III. — Holothuria tubulosa

Données antérieures. — Peu de recherches ont été faites sur l'excrétion azotée de ces êtres, qui, d’ailleurs, se prêtent mal à ce genre d'étude. S’alimentant surtout avec du sable, leur activité digestive paraît très réduite au point de vue protéolytique. C'est ainsi que, d’après COHNHEIM, l'extrait intestinal de l'Holothurie est incapable de digérer des substances protéiques telles que la fibrine ou le muscle. Lorsque l'extrait intestinal est soumis à l'épreuve de l’autolvse, à la température du laboratoire ou à l’étuve, en présence de toluol, pendant une semaine, if ne se produit pas d’autodigestion. Après désalbumination, la réaction de Biuret’s’est montrée négative dans le liquide, qui donnait avec le réactif PRW un léger précipité. Le filtrat

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PhW ne contenait, après évaporation, ni leucine, ni tyrosine.

La seule recherche qui ait été faite sur la nature des déchets azotés évacués dans le milieu extérieur est due à COHNHEIM, qui a opéré de la façon suivante. Les animaux ont été placés dans un vase rempli d’eau de mer, fermé par un bouchon à deux trous. Grâce à un tube plongeant au fond du vase, un courant d'oxygène traversait l’eau de mer et barbotait ensuite dans un flacon laveur, contenant une solution titrée d'acide sulfurique, pour capter l’ammoniaque. Dans ces conditions, après l’expérience, qui à duré quarante-huit heures, le titre de la solution n'a pas varié, ce qui démontre, d’après l’auteur, qu'il ne s'est formé ni ammoniaque ni bases volatiles. En outre, le dosage de N total par la méthode de KJELDAHL, effectué comparativement dans l’eau de mer où avaient vécu les animaux et l’eau de mer témoin, montre que les deux liquides contiennent aussi peu d'azote l’un que l’autre. Par contre, le même dosage, effectué sur les matières évacuées par l'intestin, a permis de mettre en évidence la présence en quantité notable d'N, soit, par exemple, {7,6 mgr. pour les matières évacuées en deux jours par trois grosses Holothuries, récemment capturées. En se basant sur ces faits, O. COHNHEIM est arrivé à cette conclusion que chez les Holothuries la seule voie d’excrétion pour les déchets azotés est l'intestin.

La critique des recherches de COHNHEIM à été faite par FR. BURIAN, qui n'a pas accepté cette conclusion.

Vu la très petite quantité d'N excrété par les Holothuries, il est évident, d’après BURIAN, qu'on ne peut trouver dans l’eau de mer où ont vécu les animaux pendant quarante-huit heures que des traces d'azote. L'analyse de COHNHEIM n'ayant porté que sur une partie seulement du liquide d’excrétion, on s’explique aisément le résultat négatif obtenu par l’auteur. D'autre part, la présence en quantité notable d'N dans les matières rejetées par l'animal n'a pas, pour BURIAN, la valeur démonstrative que lui accorde ConnNHetM. Il n’est pas certain que l'N doisé soit de l'N excrété. Il peut provenir dans une large mesure de matériaux azotés d’origine alimentaire, qui n'ont

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pas été assimilés. C'est ainsi que, par le calcul, BURIAN estime

à 6,0 mgr. la quantité maxima d’N qui a pu être excrétée, alors que COHNHEIM à trouvé 17,6 mgr. dans l'expérience déjà citée. li n’est donc pas certain que les déchets azotés de l'Holothurie se retrouvent seulement dans les matières évacuées par l’intestin.

Les recherches qui ont porté sur le liquide cavitaire sont, elles aussi, peu nombreuses. Dans 100 cmc du liquide, débarrassé des éléments figurés, O. COHNHEIM à trouvé un peu plus d'azote total (2,5 mgr) que dans l’eau de mer (0,4 mgr); il conclut néanmoins que le liquide est de l’eau de mer pure. Chez Holothuria tubulosa, Li. SANzO a dosé l'urée, par sa méthode, qui à été déjà décrite (cf. chapitre II technique). Dans deux analyses, il a trouvé respectivement, pour 1C0 eme, 0,783 et 1,051 mgr, soit en moyenne 0,91 mgr d'urée, quantité qui est environ trois fois moindre que celle qui a été trouvée par le même auteur dans le liquide cavitaire des Echinides.

En ce qui concerne la recherche des déchets azotés au sein des organes, BORDAS a fait une observation intéressante, qui, toutefois, mérite confirmation, car elle n'a pas été trouvée exacte par SCHULTZ. Il a signalé la présence d'acide urique dans l'extrait des poumons aquatiques de l’'Holothurie, organes qui, comme on sait, jouent un rôle respiratoire et excréteur, analogue à celui des branchies dermiques des ñsueries et des branchies buccales des Oursins. Signalons enfin que la présence d’acide urique à été encore signalée par van der HEYDE dans la partie terminale de l'intestin de Thyone briarcus.

Recherches personnelles. — Elles ont porté sur les grandes Holothuries, que l’on trouve assez facilement à Guéthary, par les grandes marées, sous les pierres littorales. D’après CUÉNOT, l'Holothurie de Guéthary est certainement 77. tubulosa Gmelin.

Comme pour les autres Échinodermes, nous avons recherché les déchets azotés : 1° dans l’eau de mer où avaient séjourné les animaux; 2° dans le liquide cavitaire; 3° dans certains organes considérés comme organes d’excrétion, c’est-à-dire dans l'extrait désalbuminé de l'intestin et du poumon.

La récolte des déchets azotés dans l’eau de mer présente des difficultés, car il arrive souvent qu'au cours de l'expérience,

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le tube digestif de l’animal est évacué entièrement. D'autre part, les circonstances ne nous ayant pas encore permis de répéter et de compléter nos recherches, faites en octobre 1923, nous en donnons seulement les résultats à titre d'indication, nous réservant de les compléter plus tard. Pour l'intestin et le poumon, les dosages n'ont pas été rapportés à 100 gr., mais à une quantité indéterminée.

Eau |Liquide [Intestin [Intestin Mgr genes [EE [nes | ne |Peumon N.

100 cemroo cem| Xger. | Xgr. | Xgr.

N non prot‘ique total.......... a el Où TAMPONS QU CONS N {NHB et bases volatiles)... ....... 0,13 Fe 14 | 2 200 10EUSS N'ONEP ER re Den ete Leu 0,06 | 0,40 | 8,00 | 2,74 | 140 NiuPée tente AR de ap ni het ne te 0,2 | 0,07 | 0,64 | 0,07 | 0,15 N'DUTIQUE. ee at tee ee 7 INU/UERNO 06 1,10 | 0,25 | 0,55 N'ECEATUE RENENER PART Er 9,00 | — Traces 0,00 | — = (ee | NÉPANVNIIIRAR MERE AMAN EUR 0,11 | 0,60 cl — — NAPNNVEDrECIPIT RER RARE #0, a | 0,55 115, 00 + — Nénontdoséss tr. ù M MST . À Fa 06 Ne 15,04 3,88 Es

Il se dégage de l'examen des résultats obtenus qu'il n'existe pas de différence essentielle entre l'excrétion azotée des Holothuries et celle des autres Echinodermes. A vrai dire, les déchets azotés se trouvent en plus petite quantité dans le hquide cavitaire et dans l’eau de mer où ont vécu les animaux, mais le fail peut s'expliquer par la nature de leur alimentalion et le peu d'intensité de leurs échanges azotés. Contrairement à l'opinion de COHNHEIM, il n'est pas douteux que l’ammoniaque dont la présence est générale, et qui forme une

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partie notable (10 %) de N de l'extrait désalbuminé de l'intestin, est un des déchets principaux de l’excrétion de ces êtres.

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De l'ensemble des recherches qui viennent d'être exposées sur l’excrétion azotée des Astéries, des Oursins et des Holothuries, il se dégage quelques faits, qui peuvent être ainsi résumes :

1° L'eau de mer dans laquelle ont vécu des Echinodermes contient en petite quantité des déchets azotés solubles, les mêmes que ceux qu'il est possible de retrouver dans le liquide cavitaire. On ne peut donc admettre que, chez ces êtres, l’excrétion s'effectue seulement sous forme de corps azotés peu solubles ou insolubles, évacués par l'intestin, mode d’excrétion que O. COHNHEIM considère comme étant seul en jeu chez les Holothuries ;

2° L’excrétion azotée des Ecbinodermes ne consiste pas en une simple phénomène de diffusion ou d’osmose à travers la membrane qui sépare le milieu intérieur du milieu extérieur. L'étude comparée de la répartition de l'azote non protéique dans le liquide cavitaire et dans l’eau de mer où ont vécu les animaux démontre, en effet, la réalité d’une certaine sélectior: élective en vue de l'élimination des déchets azotés. C'est ainsi que l'azote ammoniacal contenu dans le liquide cavitaire est excrété, toutes choses égales, bien plus activement que l'azote aminé ;

3° Dans une large mesure (60 à 70 % environ) il est possible d'identifier les déchets azotés solubles évacués dans le milie1 extérieur. L’azote titrable au formol forme plus de la moitié de l'azote excrété; l’excrétion ammoniacale est en général plus intense que celle de l’azote aminé. L’urée est excrétée en assez faible quantité, ainsi que l’azote purique;

"© 11 existe bien des traces d'acide urique dans l’organisn>: des Echinodermes, en particulier dans le liquide cavitaire et les organes digestifs, mais, vu la quantité infime de ce corps dans l’eau de mer où ont vécu les animaux (moins de 1 0/0

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de N total), on ne peut admettre avec van der Hype que l’acidé urique représente le principal déchet azoté de l’excrétion.

5° Les déchets azotés paraissent se former principalement dans les organes digestifs, dans les cœcums radiaux chez les Astéries, dans l'intestin chez les Oursins et les Holothuries, et avoir pour origine, dans une certaine mesure, les mutations chimiques nécessaires pour la transformation en produits sexuels des matériaux azotés d'origine alimentaire.

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L'excrétion des Vers à été l’objet de nombreuses recherches, mais pour ces êtres, comme pour les Echinodermes, les processus histo-physiologiques ont été beaucoup plus étudiés que les processus biochitniques,.

À l’aide de la méthode des injections de matières colorantes dans la cavité générale, KoWALEVSkI, L. CUÉNON, J. DARBOUX, M. ABELOOS, M. ROMIEU, etc. ont mis en évidence le rôle iinportant que jouent certaines cellules et certains tissus dans l'excrétion, en dehors des néphridies dont la fonction excrétrice est connue depuis longtemps.

Les cellules excrétrices, appelées par CUÉNOT et par BRUNTZ des néphrocytes et des néphrophagocytes, désignées par GRAF sous le nom de tissus excrétophores, seraient capables de fixer electivement non seulement certaines matières, colorarites mais les déchets solubles ou insolubles, de les rassembler dans les vacuoles à l’état solide où demi-solide, sous forme de granulations.

Ce sont, par exemple, le corps cardiaque des Annélides (M. ROMIEU), les cellules du péritoine pariétal, certaines cellules libres du liquide cœlomique (hématies, amibocytes jeunes, urnes ciliées des Sipunculiens, d'après CUÉNOT), les cellules dites « chloragogènes » riches en granulations brunes et jaunes, qui tapissent l'intestin des Oligochètes, etc... La nature chimique des granulations contenues dans les cellules excrétrices est encore mal connue. Un bon exposé de la question a été fait par BURIAN dans son article sur l’excrétion des vers. Il conclut d’une facon très générale que les granulations des tissus excrétophores sont de même nature que celles des néphridies, Elles seraient constituées par des corps chitineux et des composés puriques.

La présence de guanine a été très souvent signalée dans les granulations.

Vu l'abondance des granulations puriques chez certaines espèces, chez les Annélides par exemple, BURIAN estime qu'il est possible d'admettre que les corps puriques des granulations se forment par synthèse aux dépens des déchets azotés provenant de la dégradation des protides, par un processus analogue à celui de la formation de l’acide urique chez les Oiseaux.

S'il en est ainsi, on devrait admettre que l’excrétion azotée des Vers s'effectue principalement sous la forme de corps puriques. À l’appui de cette opinion il est possible de citer encore les recherches de D. ACKERMANN et F. KUTSCHER qui ont signalé la présence d’adénine dans les matières extractives du Lombric et admis que l’adénine représente le déchet azoté le plus important de ce Ver.

Mais, pour admettre cette hypothèse, basée seulement sur la présence de corps puriques dans les tissus excrétophores et dans les matières extractives, il serait nécessaire de connaitre exactement, comme l'a d'ailleurs fait remarquer BURIAN, la COmposition du liquide excrété par les néphridies et d'une façon plus générale la nature et l'importance relative des déchets évacués dans le milieu extérieur. À ce point de vue la question reste très obscure, car les recherches chimiques ui ont été faites dans cette direction sont peu nombreuses ef ne concordent pas avec les données histo-chimiques.

C'est ainsi que J. LESSER, qui a étudié les déchets azotes évacués dans le milieu extérieur par les Vers de terre n'a pas trouvé d'azote purique, et que PUTTER chez la Sangsue a trouvé seulement 1,4 mgr d'azote purique pour 80,9 mgr d'azote excrété RAA NeR

Ces faits laissent supposer que les déchets azotés solubles prennent une place importante dans l'excrétion et qu'il n'est pas prudent d'admettre que l'excrétion s'effectue principalement sous forme de corps puriques, en se basant seulement sur la présence dans les cellules excrétrices de granulations de nature purique. Dans l’ensemble nos recherches démontrent le bien

fondé de cette opinion.

I — Aphrodite aculeata

Données antérieures. — G. DARBOUX (1899) a constaté, à l’aide de la méthode des injections, que des matières colorantes (indigo-carmin, fuchsine acide, vésuvine, safranine, vert de méthyle), injectées dans le cælome, sont fixées par certaines cellules des cœcums de l'intestin, alors que d’autres matières colorantes, telles que le carminate d'ammoniaque et le tournesol bleu sont éliminées par les néphridies. Il a recherché comparativement, par le procédé de MARCHAI, la présence d'acide urique dans les cœcums et dans les néphridies. N'ayant obtenu un résultat positif que pour les cœcums, il a conclu que « les cœcums sont des reins à indigo-carmin excrétant normalement, comme la plupart des reins de cette catégorie, des dérivés de l'acide urique. Cette fonction excrétrice est localisée dans les cellules à vacuoles ».

Dans le liquide de coloration brune, contenu dans les cœæcums, la présence de corps puriques a été signalée par BURIAN. Le liquide est débarrassé des phosphates. Après filtration, il se forme un précipité abondant par addition de la mixture ammoniaco-magnésienne et de la solution ammoniacale d'’azotate d'argent. L'identification des composés puriques du précipité argentique n’a pu être faite, par suite de la trop petite quantité de suc. Toutefois, la présence de guanine a été constatée, ainsi que l’absence d'acide urique.

Lorsque j'ai étudié, en 1912, la répartition de l'azote non protéique dans le liquide cavitaire de quelques Vers, j'ai signalé chez l’Aphrodite la présence d’une très petite quantité d’ammoniaque et d'azote titrable à l'hypobromite de soude.

Recherches. —— N'ayant eu à ma disposition que quelques Aphrodites il ne m'a pas été possible d'identifier les déchets azotés contenus dans l’eau de mer où avaient vécu ces animaux ; j'ai étudié seulement la répartition de l’azote non proteique

dans leur liquide cavitaire, dans ke suc des cœcums, et enfin, comme terme de comparaison, dans le muscle.

Les résultats obtenus ont été réunis dans le tableau suivant :

Mgr d'N

Dans 100 ccm

Dans 100 gr.

Liquide Liquide Liquide Muscle

cavitaire cavitaire des de la INC No 2 cœcums Trompe N protéique .... 0,0 36, 0 — — N nonprotéique 1,5 30,0 912.0 765,0

LUI) PERTE \- NNINÉHS Re 0,6 0,7 23,0 11,6 NON) Re 1,6 10,5 398.0 339 0 |

N'Uréel ns. 0,9 0,8 | ONE) 1.6 N Purique ..…. — - 19,5 N (A Urique). + 0.05 0,06 1,0 0.0

Le liquide cavitaire N° 1 était clair, limpide comme de l'eau de mer ; il ne contenait pas en suspension d'éléments génitaux. Sa composition s'est montrée assez voisine de celle du plasma des Echinodermes, en ce sens qu'il renferme lui aussi une quantité notable d'ammoniaque et d'urée ot très peu d'acide urique, ce qui laisse supposer que l'azote formol et l'azote urée jouent un rôle important dans l'excrélion.

Nr Buéltait par suite de la présence d'éléments génitaux. On s'explique ainsi sa plus forte teneur en azote protéique, et aussi sa teneur élevée en azote

Le liquide cavitaire opalescent,

non protéique total ef en azote aminé, Par contre les déchets azotés, ammoniaque, urée et acide urique, s'y trouvent sensiblement dans la même proportion que pour le liquide cavitaire N° 1. Les éléments génitaux ne retiennent pas les déchets azotés alors qu'ils fixent et utilisent pour leur développement les matériaux azotés libérés dans les cœcums au cours de la protéolyse digestive.

Le liquide brun des cæcums est, d'après sa constitution chimique, un suc nutritif destiné à l'assimilation. Il est en effet très riche en acides aminés et contient une quantité notable de peptones. D'autre part, il ne contient, par rapport à l'azote non protéique total, qu'une petite quantité de déchets azotés, dont il est difficile de saisir l’origine. C'est ainsi que l’ammoniaque contenue dans le suc peut avoir une double origine. Elle peut étre d’origine exogène, c'est-à-dire prendre naissance au cours de la protéolvse digestive, ou d’origine endogène, c’est-à-dire être excrétée par les cellules des cœcums. Nous avons déjà signalé que d’après DarBoux les cellules à vacuoles des cœcums excretent de l’acide urique. La présence en quantité notable de ce corps dans le suc des cœcums vient à l'appui de cette opinion, mais il est possible aussi qu’une partie de l’acide urique soit d’origine exogène.

HI, — Lumbricus agricola

J. LESSER a laissé un grand nombre de Vers de terre [100 environ) dans un récipient pendant 24 heures, et les a ensuite lavés ainsi que le récipient. Le liquide a été concentré. Malgré la présence d’une certaine quantité d'azote total dans ce liquide, l’auteur n'a pu identifier la présence d’urée, d'acide urique et de bases puriques. Il à signalé seulement des traces d'ammoniaque. BURIAN a critiqué la technique mise en œuvre par LES- SER pour la récolte des déchets azotés. Se basant sur le fait que le contenu des néphridies n'est évacué que par intermittence, et assez rarement, il estime que, même en opérant sur un grand nombre d'animaux, la durée de 24 heures pour la récolte est insuffisante.