CONTRE LES PRINCIPALES MYCOSES

Diverses tentatives d’immunisation contre les mycoses ont été faites, et sans résultats bien fructueux pour la plupart. Les plus remarquables sont relatives à quelques mycoses dont l'importance est notoire, telles que les Mucoro-mycoses, l’Oïdiomycose et l’Aspergillose. Elles reposent sur les diverses méthodes que je viens de rappeler. Voici le résumé des plus importantes de ces recherches.

MUCORO-MYCOSES.

En 1886, Ziegenhorn (1) se servit de l’action de la chaleur sur le mycélium, puis sur les spores du Rhizopus Cohni pour essayer d’en atténuer la virulence ; mais il ne put atteindre le but proposé.

Costantin et Lucet (2), en 1900, tentèrent de modifier l’action pathogène du Rhizomucor parasiticus en inoculant à des cobayes, des spores d’une culture développée à 52° (6° génération). Les animaux périrent. L'âge des spores parut également dépourvue d'action modificative. Barthelat (3), en 1903, recherche une toxine dans les produits solubles

(1) O. Ziecenuonx, — Versuche über Abschwachung pathogencr Schimmelpilzse. Arch. f. experim. Path. ù. Pharm.. t. XXI, p. 249, 1886.

(2) Cosranrin et Lucer : ARhisomucor parasilicus espèce pathogène de l'homme, Revue gévérale de Bot;-pe slt XIE, 1900 3

(3) Barruerar : Les mucorinéès pathogènes et les muroro-mycoses chez l'homme et chez les animaux. Thèse de Paris, 1903.

ton —

des cultures de Mucor corymbifer, et entreprend quelques expériences en vue de l’immunisation par les toxines ; mais, n'ayant pu en déceler dans les cultures, il était à prévoir que l’action immunisante serait nulle. C’est ce qu’il vérifia.

OÏDIOMYCOSE.

En 1896, Ostrowsky (3), s'étant adressé aux produits solubles sécrétés par l’Oidium albicans pour tenter la vaccination des animaux contre ce champignon, ne réussit pas à faire apparaître un semblant d’immunité. Il constata au contraire que ces produits semblaient jouir de propriétés favorisantes.

En 1900, Concetti (4) parvient à atténuer la virulence de l’Oidium albicans, en soumettant le champignon à une lente dessication en présence de potasse caustique. Avec de petites doses toujours croissantes, il obtient chez les animaux une certaine immunité, à condition de se servir d’inoculations intra-veineuses. Il remarque que cette action immunisante est due à la O. R. (voir page 88 et, après injections de doses très faibles et graduel!ement croissantes de O. R., il réussit à en faire tolérer au lapin des doses bien supérieures à la dose minima mortelle de culture virulente.

Concettien conclut que dans la O.R.,ilexiste sans doute une substance immunisante, qui, introduite dans l’organisme vivant, produit une antituxine.

Avec cette substance immunisante, il a pu retarder la mort des animaux et atténuer le tableau morbide des lésions anatomo-pathologiques.

De son côté, Roger (1) a démontré que chez les animaux vaccinés contre l'oïdiomycose, le sérum jouit de propriétés analogue à celles que possède celui des animaux vaccinés contre les bactéries.

Avec ces expériences, se poursuit l’analogie déjà ébauchée histologiquement entre l'infection oïdiomycosique et l'infection bactérienne.

ASPERGILLOSE.

Dans le domaine de l’aspergillose, pour avoir été peut-être plus nombreuses, les tentatives en vue d'obtenir une immunisalion n’en sont pas moins demeurées infructueuses. En dépit des méthodes employées, on ne peut signaler jusqu’à ce jour qu’un insuccès général.

(31 Osrrowsky : Les infections bactériennes : recherches sur l'oidiomycose. Thèse, Paris, 1896, (4) Coxcern: : Archive des maladies des enfants. 1900. (1) Rocer : Les maladies infectieuses, Masson. Paris, 1902.

Néanmoins, comme je me suis proposé de revenir moi-même sur ce . terrain avec une arme nouvelle, je signalerai à grands traits, les essais antérieurs aux miens, et qui gardent malgré tout, une réelle valeur.

En 1894, Kotliar (1) recherche si l’Aspergillus fumigatus formé des substances vaccinantes. Il inocule trois pigeons dans les veines avec 2 c.c. 5 de culture stérilisée par ses méthodes (page 85) et 12 jours après, il leur inocule 1 c.c. 5 de culture virulente. Les trois pigeons meurent le 5° jour, en même temps que des pigeons témoins. « Si l’on songe, termine Kotliar, que ce champigon ne forme pas de toxines, on peut en déduire qu’il ne fabrique pas non plus de substances vaccinantes. »

Rénon (2), en 18%, reprend ces essais d’immunisation contre l’aspergillose, et se met en devoir d'utiliser pour cela toutes les méthodes connues. Je résumerai ici les plus importantes ; aucune, d’ailleurs, ne lui a donné de résultats positifs.

1° Essais d’immunisation par le virus. — A. À l’aide de spores modifiées. — Des spores ayant pris naissance sur des milieux renfermant du nitrate d'argent, de l’iodure de potassium et de l’iode ; ainsi que d’autres ayant subi l’action de la chaleur dans des tubes fermés à la lampe, avaient toutes gardé leur virulence. Cependant, celles qui dans la dernière opération, avaient perdu leur faculté germinative, furent inoculées à des lapins. Les lapins résistèrent ; mais dans la suite, ayant reçu une inoculation de spores virulentes ; tous succombèrent.

B. À l’aide d’injections progressivement croissantes de spores virulentes.— Là seulement, Rénon a obtenu l’ébauche de quelques résultats heureux. Et, bien qu’il déclare lui-même n'avoir abouti qu'à un insuccès général, il émet l’idée, que pour rendre les animaux réfractaires à la mycose aspergillaire, les recherches doivent être poursuivies avec cette méthode.

2 Essais d'immunisation par les toxines. — Malgré l’absence de toxicité de ses extraits de culture d’Aspergillus fumigatus, Rénon rechercha néanmoins s'ils étaient capables d'action vaccinante. Il inocula une émulsion de quelques palettes de spores, à des pigeons qui avaient résisté à l'injection des produits solubles des cultures. Les pigeons succombèrent tous.

(1) Korzrar : Ann. de l'fnst. Pasteur., t. VIII, p. 479. 1894.

(21 RÉxOX. — Æssais d'immunisation contre lu tuberculyse aspergillaire. — €, R. Sté Biologie, p. 202, 20 juillet 1395,

3° Essais d'immunisation par les sérums. — Des japins, ayant reçu en injection, du sérum d’un autre lapin qui avait succombé à une aspergillose expérimentale, reçurent 49 jours après, trois palettes de spores virulentes dans les veines. Ils succombèrent en A1 à 12 jours.

En 1896, Lucet (1), s'inspirant des indications de Rénon sur l’efficacité possible de la méthode des doses progressives de spores virulentes, entreprend avec elle quelques expériences, mais sans résultats heureux. Il se borne à constater comme Ribbert et Rénon, « qu’en inocülant lentement et progressivement des doses croissantes de spores virulentes, on arrive à donner aux animaux une légère survie, quand plus tard on les inocule avec des doses massives ». "

$ 3. NOUVEAUX ESSAIS D’IMMUNISATION CONTRE L’ASPERGILLOSE.

Malgré ces tentatives infructueuses, pourtant remarquablement conduites, j'ai tenu à reprendre la question de l’immunisation contre l’aspergillose, puisqu’un fait nouveau venait de m’apparaître comme agent d’instrumentation : la présence d’une substance toxique dans les cultures d’Aspergillus fumigatus. Il fallait voir en effet, si ce poison était capable de vacciner contre lui-même, et contre le champignon qui Pa produit.

1° Essais d’'immunisation à l’aide de doses croissantes de toxine non modifiée. — Il est certain, et cela ne doit pas surprendre avec nos connaissances actuelles sur les toxines bactériennes, que l'injection répétée de faibles doses de toxine non modifiée ne conduit pas à la vaccination. Behring et Kitasato n’ont pas réussi à conférer l’immunité contre le tétanos par l'injection de petites doses répétées de toxine tétanique non atténuée. Les animaux meurent pendant l’immunisation. Il en est de même pour la toxine diphtérique; on arrive difficilement par cette méthode à produire l’accoutumance, il se produit une accumulation des doses, et l'animal meurt.

J'ai fait de semblables constatations avec le poison aspergillien, ainsi que le prouvent les expériences suivantes :

{1} Lucer : Etude expérimentale et clinique sur l'Aspergillus fumigatus, Bull, Soc, centr, méd, vétér. p, 585, 1896,

Expér. LVIII. — Un lapin de 1 kilog. 967, reçoit par voie sous-cutanée 10 c.c. d’un liquide d'une culture de 22 jours. Après avoir présenté quelques phénomènes convulsifs et paralytiques, il se rétablit. Cinq jours après cette première inoculation, il reçoit 10 c.c. d'un liquide de 22 jours ; au bout d’une demi-heure, il est atteint de tremblements, puis de sauts brusques et de convulsions violentes Il meurt dans la nuit.

Il y a donceu ici, accumulation des doses, hypersensibilité au poison.

Expér. LIX. — Un lapin de 1440 gr. reçoit, en inoculation sous-cutanée, 3 cent. cubes de liquide d'une culture d'un mois. Il ne présente rien d'anormal.

Sept jours après, il reçoit 5 c.c. d’un liquide de culture de 23 jours ; une demi-heure après, il présente des symptômes violents : tétanos, convulsions, ete. L'animal meurt dans la nuit. La dose reçue n’était cependant pas mortelle anormalement.

Expér. LX. — Un lapin de 3 kilog. 772 reçoit, dans le tissu sous-cutané, deux c.c. de liquide de culture de 21 jours, soit environ 1/10° de la dose mortelle ; il ne présente alors rien d'anormal.

Dix jours après, il reçoit cinq c.c. d'un liquide de 20 jours ; pendant les deux heures qui ont suivi l'injection, l'animal n’a eu qu’un léger tremblement sans convulsions, et au bout de deux heures, il paraît revenir à son état normal,

Sept jours après, le même lapin reçoit six c.c. d'un liquide de 24 jours. Dans la journée qui suit l’inoculation et durant les suivantes, l'animal reste normal.

Cinq jours après, il reçoit sept c.c. d'un liquide d'un mois; il ne manifeste aucun symptôme.

Sept jours après, il reçoit neuf c.c. d’un liquide de 40 jours; au bout de 3/4 d'heure, il présente des tremblements assez forts, respiration rapide, parésie, mais pas de convulsions ni de paralysie complète. Cet état persiste pendant 2 h.1/2 ; puis l'animal se rétablit.

Six jours après, il reçoit neuf c.c. d’un liquide de 48 jours. Cette fois, l'animal ne présente pas de tremblements bien accusés, et pas de parésie. Le liquide a cependant été reconnu toxique.

Quatre jours après, le lapin reçoit 9 c.c. d’un liquide de 25 jours. Au bout d'une demi-heure, on observe de la fréquence de la respiration, un peu de tremblements, quelques cris, la marche difficile ; mais pas de convulsions ni de paralysie. À 5 heures du soir, le lapin est revenu à la normale.

Cinq jours après, l'animal recoit neuf c.c. d'un liquide de 29 jours. Au bout de 3/4 d'heure, les accidents classiques se produisent, et quelques crises violentes apparaissent. L'animal se remet.

Six jours après, une dernière inoculation a lieu. Cette fois, le lapin reçoit dans les veines quelques palettes de spores. Il meurt au bout du 6° jour, et présente à l’autopsie les lésions rénales et hépatiques ordinaires.

__ L'inoculation de doses croissantes de toxine non modifiée, ne vaccine donc pas le lapin, car à la dixième injection qui correspond néanmoins

à la moitié de la dose mortelle, il manifeste encore des symptômes d'intoxication.

Au cours de ces expériences, j'ai constaté nettement qu’une première injection d’une dose faible de toxine, ne causant que des troubles légers et fugaces, détermine souvent une hypersensibilité très remarquable. Non seulement l'animal ne devient pas plus résistant, mais il présente au contraire une plus grande réceptivité à l'égard du poison. Cest ainsi qu'un lapin de 1.800 gr. ayant reçu 8 c.c. de toxine, sans manifester autre chose qu’un léger tremblement, est devenu sensible à ce point que trois jours après, la dose mortelle de toxine s’abaisse chez lui de 5 c.c. par-kilk à 46:66.

De tels faits, n’ont-ils pas d’ailleurs, leurs analogues dans la vaccinalion par certaines toxines bactériennes ?

Behring (1), à la suite de faits nombreux et probants, affirme la théorie de l’hypersensibilité acquise pendant l’immunisation.

Knorr (2) a augmenté la sensibilité des cobayes pour la toxine tétanique en leur injectant chaque jour 1/10° de la dose minima mortelle.

Behring et Kitashima (3), en faisant des injections fréquentes de très petites doses de toxine diphtérique, sont arrivés à tuer les cobayes avec 1/400e de la dose mortelle, répartie en p'usieurs fois.

Ces faits sont assez significatifs, et montrent bien la grande difficulté qu’on éprouve à se servir des toxines modifiées pour tenter des vaccinations. |:

2 Essais d’immunisation à l’aide de toxine modifiée. — À. Par la chaleur. — Frankel (4), le premier a utilisé ce procédé pour vacciner contre la diphtérie ; Vaillard (5) l’a employé ensuite pour vacciner contre le tétanos. 11 consiste à inoculer aux animaux, des liquides filtrés, chauffés à des températures progressivement décroissantes.

Expér. LXI. — Un lapin de 1440 gr. reçoit, dans le tissu sous-cutané, 5 c.c. d'un liquide de culture de 30 jours, chauffé trois quarts d'heure à 90°: Il ne présente rien d’anormal.

Sept jours après, le même lapin reçoit 7 c.c. d’un liquide de culture de 23 jours chauffé trois quarts d'heure à quatre-vingt dix degrès. Rien d'anormal. Six jours après, l'animal reçoit 10 c.c. d’un liquide de culture de 40 jours chauffé trois quarts d'heure à quatre-vingt sept degrès. Il ne présente aucun trouble.

(1) BEHRING : Allgemeine Therapie der {nfections Krankeiten. p, 1052, (2) Kworr : Experimentelle Untersuchungen über die Grenzen, etc. p. 18, 19. (3) BesriKe et Kirasmia : Berliner klin. Wochenschft, 1901, p. 197,

(4) Frankez : Berliner klinische Wochenschrift, n° 48, 1890, (6; Vaicranp : Ann, Inst, Pas*eur, t, vi, p. 225, 1892,

Les MED

Sept jours après, il reçoit encore 10 c.c: d’un liquide de 48 jours, chauffé trois quarts d'heure à quatre-vingt cinq degrés : rien d'anormal.

Quatre jours après, il reçoit 10 c.c. de liquide de culture de 25 jours chauffé trois quarts d'heure à quatre-vingts degrés : encore rien d’anormal.

Cinq jours après, il reçoit 10 c.c. de culture de 29 jours, chauffé trois quarts d'heure à sotæante-dix sept degrés. Au bout d’une heure, l'animal est pris d'accidents très nets : agitation, dypsnée, parésie, mais pas de convulsions ; le lendemain, l'animal est complétement rétabli.

Dix jours après, le lapin ainsi traité, reçoit en injection intra-veineuse deux cent. cubes de 3 palettes de spores. Il meurt au 5° jour. A l’autopsie, les reins et le foie volumineux sont parsemés de petits tubercules blancs en semis.

Dès la 5° inoculation, les accidents qui se sont manifestés set prévoir déjà l'absence d'immunisation.

B. Par le liquide de Gram. — Après ce nouvel échec, je me suis adressé au liquide de Gram (solution iodo-iodurée) pour atténuer la toxicité des liquides de culture employés.

MM. Behring et Kitasato (1) ont les premiers, utilisé la modification des toxines par les agents chimiques. Ils employaient le trichlorure d’iode pour vacciner les animaux contre les toxines du tétanos et de la diphtérie. Plus tard, MM. Roux et Vaillard (2) se sont servis du mélange de toxine et d’une solution iodo-iodurée ; c’est cette dernière méthode que j'ai employée.

Expér. LXII. — Un lapin de 2387 gr. reçoit sous la peau 4 c.c. de liquide de Gram. It ne présente dans la suite aucun symptôme.

Dix jours après, il reçoit 8 c.c. de liquide d'une culture de 20 jours, additionnés de 4 c.c. de Gram ; une demi-heure après, il présente les symptômes habituels, tremblements et convulsions, aussi violemment que s’il avait reçu une dose mortelle sans addition de Gram. L'animal meurt dans la nuit.

Expér. LXIII. — Un liquide de culture de 20 jours, très toxique, est mélangé avec un égal volume de liquide de Gram ; huit cent. cubes du mélange, renfermant par conséquent 4 c.c. de liquide actif, sont inoculés sous la peau d’un lapin de 2520 gr. Trois cobayes reçoivent aussi de la même façon 5 c.c. du liquide toxique, mélangés à 5 c.c. de Gram. Les animaux ne présentent aucun symptôme.

Huit jours après, on injecte au lapin et aux cobayes précédents 5 c.c. de liquide d’une culture de 20 jours, mélangés à 5 c.c. de Gram. Les animaux sont atteints de tremblements significatifs ; l'un des cobayes est affecté assez gravement.

Ainsi, par cette méthode, lapins et cobaye ne se montrent pas vaccinés contre la toxine ; ils ne le seront naturellement pas davantage

(1) Berine et Krrasaro : Deutsche medicin Wochenschrift p,p. 1445, 1245, 1890; (2) Roux et Vaisrann : Ann, de l'Inst, Pasteur, ts VII, p. 64, 1893,

contre les spores ; c'est ce qu’il m'a été facile de constater, car les animaux ayant reçu en dernier lieu quelques palettes de spores, ne tardèrent pas à succomber dans le délai normal.

3 Essais d’immunisation par le sérum. — [’immunité que l’on se proposait de donner à l’aide de la toxine, est en somme nulle à considérer. Il s’en suit naturellement que le sérum des animaux inoculés avec le liquide toxique, modifié ou. non, ne doit posséder aucune propriété immunisante. C’est ce qu’il était convenable de vérifier cependant.

Le lapin de l’expérience LIX, qui avait reçu de nombreuses doses successives et croissantes de liquide toxique non modifié, était tout désigné pour fournir le sérum supposé antitoxique. Le prélèvement était fait aseptiquement, et directement dans le cœur de l’animal, sans avoir besoin ainsi de le sacrifier.

Expér. LXIV. — Un lapin de 1190 gr. reçoit alors dans les veines 3 c.c. par kil. d'animal d’uo liquide d'une culture de 18 jours, mélangé préalablement à 3 c.c. de sérum. Cinq minutes après l’inoculation, le lapin est pris de tremblements violents et de phénomènes paralytiques intenses. Il reste finalement aplati sur lui-même, mais sans tétanos.

Un lapin témoin a reçu, ea même temps que le précédent, et dans les veines, 3 c.c. par kil. d'animal du même liquide de culture, mélangé préalab'ement à 3 c.c. d’eau physiologique. Il présente exactement les mêmes

symptômes que le précédent.

Ces expériences indiquent avec la plus grande netteté, que les injections répétées, et à doses graduellement croissantes, de la toxine non modifiée, sont impuissantes à développer des antitoxines dans les humeurs du lapin. Il en aurait été assurément de même pour le sérum d'un lapin inoculé avec la toxine modifiée.

J'ai enfin recherché dans une dernière expérience, si les injections répétées de toxine chez le pigeon, dont on a vu la résistance étonnante au poison, ne sont pas susceptibles de lui conférer une certaine immunité contre l’inoculation des spores de l’Aspergillus fumigatus. Un seul essai a été fait.

ExPér. LX V. — Un pigeon ayant reçu 50 c.c. de toxine très active, en cinq injections pratiquées de 8 jours en 8 jours, a été ensuite inoculé dans les

veines avec de l’eau physiologique renfermant en suspension quelques palettes de spores ; l'animal a succombé à l'aspergillose dans les délais habituels.

Ainsi que mes devanciers, j'ai donc totalement échoué dans mes tentatives d’immunisation contre l’aspergillose à l’aide de la toxine

nouvellement décelée dans les cultures de l’Aspergillus fumigatus,