique.

Ainsi, l'épuisement du muscle est assez difficile, et la quantité d’eau nécessaire pour l’épuiser est plus grande, de telle sorte que l'extrait désalbuminé est moins concentré.

Il arrive souvent que, même en sacrifiant de nombreux animaux, on ne puisse obtenir qu'un gramme et même moins d'organe. Les manipulations restent les mêmes, toutes choses égales, etc.

Use

Chez quelques invertébrés très petits, nous avons seulement préparé l'extrait désalbuminé de l’animal entier, ce qui nous u permis de prendre rapidement une vue d'ensemble des déchets azotés de l’animal.

La préparation des extraits, à partir des organes fixés dans l’alcool, ne présente rien de particulier, si ce n’est qu'avant le broyage l'alcool est décanté, versé dans une petite capsule de porcelaine, acidifié légèrement avec de l'acide acétique dilué, pour éviter le dégagement d’ammoniaque, et évaporé à 60°. Le résidu repris par l’eau chaude est ajouté aux liquides de décantation.

Avant de terminer ce paragraphe, il nous reste à dire que, quelquefois, nous n’avons pu peser l'organe, ce qui ne nous à pas permis de rapporter les résultats à 100 grammes. Les rapports gardent cependant leur intérêt.

2° Organes autolysés. — L'autolyse terminée, la préparation de l’extrait est faite comme celle des organes frais. Le seul point que nous avons donc maintenant à préciser est relatif aux conditions dans lesquelles a été faite l’autolyse.

Nous n'avons pas étudié les divers facteurs susceptibles de modifier l’autolyse, c’est-à-dire l’action de l’aération, des conditions de milieu, des sels, de la température, etc. Quel que soit l'intérêt de cette question, son étude dépasse le cadre de nos recherches.

Les conditions dans lesquelles a été faite l’autodigestion des organes étudiés ont été les suivantes :

L'organe pesé (5 à 10 gr.) est placé dans un petit vase cylyndrique de Bohême (50 cem.) stérilisé, dans lequel on verse 10 cem. envoron d’eau de mer ou d’eau salée physiologique, suivant que l’invertébré est marin ou terrestre. Après addition de chloroforme (1 à 2 cem.) et agitation, le vase est bouché à l’ouate puis avec un capuchon de caoutchouc, et porté à l’étuve à 38° pendant 24 heures. Dans quelques cas, qui seront signalés, l’autolyse a dû être faite à la température du laboratoire,

EN er III. — Recherches chimiques

Nous préciserons avec soin les détails de la technique chimique qui a été utilisée, car c’est d'elle, en définitive, ainsi que de la technique déjà étudiée, relative à la récolte des déchets azotés, que dépend la valeur des faits nouveaux qui seront mis

en évidence, sur lesquels sont basées en grande partie nos conclusions.

Les analyses ont porté presque exclusivement sur les matières azotées contenues dans les divers liquides désalbuminés. Toutefois, nous avons dosé aussi, assez souvent, l’azote total

(protéique et non protéique) et le glycogène contenus dans les organes frais.