C. 3° épuisement. Volume 450 ce

Coagulum obtenu : 0 gr. 756 00, contenant :

azote coagulable . 3 et er 0,121 0/0

azote non coagulable du liquide, . . 0,381 »

jbdéiaes sut vs! x

de vante nié ie tt dise vin ind sin ant aa bent ni rélhéite ri

Poids de coagulum : 0,756 X 4,5 = 3 gr. 40.

Poids total : 7.45 de la levure séchée à l'air employée.

L 10,30 + 3.40 — 21 gr. 15, soil 10,57 0/0 du poids

ndre compte, les liquides res-

Comme il est facile de s'en re autant d'azote

tant après coagulation renferment à peu près que le coagulum obtenu.

Les liquides A, Bet C, aussitôt recueillis, sont additionnés de leur volume d'une solution saturée de sulfate d'ammonium ; il se fait un léger précipité que l'on sépare par filtration et le liquide légèrement acidulé est à 100° pendant une demi-heure.

bouillante est ensuite essoré et lavé

ussitôt coagulé par chauffage Le coagulum lavé à l'eau

jusqu'à disparition du sul-

fate d'ammonium.

Les liquides À, Bet u donnent toutes les réactions de préeipitation des protéiques :

chlorhydrique. trichloracétique. acé-

Par les acides (sulfurique. nitrique, précipité blanc

HT ONE Par l'acide phosphotungslique — blanc

— le ferrocyanure acélique. + + tt — blanc jaunâtre — l'acide pierique + + + + — jaune

__ l'iodure de potassium et de mercure -- jaunâtre

__ l'jodure de potassium et de bismuth . -— orangé

__ Je chlorure mercurique — blanc

Je chlorure de platine. + + + + * * © — jaunàtre

__ J'iodure de potassium iodé — jaune

— blane.

= aQie meltaphosphorique

le coagulum purilié, donnent

Ces liquides, aussi bien que ces réactions n'ont

toutes les réactions colorées des protéiques :

pas la mème intensité :

Xanthoprotéique, MiLox, biurete ne cor eee intense HORRINS RE EE ER LEE moyenne PARTOUT GES M On GO CE CT très intense Aldéhyde d'Ennucm et acide sulfurique . . très intense faible.

SOUITB A us or cute U s'agit done d'une protéine soluble à l'eau et coagulable par nt du groupe des albumines.

la chaleur, vraisemblableme une extraction pro-

Le rendement peut-il être augmenté par

longée pendant un temps plus long, ou par l'emploi de solvants différents? Pour répondre à cette question, on mélange 100 grammes de levure Scuroper avec 600 cc. d'eau distillée, on laisse macérer 16 heures à 35° et on filtre. On recueille 380 «ce. d'un liquide jaune, limpide, qui se prend en masse par chauffage à l'ébullition {liquide A).

Le résidu délayé dans 300 ce. d'eau distillée, est abandonné à 35° pendant 4 heures, puis filtré. On recueille 200 cc. (liquide B).

Enfin, on répète en même temps cette expérience, exactement de la même manière, en remplaçant l'eau distillée par une solution de chlorure de sodium à 10 0/0.

On à les résultats suivants :

Extraction à l'eau distillée.

A. 1° épuisement. Volume 380 cc.

Coagulum obtenu :2 gr. 196 0/0 contenant :

azote coagulable. , , , . DE 0,351 0/0 azote non coagulable du liquide, , . 0,456 »

Poids de coagulum : 2,196 X 3,8 — 8 gr. 345.

B. 2 épuisement. Volume 200 cc.

Coagulum obtenu : 0 gr. 763 0/0 contenant :

azole coagulable. . . . . ,. , . 0,422 0,1 azote non coagulable du liquide. . . 0,266 »

Poids de coagulum :0,763 X 2 — 1 gr. 526.

Poids total extrait à l'eau : 8.345 + 1,526 — 9 gr. 871.

Extraction à l'eau salée.

À. {* épuisement. Volume 380 ce.

Coagulum obtenu : 1 gr. 76 0/0 contenant :

azote coagulable . . . . . 0,281 0/0 azote non coagulable du liquide, . , 0,456 »

Poids de coagulum : 1,76 X 3,8 — 6 gr. 688.

B. 2e épuisement. Volume 220 cc.

Coagulum obtenu : 0 gr. 70 0/0 contenant

azote coagulable NAT azote non coagulable du liquide.

l'oids de coagulum : 0,70 x 2,2= 1 gr. 54.

Poids total extrait à l'eau salée : 6,688 + 1,34 = 8 gr. 228.

L'extraction à l'eau salée ne semble pas favorable.

néanmoins répété en comparant l'action de à 10 0/0 à celle d'une solution de carbonate de

Cet essai est 1 l'eau distillée et de l'eau salée alcaline renfermant 2 grammes par litre sodium CO'Na?.

On délaie 100 grammes de levure Scaroper dans 600 cc. de dissolvant, on laisse macérer 7 heures et demie à 39° et on filtre. Le résidu est délayé dans 600 ec. du même dis- 17 heures à 35° et filtré. Les solutions obtenues sont légèrement acides, excepté dans le cas de la liqueur alcaline, ou le premier liquide d'épuisement, d'abord alcalin, devient neutre après quelques heures et légèrement le deuxième épuisement reste faiblement

solvant, abandonné

acide à la fin :

alcalin.

Voici les chiffres obtenus :

Extraction à l'eau distillée.

A. 1 épuisement. Volume 370 ce.

Coaguium obtenu : 1 gr. 77 0/0 contenant

azote coagulable

azote non coagulable du liquide . 0,342 »

Poids de coagulum : 1,77 X 3,1 = 6 gr. 549.

B. 2 épuisement. Volume 440 cc.

Coagulum obtenu : 0 gr. 49 0/0 contenant :

azote coagulable . . . + + * : 0,078 0/0 azote non eoagulable du liquide. : 0.214 »

Poids de coagulum : 0,49 X 4,4 = 2 gr. 156.

Poids total extrait à l'eau : 6,549 + 2,156 — 8 gr. 705.

RSR NS rca teen coms marrer en PRES DURS IE NAN LS TE

Extraction à l'eau salée.

A. {* épuisement. Volume 360 ce.

Coagulum obtenu : 0 gr. 84 0/0 contenant

azote coagulable , . . ne: 0,134 0/0 azote non coagulable du liquide Cr 0,34 on

Poids de coagulum : 0,84 X 3,6 = 3 gr. 024.

B. 2° épuisement. Volume 460 cc.

Coagulum obtenu : Ogr. 925 0/0 contenant azote coagulable . : 3 0.148 0/0 azote non coasulable du liquide Dr 0,285 »

Poids de coaguluin : 0,925 X 4,6 — 4 gr. 255.

Poids total extrait à l'eau salée : 3,024 2 4,255 — 7 ur. 279.

Ertraction à l'eau alcaline.

A. 1 épuisement. Volume 400 cc.

Coagulum obtenu : 1 gr. 98 0/0 contenant :

azote coagulable . . . Does 0.317 0/0 azote non coagulable du liquide AE 0,342 »

Poids de coagulum : 41,98 X 4 = 7 gr. 92.

B. 2° épuisement. Volume 460 ce.

Coagulum obtenu : O gr. 70% 0/0 contenant

azote coagulable . . . DE: 0,113 0/0 azote non coagulable du liquide Ce 0,193 »

Poids de coagulum : 0,703 X 4,6 = 3.243.

Pois total extrait à l'eau alealine : 7.92 + 3,243 =: 11 gr. 163

Comme on le voit, l'extraction à l’eau salée est bien réritement défavorable, mais celle à l'eau alcaline donne des rendements plus élevés qu'avec l'eau pure.

Etant donné que les macérations deviennent peu à peu acides et que cette réaction favorise l'endotryptase de la levure, ainsi que l'ont montré Han et Gerer (1), il n'y à rien de sur-

(1) M. Hauxet L. Genet, dans Die Zymasegäührung, 2 partie, p. 318.

AD on

prenant à ce que les matières coagulables soient plus abon-

dantes dans l'extrait fait au moyen d'eau alealine.

Haux et Gerer donnent les chiffres suivants pour le poids de coagulum formé dans le sue de levure lorsque l'on ajoute des quantités variables de carbonate de sodium :

Carbonate de sodium Poids de coagulum 0 28,1 q. s. pour neutraliser. . . 43,0 0,2 0/0 en plus . . 59,2 0,5 0/0 — . 72,3

J'ai essayé de maintenir la réaction à peu près neutre pur addition progressive de carbonate de sodiun:. Une mactration de 100 grammes de levure SCaRobER dans 600 ce. d'eau, abandonnée 9 heures daus l'étuve à 35", a “té ramenée toutes les

Ë heures à une très légère alcalinité par addition d'une solution

concentrée Ge carbonate de sodium. On a recueilli par filtra-

tion 400 ec. de liquide limpide opalcscent.

Coagulum obtenu : 2 gr. 22 0/0 contenant :

É azote coagulable . . . + *+ : + + 0,55 0/0 Ë azote non coagulable du liquide + . 0,472 » Poids de coagulum : 2,22 X 4 = 8 gr. S8.

Le rendement est visiblement supérieur, mais il est évidemment peu pratique de surveiller sans cesse la macéra'.on pour er maintenir la neutralité. 0 L'influence de quantités eroissantes d'aleali sur le rendement H a été alors examinée. Trois portions de 100 grammes de levure Scuroper ont été mises à macérer pendant 8 heures avec A

E 10 parties d’eau alralinisée respectivement à 0,1 0,0,0,5 0/0 et 1 0/0. On a obtenu les résultats suivants :

Azote Poids Azote non Poids de total de coagulable coagulable coagulum coagulum 0/0 u 0 0/0 gr.

CO3Na? à 0,1 0/0. . . 0.131 0,235 0,82 5,25 Ë — 05070 0,224 0,252 1,40 8.68 Ë 1:0:010 0,114 0.291 1,09 6,54 .:

+ Le

L'expérience est recommencée dans les mêmes conditions, mais avec de l'eau alcalinisée respectivement à 0,1 0/0, 0,2 0/0 et 0,5 0/0. On a :

Azote Poids Azote non Poids de total de coagulable coagulable coagulum roagulum 0/0 00 0/0 gr.

COSNa? à 0,1 0/0. . . 0,125 0,227 0,78 5,93 — 0,20/0. . . 0,147 0,218 0,92 6,99 — 0:50/0, . . 0,205 0,213 1,28 9,47

Il e.t évident que la concentration en carbonate de sodium la plus favorable, dans les conditions de l'expérience (durée, dilution, température) est de 0,5 0/0.

Il fallait aussi fixer le rôle de la température. Dans ce but, on a comparé trois extractions faites respectivement à 35°, 29° et 23° (température de la chambre). La durée de macération a été de 6 heures, pour 100 gr. de levure séchée délayée dans 6 parties d'eau. On a obtenu :

Azote Poids

Azote non Poids de total de

coagulable coagulable coagulum coagulum 0/0 0/0 0/0 gr.

à 350 (vol. 320 cc.). . 0,217 0,358 1,37 5,38 à 290 (vol. 326 cc.). . 0,125 0,315 0,78 2,19 à 230 (vol. 335 ce.). . 0,072 0,313 0,45 1,5:

Le rendement est beaucoup plus élevé à 350. 11 en est de même si on étudie l'action de températures plus élevées. L'expérience a été répétée dans les mêmes conditions, mais à 35°, 40° et 45° :

Azote Poids Azote non Poids de total de coagulible coagulable coagulum coagulum 0 0 0,0 0,0 gr.

à 4bo (vol. 420 ce ). . 0,185 6,358 1,16 487 à 400 (vol. 380 ce.), . 0,177 0,442 1,11 4,22 à 450 (vol. 350 ve.). . 0,083 0,498 0,52 1,97

On est donc fondé à employer la température de 35°. Ces conditions, macération dans un assez grand volrme de Li î liquide, emploi d'eau alcalinisée avec 0,5 0,0 de carbonate de

made blé tu dif

sodium, température de 35°, donnent les meilleurs résultats pour une préparation rapide et pratique des protéiques de la levure. Le rendement serait certes amélioré par d'autres précautions : épuisements réitérés, contrôle continuel de la réaction légèrement alcaline qu'il faudrait maintenir, ete., mais le procédé deviendrait d'une application vraiment pénible et exigerait trop de temps.

Lorsque l'on opère sur des masses un peu considérables, en plaçant la macération à l'étuve, il ne feut pas oublier que l'opération doit ètre prolongée assez longtemps, en raison de la lenteur avec laquelle la température s'élève. Pour une macération de {00 gr. de levure Scurover dans un litre d'eau alcaline, laissée + ndrat 8 heures à l'étuve à 35°, l'élévation à partir d'une

temy . itiale de 18° n'est que de 5° en moyenne pendant les - : nières heures et de 4° pendant la troisième. Ce nes a'aprés5 heures que la température est voisine du

degre cuerché. %assi est-il préférable d'employer de l'eau préalablement chauffée à 35° si on veut diminuer la durée de

la macération.

Séparation des protéiques obtenus

Nous avons vu précédemment (p. 85) que le produit de l'épuisement de la levure séchée de Scarover par l'eau donne avec le sulfate d'ammonium à demi-saturation un léger précipité. S'agit-il d'une globuline ? Quelle est la nature du protéique coagulable par la chaleur ? Est-il formé d’une substance unique? Autant de questions auxquelles je me suis efforcé de répondre.

Une macération aqueuse de 100 gr. de levure SCHROLER dans 6 parties d'eau distillée, prolongée 7 heures et demie à la température de 35°, a donné, après liltration, 370 ec. de liquide renfermant 1,77 0,0 de protéiques coagulables, soit en tout 6 gr. 55, le liquide contient 0,31 0,0 d'azote non coagulable. Une certaine quanité de ce liquide, additionnée de son volume

+ ve

de solution saturée de chlorure de sodium, ne donne aucun trouble, mème après contact prolongé: il ne renferme donc pas de globulines du groupe du tibrinogène.

On prend 100 ce, de la macération primitive et on les sature à froid, en agitant, avec du sulfate de magnésiuin eristallisé en poudre fine. On termine la saturation à létuve à 28°. Le trouble assez abondant qui se forme est séparé par filtration et le dépôt lavé avec un peu de solution saturée de sulfate de magnésium. On redissout dans l'eau la partie insoluble, on filtre, on acidule par l'acide acétique et on chauffe à l'ébullition., [se fait une coagulation incomplète : le liquide filtré reste en effet opalescent et renferme encore une notable quantité de protéiques. Quant au coagulum resté sur le filtre, lavé à l'eau bouillante jusqu'à disparition de réaction des sulfates, il pèse après dessiceation 0 gr, 646, soit environ 36 0,0 de la quantité totale. Ce coagulum parait renfermer une certaine quantité d'une albumine coagulable entrainée par la précipitation saline en même temps qu'un autre protéique, ce @ ner ne se séparant pas complètement par chauffage. Il convient donc de faire des essais de purification par précipitations répétées.

Dans ce but, on prépare une nouvelle macération dont on obtient par filtration 560 ce, contenant 9 gr. 57 de protéiques. On précipite par un volume de solution saturée de sulfate d'ammonium, on filtre et le résidu est traité par une petite quantité d'eau. La dissolution est incomplète ; on centrifuge et on obtient un premier résidu insoluble R,. Le liquide clair, dont le volume est de 92 ce. est reprécipité par son volume de sulfate d’ammonium à saturation : précipité blanc floconneux, qui est traité à deux reprises par peu d'eau, en présence de quelques gouttes de solution saline. On centrifuge et on à un second résidu R,. En traitant de mème la liqueur claire décantée, on a un troisième résidu insoluble R,.

Les liquides résultant des dernières dissolutions par eau contenant seulement une petite quantité de sels, étant acidulés par l'acide acétique et portés à l'ébullition, ne donnent qu'un

léser louche <ans coaculum visible dans Le dernier eas. I

in ne

n'existe done plus d'albumine coagulable, Quant aux résidus |: R, et H,, insolubles dans Peau contenant seulement de très petites quantités de sels. ils se dissolvent dans eau alealinisée par 0,5 0 0 de carbonate de sodium. La solution est complète, légèrement opalescente et filtre assez facilement, Par addition d'acide acétique dilué, on à un précipité floconneux blanc qui se redissout en entier dans l'eau alcaline et reprécipite par l'acide acétique.

Ce produit est très riche en azote, comme le montre un essai rapide ; on le fond avec un mélange de potasse et de nitrate de potassium pour y rechercher la présence du phosphore. La recherche est positive et montre la présence d'une quantité notable de cet é'ément. La recherche du fer est également positive.

Cette expérieace, répétée dans les mèmes conditions avec une macération dans l'eau salée à 10 0/0 provenant de l'extraction indiquée p. 86) donne les mêmes résultats, à savoir que le précipité obtenu par le sulfate de magnésium ou par Île sulfate d'ammonium à demi-saturation ne se redissoui après purilication que dans les solutions alealines: il en est reprécipité par les acides et contient du phosphore et du fer.

Ces caractères ne paraissent pas correspondre avec ceux d'une globuline vraie. ‘hr: de voir si la précipitation saline correspond à celle faite au moyen des acides, on dispose l'expérience suivante : Ure macération à: 100 Le. de levure SCRRoDER dans 6 parties d'eau distillée est maintenue au voisinage de la neutralité par additions fréquentes de carbonate de sodium à 10 0,0. Le séjour à l'étuve à 35° est de 9 heures. On filtre et on recueille 420 ce. de liquide contenant 2,22 00 de protéiques coagulables et 0,37 0 0 d'azote non coagulable.

On prélève deux portions égales de 200 ce. de liquide. L'une est précipitée par son volume de solution saturée de sulfate d'ammonium : on filtre et on redissout dans une solution de carbonate de sodium à 0,5 0 0, on filtre à nouveau et on reprécipite par l'acide acétique. Le précipité séché dans le vide sur l'acide sulfurique pèse 0 gr. 24. Quant au liquide primitif, il

est dialysé pendant quelques heures dans des sacs de coilodion pour le débarrasser de la plus grande partie du sulfate d'ammonium, puis acidulé et coagulé par la chaleur. Le coagulum lavé et séché pèse 3 gr. 04.

On retrouve ainsi 0,24 + 3,04 — 3 gr. 28 sur 4 gr. 44 de protéiques.

La seconde portion de 200 ce. est précipitée par 2 ce. d'acide acétique, soit 1 0/0; on filtre rapidement et le précipité est redissous dans le carbonate de sodium à 0,5 0/0. On reprécipite par l'acide acétique ajouté goutte à goutte, on lave et on sèche dans le vide sulfurique. Poids obtenu : 0 gr. 19. Le liquide tiltré après la précipitation acétique est aussitôt coa ;ulé par la chaleur ; on obtient après lavage et Jessiccation 3 gr. 26 de coagulum.

On retrouve ainsi 0,19 + 3,26 == 3 gr. 45 sur 4 gr. 44 de protéiques.

Comine on Le voit, les deux expériences sont comparables. Elles laissent toutes deux place pour une autolyse accentuée qui se traduit par une perte de 23 à 26 0/0 de protéiques.

I'est beaucoup plus ec: ‘mode, pour séparer les deux substances présentes “ans les macérations, de recourir à la précipitation acétique. Afin de fixer les proportions relatives de ces protéiques tout en améliorant le rendement, on procédé à expérience suivante : Trois échantillons de levure Scuroper ont été mis à macérer dans 10 parties d'eau alcaline pendant S heures à 35°.

À. Maceration dans le carbonate de sodium à 0,1 0/0

Volume obtenu : 760 ce., contenant 0,78 0/0 de protéiques coagulables, soit en tout 5 gr. 928 et 0.227 0/0 d'azote non coagulable,

On précipite par l'acide acétique : le précipité essoré et séché dans le vide pèse ! gr. 31. Le liquide filtré, coagulé par chauffage, donne après lavage et dessiceation un poids de 4 gr. 66 de protéiques.

tax

Rapport : == = = = - 4.66 18 3,9

environ,

vé

les,

le )rès

B. Macération dans le carbonate de sodium à 0,9 0,0

Volume obtenu : 760 ce., contenant 0,92 0/! le protéines coagulables, soit en tout 6 gr. 992 et 0,218 U)0 d' 4 e uor oagulable. loids du précipité acétique : { gr. 54. Poids du coagulum : 6 gr. U4.

Rapport : ——- = = environ.