À. — DONNÉES GÉNÉRALES; ESSAIS PRÉLIMINAIRES

Dans les liquides d’excrétion et dans les liquides cavitaires, il n’est pas aisé de déterminer avec précision la réparütion de l’azote non protéique, et d'établir ainsi le rapport de chaque corps azote dosé à l’azote total. C’est vraisemblablement pour cette raison que R. G. MYERS (1920) a signalé dans le sang de certains invertébrés une variation considérable du rapport de l’azote uréique à l’azote total. Par exemple, chez les Astéries, ce rapport variait de 22 à 62 0/0, etc.

Etant donnée la très petite quantité d’azote contenue dans 100 cc. de liquide cavitaire désalbuminé (4 à 12 mgr.) et la quantité encore plus faible contenue dans les liquides d’excrétion (0,5 à 2,0 mgr.), 1l est évident que les moindres causes d'erreur ont une importance considérable, d'autant plus que les corps azotés sont dissous le plus souvent dans de l'eau de mer, très riche en sels minéraux qui peuvent gêner les dosages.

Aussi, avant de commencer notre étude, nous avons dû mettre au point une technique adaptée à nos recherches.

Dans ce but, nous avons fait de longs et nombreux essais préliminaires, sur le détail desquels il nous paraît inutile d’insister. En voici le principe : une même urine (5 cem.) est diluée à 200 cem., d’une part, avec de l’eau distillée, d'autre part,

avec de l'eau de mer; on essaye comparativement sur les deux liquides les méthodes microchimiques actuellement en usage pour le dosage des constituants de l’azote non protéique du sang; la technique est modifiée jusqu'à obtention de résultats satisfaisants.

L'idée directrice qui nous a guidé dans ces recherches est la suivante : opérer le plus possible le dosage des divers corps azotés « toutes choses égales », c’est-à-dire avec une même liqueur titrée afin d'obtenir la plus grande sécurité dans l’établissement des rapports.

Finalement, nous avons adopté la méthode au formol, déjà recommandée par RONCHÈSE, qui nous a permis de réaliser cette condition dans une large mesure, puisque, à l'exception de l’azote de l’acide urique, qui a été dosé colorimétriquement, nous avons pu titrer au formol l’azote de tous les autres corps azotés, soit directement, soit après isolement et transformation de leur azote en ammoniaque par la méthode de KJELDHAL.

B. — DOSAGE AU FORMOL DE TRÈS PETITES QUANTITÉS D'AZOTE AMMONIACAL (0.03 à 3.0 MGR.).

Pour transformer la méthode de titration au formol en mé thode microchimique, il est nécessaire de lui faire subir quelques modifications en vue de la sensibiliser.

Le matériel est le suivant: 1° une microburette de 5 cem.,dont chaque cem. est divisé en 20 parties; 2° une solution de baryte titrée, dont 1 ccm. correspond exactement à 0,3 mgr. d'N:; 3° une solution de formol purifiée et exactement neutralisée; 4° une solution alcoolique de phtaléine du phénol à 1 0/0.

La purification préalable de la solution commerciale de formol est très utile, car, si l’on emploie directement la solution commerciale neutralisée par de la baryte, les impuretés qu'elle contient provoquent souvent un trouble qui gène le dosage. Dans ce but, on verse dans un litre de la solution commerciale 10 cem. de phtaléine, un peu de chlorure de baryum pulvérisé, et de la baryte en poudre en quantité suffisante pour obtenir

PS. || Es la teinte rouge. Le liquide est agité et laissé au repos quelques heures. Il se forme un précipité dont on se débarrasse par filtration. Le filtrat est ramené à la décoloration par addition de quelques gouttes d'HCI N. S'il se forme, avec le temps, un dépôt, on s'en débarrasse par décantation. Avant son emploi, la solution de formol doit être claire et limpide, le virage à la

teinte rose doit se faire nettement, à une goutte près de solution de baryte titrée.

La liqueur titrée de baryte est préparée de la façon suivante :

On part d’une solution d'oxalate pur d'ammoniaque, contenant 0,3 mgr. d'N pour 1 cem., obtenue en dissolvant 1 gr. 522 d’oxalate dans un litre d’eau distillée, et d’une solution diluée de baryte (N/45 environ).

Dans un ballon de 200 ccm., on introduit 5 cem. de la solution d’oxalate, 20 ccm. d’eau distillée, et 1 cem. de lessive de soude. On distille et l’on recueille tout l’ammoniaque dans 2 à 3 cem. d’HCI N/2 contenus dans un bécher de 100 cc. (forme haute). La distillation terminée, on titre l’ammoniaque au formol, après neutralisation exacte.

Dans ce but, on ajoute au liquide X gouttes environ de phtaléine, puis, par petites affusions, de la baryte saturée (contenue dans un compte-gouttes AUCHÉ) jusqu’à teinte rouge. On revient juste à la décoloration avec quelques gouttes d'HCI N/20. Pour avoir une neutralisation exacte (à une goutte près), on verse quelques gouttes de la solution de baryte à titrer contenue dans la microburette, jusqu'à obtention d’une légère teinte rose, qu'il est facile de saisir sur fond blanc, à la lumière du jour.

Dans la solution exactement neutralisée, contenant l’ammoniaque sous forme de chlorydrate, on verse un excès (5 à 10 cem.), de la solution purifiée de formol, qui a été exactement neutralisée de la même manière; on verse ensuite peu À peu en agitant la solution de baryte a titrer, contenue dans la burette. On note exactement le volume de baryte employé pour l'obtention d’une teinte rose nette. Soit 4,5 ccm. par exemple,

Loire

Pour obtenir la solution titrée de baryte correspondant, volume à volume, à la solution d’oxalate d'ammoniaque, il suffira, comme on sait, de diluer convenablement la solution de baryte et de contrôler la dilution par un nouveau dosage.

Nous avons un peu insisté sur les détails de cette titration, car, somme toute, tous nos dosages au formol, à l’exception, toutefois, de celui de l’azote aminé, ont été effectués de la même façon.

La plupart d’entre eux ont été effectués après transformation en ammoniaque de l’azote du composé étudié, par la méthode de KJELDHAL. Dans ces conditions, pour cette méthode comme pour les autres, il est indispensable de s'assurer, au préalable, de la pureté des réactifs (acide sulfurique, lessive de soude) qui doivent être exempts d’ammoniaque.

A côté de cette cause d'erreur, il en existe une autre qui est inhérente à la méthode au formol, mais qu'il est facile d'éviter.

On sait, en effet, que leS sels d'ammoniaque agissent sur la phénolphtaléine en retardant l'apparition de la teinte rose, d’où une légère erreur par défaut. Si l’on prend soin de ne titrer au formol que des quantités d’azote égales ou inférieures à 10 ccm. de baryte titrée, la cause d’erreur est négligeable. Pour les quantités de baryte supérieures à 5 cem., il est d’ailleurs facile, en suivant les indications de RONCHÈSE, c'est-à-dire en ajoutant 0,1 cem. pour 3 cem. de liqueur titrée, d’avoir le chiffre exact. En pratique, nos prises ont été telles que la quantité de baryte titrée utilisée n’a pas dépassé 10 cem.

En résumé, avec quelques modifications, la méthode au for-

mol permet de doser avec précision de très petites quantités d'azote.