CHAPITRE IV

Recherche et présence de Témulsine.

L'émulsine est un ferment soluble très répandu chez les végétaux et les animaux.

Comme les diastases des sucres, elle agit en fixant sur la substance à transformer, une ou plusieurs molécules d'eau ; mais elle en diffère cependant, en ce qu'elle exerce son action, indifféremment sHr tout un groupe de composés appelés glucosides.

Les glucosides sont des principes divers, abondants dans les cellules végétales. On peut les considérer comme une combinaison du glucose avec des corps de la série grasse ou aromatique à fonction acide, alcool ou phénol. Ces glucosides sont susceptibles de se dédoubler par hydratation ; et, dans les cellules vivantes, ce dédoublement, comme tint d'autres, est effectué par un enzyme : l'émulsine ou synaptase.

Le type de son action est celle qu'elle exerce sur Tamygdaline ; mais cette action s'exerce aussi sur d'autres composés tels que : la salicine, l'esculine, la coniférine, l'hélicine, Tarbutine, etc. Elle se fait sur tous suivant le même plan. Il y a hydrolysation et dédoublement avec mise en liberté de glucose, et d'une autre substance,- variable suivant la nature du glucoside.

La présence de l'émulsine dans les végétaux supérieurs a été signalée dès 1847, par Liebig et Wohler. Les nombreuses recherches qui se sont poursuivies à ce sujet ont montré qu'un ferment analogue, sinon identique, est abondamment répandu dans tout le règne végétal, où sa présence coïncide le plus souvent avec des glucosides.

On a dressé de longues listes de végétaux renfermant de l'émulsine; enfin, j'ai indiqué au début de ce travail, que sa présence avait été signalée chez quelques champignons inférieurs.

Je l'ai moi-même recherchée et décelée chez les espèces parasites suivantes : .

Aspergitlus fiwiigatus — Wnzopus equinus — Rhizomucor parasiticus — Trichophijton gijpseum — Achorion Shanileini — Microsporum cani$.

Ces champignons végètent mal sur une solution d'amygdaline à 3 p. 400. Les trois premiers forment un voile très mince, léger et poudreux ; les autres s'y développent à peine. En ajoutant un peu de peptone au liquide de culture, la croissance se fait plus aisément et Ton peut percevoir, au bout de 5 à 6 jours d'exposition à l'étuve à 30^^, une légère odeur d'amandes amères qui annonce le dédoublement de l'amygdaline.

Mais, jai constaté pour ces espèces que la production d'émulsine n'est pas subordonnée à la présence de glucosides dans le bouillon de culture. La méthode que j'ai utilisée diffère un peu de celle que MM. Bourquelot et Hérissey ont employé pour VAspergillus niger ; c'est celle qui m'a servi dans les expériences précédentes, et que j'ai indiquée en un paragraphe spéciaL

Les liquides de culture glucoses peptonisés, ou glycérines peptonisés ne renfermant plus trace de g'ucose ou de peptone, sont filtrés à la bougie Berkefeld et introduits purement dans des tubes à essai contenant une solution d'amygdaline, elle-même stérile. Cette solution a été stérilisée ; non à l'autoclave, où la température élevée est susceptible de lui faire subir un commencement de dédoublement, mais par filtration à la bougie poreuse (d). Elle est ensuite immédiatement répartie par 10 ^° dans des tubes à essai stérilisés.

Pour chaque espèce de champignons étudiés, les tubes préparés sont au nombre de cinq : A, B, G, D, E.

^ A est additionné de 4 ^^ du filtrat de culture glucose peptonisé.

B — 4 «^«^ — — — bouilli.

C — 4 t^^" du filtrat de culture glycérine peptonisé.

D — 4 «-«^ — — — bouilli.

E est laissé tel, sans addition de liquide diastasifère.

Les tubes B, D, E constit lent un groupe de témoins nécessaires pour caractériser l'allure diastasique de la réaction de dédoublement.

Tous les tubes sont soumis à l'étuve à 37o. L'équation chimique qui représente le dédoublement de l'amygdaline est la suivante :

C20H27AzO»i + 2 H^O = 2 C«Hi20« -f C^HeO + HCAz

(l) L'emploi des antiseptiques habituels, comme préservatifs de la contamination lar les gTmcs de l'air, oflTre ici quelques inconvénients qu'il importe d éviter. Outre celui de n'offrir qu'une asepsie restreinte, suffisante cependant pour des recherches qualitatives, outre aussi l'mfluence entravante qu'ils peuvent exercer sur la dias.ase, ils offrent encore le désavantage comme le thymol, le phénol, le chloroforme, de masquer assez fortement l'odeur d'amandes amères qui annonce le dédoublennent de l'amygdaline. Dfe plu», le chlorolorme offre le grave inconvénien: de réduire la liqueur de Fehlmg et par suite de s'opposer à tout do:'age r.goureux du sucie réducteur mis en liberté.

La décomposition qui s'effectue a pour effet de mettre en liberté trois composés définis : un glucose, de l'aldéhyde benzoïque et de Tacide cyanhydrique. Pour avoir la preuve de la réaction eflectuée, il suffira de constater dans le liquide soumis à l'expérience, la présence d'un ou de plusieurs de ces corps. Voici quelles sont ces constatations après quatre jours d'exposition des tubes à amygdaline à 37* :

1° Odeur très nette d'essence d'amandes amères qui révèle la présence de l'aldéhyde benzoïque. Cette odeur existe dans les tubes A et C seulement ; elle n'existe pas dans les tubes témoins.

2» Existence d'acide cyanhydrique, établie par les réactions suivantes, faites sur le distillât du liquide en expérience :

a) Réaction de Liebig; formation de sulfocyanate d'ammonium qui donne une vive coloration rouge avec les sels ferriques.

h) Réaction de Shonbein, extrêmement sensible, qui consiste à ajouter au distillât quelques gouttes d'une solution de sulfate de cuivre à 1 p. 1000 et quelques gouttes de teinture fraîche de gaïac. Une coloration bleue se produit en présence de traces d'acide cyanhydrique.

Ces trois réactions caractéristiques se sont produites avec netteté dans les tubes A et C, jamais dans les tubes témoins B, D et E.

3» Présence de sucre réducteur, constatée à l'aide de la liqueur de Fehling dans les tubes A et C seulement.

L'expérience, telle que je l'ai conduite pour chacun des champignons désignés, m'a permis en outre de doser le glucose mis en liberté, et de mesurer ainsi, approximativement du moins, le degré d'activité de l'émulsine. Au bout de 4 jours d'exposition à 37» les 30 «"e d'amygdaline sont décomposés jusqu'à concurrence de 70 ^\^ de !a matière première mise en réaction ; car le dédoublement de l'amygdaline par 1 émulsine n'est jamais total.

J'ai voulu voir si ces liquides de culture qui décomposent l'amygdaline sont capables de dédoubler d'autres glucosides ; la salicine par exemple.

L'équation du dédoublement de la salicine est la suivante ; il y a mise en liberté de glucose et de saligénine :

De même que pour le dédoublement de l'amygdaline, toute trace de sucre réducteur dans le liquide soumis à rexpérience nous confirmera le dédoublement de la salicine^

Des tubes renfermant une solution de salicine à 4 p. ICO, ont été préparés de la même façon que précédemment, et sont désignés par les mêmes lettres conventionnelles. Après 3 jours d'exposition à Tétuve à 37o; seuls, les contenus des tubes A et C permettent la réduction de la liqueur de Fehling.

Dans ces mêmes tubes, j'ai pu caractériser la présence de la saligénine; car cette substance possédant un groupement phénol, possède la propriété caractéristique des phénols de donner une belle coloration avec le perchlorure de fer. On a ici une coloration violette, mais qui apparaît seulement dans les tubes A et G.

La sécrétion d'un ferment soluble agissant comme Témulsine, a donc lieu d'une façon constante par les six espèces de champignons parasites étudiés; et cette sécrétion n'est pas subordonnée à la présence de glucosides dans le milieu nutritif.