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du cytoplasme, soit surtout celle des vacuoles adultes. Dans le premier cas, la coloration était diffuse et donnait des résultats assez peu nets ; dans le second cas, le plus souvent réussi, les vacuoles étaient évidemment colorées dans leur état normal et sans modification, car la cellule restait capable de plasmolyse et les mouvements du protoplasme continuaient à s'effectuer. Pfeffer a remarqué, en outre, que lorsque la mort survenait, le noyau et le cytoplasme, jusqu'alors incolores, se teignaient aussitôt, et l’on a ainsi un criterium de la vie et de la mort de la cellule.

Les recherches de M. P. A. Dangeard ont porté principalement sur de jeunes organes aériens. Les formes vacuolaires qu'il décrit (filaments, réseaux) sont bien des états normaux et réels, car on peut les observer parfois sans aucune coloration, lorsque le varuome est réfringent ou lorsqu'il est coloré par l’anthocyane. |

Par conséquent, lorsque ces formes s'observent après coloration vilale, dans des cellules qui ne montraient rien auparavant, on peut bien affirmer leur existence réelle. D'ailleurs, ainsi que nous le verrons, les réseaux se retrouvent parfois après fixation, sous forme de minces canalicules incolores.

Les recherches de M. Guillermond, qui font suite à celles de M. P. À. Dangeard et portent sur des objets analogues, confirment la même opinion et la réalité des stades d'évolution vacuolaire observés par M. P. À. Dangeard n’a pas été contestée.

Les mêmes conclusions peuvent être tirées de nos propres études vitales: elles conduisent, comme nous le verrons, à des résultats positifs aussi nets, que ceux donnés par les méthodes de fixation ordinaires. Au fur et à mesure que les questions se poseront, elles seront discutées au cours du travail; cependant, il est bon d'indiquer ici les principales garanties dont on peut s'entourer.

Il est toujours nécessaire, avant coloration vitale, de faire un examen direct el immédiat des cellules vivantes. Avec un peu d'habitude, on arrive à voir ainsi, dans presque tous Îles cas,

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le noyau, dont le contour est ordinairement très visible. Lorsque sa limite n’est pas nette, sa place est loujours indiquée par une zone de réfringence spéciale, très visible lorsqu'on fait varier rapidement la vis de mise au point.

Les plastes sont généralement visibles, surtout lorsqu'ils sont amylifères, car ils possèdent alors une réfringence accusée due à l’amidon:; les microsomes très petits sont, pour celte raison difficiles à voir, bien qu'ils soient toujours très réfringents.

Les vacuoles se voient bien lorsqu'elles sont de grande taille ; dans les méristèmes, elles sont parfois sous forme de filaments ou de réseaux très réfringents (vacuoles tannifères), ou colorées naturellement (vacuoles anthocyanifères). Très souvent, par contre, dans les méristèmes, elles sont à peu près complètement invisibles, parce qu'elles ont la même réfringence que le cytoplasme. Il faut alors, pour les voir, faire une coloration vitale ou une fixation suivie de coloration.

On peut donner les raisons suivantes du peu de dommages causé aux cellules par une coloration vitale réussie :

1° La cellule reste douée de mouvement et les granulations du cytoplasme continuent à se. déplacer normalement (mouvement des microsomes).

2° Les divers éléments cellulaires, noyau, plastes, microsomes, cytoplasme, demeurent incolores : lorsque l’alltération survient, elle se manifeste aussitôt par la coloration du noyau.

3” Le cytoplasme et le noyau conservent leur aspect homogène; au contraire, lorsque la mort intervient, il se produit une précipitation qui se révèle très nellement par une apparence granuleuse de ces éléments.

4° L'appareil vacuolaire lui-même s’il est constitué par une substance visqueuse, ce qui est souvent le cas dans les éléments jeunes, se déforme et subit des modifications incessantes du fait des mouvements normaux du cytoplasme {ces déformations sont comparables à celles qu'on peut observer sur un vacuome réfringent).