C. — DOSAGE DE L’AZOTE NON PROTÉIQUE TOTAL

Ce dosage comprend : 1° la transformation en ammoniaque de l’azote des divers corps azotés par la méthode de KJELDAHL; 2° le titrage au formol de l’ammoniaque après distillation .

Pour la première opération, on introduit dans un ballon KRuELDAHL (Pyrex) de 200 cem. une quantité du liquide étudié

ne

variable suivant sa richesse en azote (25 cem. pour les liquides cavitaires et d'excrétion — 2,5 cem. pour les extraits désalbuminés d’organes) et 5 cem environ d’un mélange à parties égales d'acide sulfurique pur et de solution à 1 0/0 de sulfate de cuivre. On chauffe pendant une durée qui ne Goit pas être inférieure à deux heures après la décoloration. S'il arrive que, pendant l’opération, le contenu du matras se prenne en masse, on ajoute, après refroidissement, 5 cem. du mélange et l’on chauffe de nouveau.

Le liquide sulfurique, après refroidissement, est ensuite additionné d’eau distillée (20 ccm.), de phtaléine, et refroidi de nouveau. On ajoute ensuite de la lessive de soude, en léger excès (1 cem. environ), le matras étant immergé dans un cristallisoir rempli d’eau froide. Par distillation, on isole l’ammoniaque, qui est recueillie dans quelques cem. d'HCI N/20 et titrée au formol. Nous avons toujours poursuivi la distillation jusqu'à l'apparition de soubresauts. Dans les liquides très riches en sels minéraux, ils apparaissent de bonne heure; aussi est-il bon d'augmenter la quantité d’eau distillée (40 cem.).

Par le même procédé, avec quelques modifications, nous avons dosé ainsi l’azote total (protéique et non protéique) des organes ou des liquides.

Pour les organes, on pèse 250 mgr. que l’on introduit dans le ballon avec 5 cem. du mélange sulfurique. Les opérations sont les mêmes, mais la quantité d'NHS étant plus grande, est recueillie dans HCI N/2. La solution est diluée d’une façon convenable, à 50 ou à 100 ccm., dont on prélève seulement une partie (10 ccm.) pour le titrage au formol.

D. — DOSAGE DE L’AZOTE DU FILTRAT ET DU PRÉCIPITÉ Ph W.

L'acide phosphotungstique est un réactif qui a été très utilisé en chimie physiologique, pour la séparation des diverses matières azotées.

PeLAUNDLER, le premier, l’a utilisé pour l'étude de la répartition de l’azote urinaire. Chez les invertébrés, OTTO v. FURTH

PURE A a obtenu par l'emploi de ce réactif des renseignements intéres-

sants sur la composition de l'urine d'Octopus.

Ajouté en léger excès dans un liquide préalablement acidifié à 5 0/0 de SO‘HZ, le réactif phosphotungstique, qui est ainsi constitué (MOREL) :

Acide phosphotungstique très pur. . . 100 gr. ACITÉSUIEUTIQUE REC PE MERE 70 gr.

Réan Oisthlée me eee Q. S:p..1 litre.

précipite bien l’ammoniaque, les bases puriques et l’acide urique, les acides diaminés, les peptones et les albumoses, etc.

Par contre, l’urée, les acides monoaminés ne précipitent pas et se retrouvent dans le filtrat. Il était donc intéressant, surtout pour les liquides d’excrétion et les liquides cavitaires, d'effectuer cette séparation. En outre, les dosages de l’azote du précipité et du filtrat PhW peuvent servir à contrôler le dosage de l’azote non protéique total. Il est évident, en effet, que l’N du filtrat plus l’'N du précipité PhW doit être égal ou très voisin de l’N non protéique total.

Les liquides à étudier ont été additionnés de SO4H2 en auantité convenable pour que leur teneur soit de 5 0/0, et d'un excès de réactif PhW. Comme pour le dosage précédent, les prises ont varié suivant la richesse en azote des liquides. D'une façon générale, la prise a été double de celle de l’azote non protéique total (50 cem. pour les liquides cavitäires et d’excrétion; 5 cem. pour les extraits d'organes).

Après agitation, les liquides sont laissés au repos 24 heures On isole par centrifugation le précipité PhW. Après lavage avec SO/H2 à 5 0/0, on l’introduit sans en perdre dans un ballon KJELDHAL avec le mélange sulfurique. Les opérations sont les mêmes que précédemment. L'azote du précipité PhW est titré au formol après distillation.

Le dosage de l'azote contenu dans le filtrat PhW se fait de la même façon, après avoir introduit dans un autre ballon les liquides séparés par centrifugation,

Il faut toujours s'assurer que la précipitation des phosphotungstates a été totale, en ajoutant un peu du réactif PhW dans le liquide clair obtenu après centrifugation.

E. — DOSAGE DE L'AZOTE AMINÉ LIBRE ET DE L’AZOTE VOLATIL TITRABLE AU FORMOL.

Sans transformation préalable par le procédé KJELDHAL, l'azote des acides aminés (SÔRENSEN), l'azote de l’ammoniaque et de quelques amines (RONCHÈSE) sont directement titrables au formol.

Alors que l’azote aminé est fixe, l'azote de l’ammoniaque et des amines est volatil, de telle sorte qu'il faut tout d’abord séparer exactement l'azote fixe de l'azote volatil par distillation à basse température.

Dans ce but, nous avons utilisé avec de bons résultats le principe de la méthode dite d'aération de For (1903), dont s'était déjà servi BOUSSINGAULT (1850) dans ses recherches sur la quantité d’ammoniaque contenue dans l’urine.

L'appareil dont je me suis servi, dont le dessin se trouve dans la thèse du D' BREL (Bordeaux, 1921), qui a été faite sous ma direction, se compose : 1° de deux flacons laveurs de Du- RAND, l’un contenant de l’acide sulfurique pour débarrasser l'air qui pénètre dans l'appareil des traces d’ammoniaque, l’autre contenant une solution concentrée de soude pour fixer l'acide carbonique; 2° d’un tube de pyrex de fort calibre, dans lequel on introduit le liquide à étudier, et qui est plongé dans un bain-marie d’eau, qui sera chauffé à 40°; 3° de deux petits flacons laveurs, contenant quelques cem. d'HCI N/20 destinés à recueillir l'azote volatil; 4° d’une trompe à eau.

En outre, pour empêcher la formation de mousse au cours de la distillation, on interpose entre flacons laveurs de DURAND et le tube pyrex un tube en T, relié à un entonnoir à robinet, qui permet l'introduction d'alcool dans le pyrex au cours de la distillation. Enfin, pour éviter le passage d’un peu de mousse,

un tube à boule est placé entre le pyrex et les flacons contenant HCL N/20.

L'expérience nous a montré qu'avec cet appareil la distillation de très petites quantités d'azote volatil (0,1 à 0,5 mgr. environ) est totale, après une heure d’aération, à 40°. Lorsque la quantité d’azote volatil est plus forte (ce dont on est averti par un premier dosage fait immédiatement après une heure), il est nécessaire de continuer l’aération dans les mêmes conditions pendant une deuxième heure. Il suffit alors de changer rapidement les flacons contenant HCI N/20.

Pour déterminer l'azote volatil titrable au formol des extraits désalbuminés des organes, une concentration préalable du liquide n’est pas nécessaire. On introduit directement dans le tube pyrex de fort calibre un volume correspondant à 1 gr. d'organe, soit 25 cem. le plus souvent. Le liquide est légèrement alcalinisé, en présence de phtaléine, après addition d’une pincée de chlorure de baryum pulvérisé, avec de la baryte en poudre. On ajoute 5 à 10 cem. d'alcool a 90°, pour éviter la formation de mousse et faciliter la distillation.

L'appareil étant monté, on chauffe le bain-marie à 40° et l’on met en action la trompe à eau, etc.

Les liquides d’excrétion et les liquides cavitaires, ne contenant que très peu d'azote, le dosage de l'azote directement titrable au formol ne peut être effectué avec précision qu'en opérant le dosage sur une bien plus grande quantité de liquide (50 ce. au moins, 100 cc. en moyenne, et quelquefois 200 cem.). Dans ces conditions, il est nécessaire de leur faire subir une concentration préalable pour les réduire à un volume égal ou inférieur à 20 cem. On sature tout d'abord l'excès de leur acidité par de la soude à 10 0/0 en présence de phtaléine. Les liquides encore légèrement acides, pour éviter le départ de l’ammoniaque, sont ensuite concentrés au bain-marie à 55°, 60°

Après concentration, le liquide est introduit avec l’eau de lavage dans le tube, et la série des opérations est la même que pour les extraits A organes,

hit

Le titrage au formol de l'azote volatil contenu dans les deux barboteurs contenant HCI N/20 ne présente aucune particularité. L'alcool distillé facilite le dosage, qui re diffère en rien de ceux que nous avons déjà étudiés.

Le titrage au formol de l'azote fixe contenu dans le liquide du tube pyrex est un peu différent. Par filtration on se débarasse du précipité de phosphates et de carbonates, qui est lavé avec une petite quantité d’eau distillée tiède. Le filtrat est décoloré par addition de quelques gouttes d'HCI N puis N/2, puis ramené à la légère teinte rosée avec quelques gouttes de baryte titrée en présence d’un excès de pthaleine.

Dans le liquide exactement neutralisé on verse un excès de formol (20 em. environ) puis de la barvte titrée jusqu'à coloralion rouge suivant les indications de SÔRENSEN, et l’on note le volume de baryte employé. De ce volume, on retranche le volume de baryte titrée nécessaire pour faire apparaître la même coloration rouge dans un témoin où, toutes choses égales, l’on a remplacé le liquide étudié par un volume égal d’eau distillée neutralisée. En moyenne, dans nos essais, ce volume a été de 0,2 ccm.

Il faut enfin s'assurer que la coloration rouge obtenue persiste après une nouvelle addition de formol neutre.

La question qui se pose maintenant est celle de connaître exactement les composés azotés qui sont ainsi titrés au formol, soit comme azote fixe, soit comme azote volatil. Les recherches de SOÔRENSEN, dont j'ai déjà donné un résumé dans ma thèse (1910), ont démontré que l’azote de la plupart des acides aminés se titre bien au formol. L’azote fixe renseigne donc surtout sur la teneur des liquides en azote aminé libre, c’est-à-dire appartenant à des acides aminés.

Cependant, il existe,en très petite quantité il est vrai, dans les albumoses et les peptones des groupes aminés directement titrables au formol, de telle sorte que, pour ceux de nos liquides qui contenaient de notables quantités de ces corps, le chiffre obtenu n'est pas parfaitement exact.

En ce qui concerne l’azote volatil titrable au formol, on ad-