CHAPITRE VIII

LES SELS d’hÉMATINE EN MÉDECINE LEGALE

Il est superflu d’apprécier ici l’importance pour le médecin légiste de reconnaître rapidement et sûrement une tache de sang dans une expertise médico- . légale, comme il est inutile de nous arrêter sur chacun des réactifs proposés pour résoudre ce problème. Nous voulons seulement jeter un coup d’œil pratique sur cette question pour faire ressortir les ressources actuelles de la science, et mettre en évidence la marche à suivre par l’expert dans une recherche de cette nature, en nous appuyant sur les propriétés de l’hématine.

Nous laissons donc de côté l’étude des caractères physiques des taches de sang, faite d’ailleurs dans tous les livres de médecine ou de chimie légale.

Nous ne dirons rien des éléments figurés, globules rouges, globules blancs qui ont été si bien étudiés par les micrographes et spécialement par M. Ch, Robin, ni des réactions générales plus ou moins incertaines de la matière colorante du sang, qui nous entraîneraient a copier les auteurs et à faire un historique suranné de laits bien connus.

Le chimiste expert, requis par la justice, possède à son service deux groupes de réactions fondamentales pour caractériser d’une façon nette et indiscutable une tache de sang. Ce sont les caractères spectroscopiques, soit de l’hémoglobine, soit de l’hématine et des caractères microscopiques des sels cristallisés d’hématine. Nous voulons mettre en relief ces points importants qui sont, la pierre de touche, seule valable pour mettre à l’abri la conscience de l’expert et donner à ses conclusions une rigueur légale. Nous discuterons les manipulations que nous avons expérimentées, afin d’établir, une fois pour toutes, le mode opératoire à suivre, sans s’exposer à des tâtonnements. Que de chimistes habiles en effet, laissent échapper ces remarquables cristaux d’hémine, faute de suivre une méthode régulière et raisonnée, et •envisagent à tort cette réaction comme capricieuse !

Etant donnée une tache que l’on soupçonne être du sang, l’expert découpera le tissu sur lequel elle se trouve, ou raclera avec précaution la surface de l’objet maculé. Ces parcelles de sang qui ont un aspect variant du rouge au brun seront déposées dans un pet i t tube dont la partie inférieure a été effilée à la lampe et fermée inférieurement. Ou a empli d’eau le tube un peu audessus de la partie effilée. Au contactde l’eau la matière colorante, la matière albumineuse et un petit flocon fibrineux se détachent. Ce petit flocon fibrineux est

facile à reconnaître à ses caractères généraux (acide nitrique, azotate et azotite de mercure). On examinera alors au spectroscope la solution d’hémoglobine. On obtiendra ou les bandes de l’oxy hémoglobine ou celle de rhémoglobine réduite. Avec très-peu de sang on obtiendra cette réaction spectroscopique déjà si précieuse, grâce à ce petit tour de main. L’hémoglobine oxygénée, on le sait, donne deux bandes d’absorption

comprises entre D. et E. L’hémoglobine réduite donne une seule bande comprise entre les deux précédentes.

On chauffera ensuite la solution d’hémoglobine qui se troublera par coagulation de l’albumine.

Ce mode d’opérer a toujours donné entre les mains de M. Glénard, de Lyon, les plus brillants résultats.

Nous arrivons à une deuxième manipulation importante qui doit compléter l’étude spectrale de l’hémoglobine par la mise en évidence des cristaux de chlorhydrate.

On prend un tube que l’on effile à la lampe sur une longueur de un centimètre, de manière à ce que la partie effilée soit capillaire et retienne de l’eau grâce à la capillarité. On verse de l’eau distillée jusqu’un peu au-dessus du niveau de la partie renflée. La lâche découpée dans le tissu ou isolée par raclage du corps imperméable sur laquelle elle s’est séchée, est portée à la surface de l’eau dans le tube. Quelques instants de macération suffisent pour que l’on voie se détacher des stries de matière colorante, qui teintent le liquide en se diffusant. Soufflant alors par la grosse extrémité du tube, on dépose une goutte sur la lame microscopique; on ajoute une goutte d’une solution de sel marin au 1 /1000°puis on fait évaporer doucement presque à siccité. On évite de chauffer trop, afin que le liquide ne se trou-

ble pas. La coagulation albumineuse est défavorable à la formation des cristaux d’hémine. On recouvre la goutte, réduite à une gustule, de la lamelle de verre, et on apporte une goutte d’acide acétique cristallisable, qui gagne la matière colorante par capillarité entre les deux ' lames. On fait bouillir avec précaution et l’on regarde au microscope. Si l’on ne voit pas de cristaux, on ajoute de nouveau une goutte d’acide glacial. Chauffant encore et portant sous le microscope, on voit généralement après ce deuxième apport d’acide les cristaux caractéristiques d’hémine. Si les cristaux n’apparaissaient pas encore on ajouterait encore de l’acide cristallisable, on chaufferait encore avec précaution et on examinerait au microscope. Les lamelles rhomboïdales d'hématine chlorvdratée se voient très-nettement à un

grossissement linéaire de 240-250. (Voir pi. II, fig. 2).

Il est indispensable pour réussir dans cette opération d’éviter un trop grand excès de sel marin qui empâte la matière colorante dans une cristallisation en masse. Il faut que l’acide acétique employé soit l’acide glacial monohydralé, sinon la décompositon du chlorure est plus difficile. On peut échouer complètement par l’emploi d’un acide trop faible. Avant d’apporter entre les deux lames l’acide acétique, il faut avoir soin également d’évaporer presque à siccité, sinon l’eau restant contribuera à étendre l’acide. Nous retombons dans l’inconvénient que nous venons précisément de signaler.

11 faut éviter également tout échauffement de nature à produire un mouvement brusque dans le sein delà matière en expérience. On comprendra la nécessité d’apporter plusieurs fois de l’acide acétique cristallisable sur la préparation, si l’on songe qu’il est utile de dégager l’hématins de la matière albuminoïde où elle

est engagée, de dissoudre en un mot les parties insolubles qui retiennent la matière colorante.

Nous ajouterons, comme dernière précaution, que si le sang est trop a'calin par un commencement de putréfaction par exemple, il faut saturer l'alcalinité par un peu d’acide acétique avant de faire évaporer sur la lame. Nous avons vu que les alcalis modifient profondément l’hématine à chaud,

Erdmann (1) en 1862 a donné ces règles d'opérer, qui permettent de caractériser une trace de sang en quelques instants. Nous n’insisterons pas sur les avantages d’exécuter la réaction directement sur la lame microscopique et sur cette intervention à plusieurs reprises de l’acide cristallisable qui assure la décomposition du chlorure. Erdmann n’a eu qu’un tort qui peut rendre le procédé infidèle; il employaitune solution de chlorure à 1/20. C’est beaucoup trop.

Brucke (2) est le premier qui tira parti de la réaction de Teichmann (formation des cristaux d’hémine) pour reconnaître les plus faibles traces de sang et par suite apporter une donnée précieuse en médecine légale. Voici comment il opérait. Inutile d’ajouter que sa méthode est très-inférieure à celle d’Erdmann : « On fait tremper la tache, dit-il, dans l’eau distillée, puis on introduit dans un verre de montre une partie du liquide coloré obtenu ; on ajoute quelques gouttes d’eau salée et l’on fait sécher dans le vide sur l’acide sulfurique. Après dessiccation, on examine ie résidu au microscope afin de s’assurer qu’il ne s’y trouve rien qui ressemble aux cristaux à obtenir. Ayant ainsi reconnu l’absence de toute matière pouvant donner lieu à une confusion,

(1 ) Journal prakt ., Chem., 1862, p. \.

(2) Chem. Centrallil., t. I, p. 212.

oa ajoute de l’acide acétique glacial, on fait évaporer au bain-marie à 100u, puis on verse quelques gouttes d’eau distillée et l’on place sous le microscope. Si le verre de montre est trop plein, ajoute Brücke, pour se prêter facilement à l’examen, on en répartit le contenu sur plusieurs objectifs et l’on recouvre avec des verres minces. »

Aujourd’hui les chimistes suivent le mode opératoire indiqué par Erdmann et obtiennent toujours un bon résultat en s’entenantrigoureusementàsesprescriptions. Nous n’hésitons pas à dire que les insuccès signalés entre les mains de chimistes sérieux ne proviennent que de leur négligence à suivre une marche ponctuelle et invariable. Tantôt chauffant trop, tantôt ne chauffant pas assez, tantôt employant une solution saline trop concentrée ou un acide acétique dilué, ils s’exposent ainsi infailliblement à des mécomptes. Blondlot (1) dans une étude très-minutieuse du procédé d’Erdmann est arrivé à conclure que les cristaux d’hémine s’obtiennent rigoureusement toutes les fois que l’on opère avec du sang qui n’est pas altéré.

Quand le sang n’a pas subi une trop longue putréfaction, quand les taches de sang n’ont pas été coagulées parla chaleur, lorsqu’elles ne sont pas trop vieilles on obtient infailliblement les cristaux d’hémine.

D’une façon générale quand le sang n’est pas coagulé, il faut éviter sa coagulation en évaporant lentement la goutte sur la lame microscopique. 11 se fait autour de la goutte une zone de substance desséchée d’un rouge de sang qui augmente à mesure que l’évaporation

(I) Bloiullot, Tachisdesang. Journal de pharmacie et de chimie , ”)e série, t. VII, t8(>8.

avance. Nous avons remarqué que cette zone est transformée en une couche cristalline par l’intervention de l’acide acétique. Le centre de la goutte encore visqueux dilue suffisamment l’acide acétique pour que son action y soit plus difficile.

Sur plus de 20 essais que nous avons faits, aucun ne nous a mis en défaut. Nous nous étonnons donc que ce procédé si simple trouve, chez beaucoup d’esprits, sinon de l’opposition du moins de l’indifférence.

Si le sang est coagulé il faudra traiter de suite par l’acide acétique, de manière à dissoudre la matière albuminoïde. On s’aide pou** cela de la chaleur. On ajoute une goutte de solution au 1 1000 de sel marin et l’on évapore comme précédemment jusqu’à siccité. On recouvre de la lamelle et l’on lait intervenir l’acide acétique cristallisable.

Quoique les cristaux, d’hémine ne puissent pas être confondus facilement avec d’autres cristaux, il est bon de s’assurer par le microscope si avant le traitement par l’acide acétique on ne voit pas de cristaux. Inutile de résumer les propriétés générales de l’hémine, sur lesquelles nous avons dans un autre paragraphe insisté longuement. On pourra s’assurer sous le microscope s’ils sont insolubles dans les divers véhicules et les divers acides étendus, s’ils sont solubles dans la potasse on la soude caustique.

Si l’on ne possède qu’une trace imperceptible de sang, il va s’en dire qu’on ne cherchera pas à la faire macérer dans le tube effilé. Cette dilution trop considérable de la matière colorante pourrait nuire au résultat. On se contente de faire macérer la tache dans une goutte d'eau, directement sur la lame microscopique.

Quand le tissu est dépouillé de la matière colorante, on ajoute une faible goutte d’une solution au t/1 000 de chlorure de sodium, on poursuit l’opération comme nous avons dit.

Nous avons cherché, comme l’on pense, à tirer parti en médecine légale de notre réaction avec l’éther chargé d’acide chlorhydrique. Malheureusement, l’éther ne dissolvant pas l’albumine, reste sans action sur une tache desséchée, où la matière colorante est engagée dans les principes protéiques. A. propos du traitement du sang coagulé par l’éther acide (Voir préparation de l’hématine, page 26), nous avons insisté sur l’état moléculaire particulière de la matière albuminoïde, le plus favorable à l’extraction du pigment. Le sang desséché abandonne à peine des traces à de l’éther saturé d’acide.

Husson, dont nous avons précédemment (Voir page 56) critiqué et rejeté des conclusions sur les sels d’hématine, a proposé l’emploi du bromure ou de l’iodure de potassium à la place du chlorure dans les recherches médico-légales. Il prétend former un bromhydrate et un iodhydrate d’hématine dens ces conditions.

Déjà W. Gunning, J. Van Genns(l), en traitant du du sang par l’iodure de potassium précipitant par l’acétate de zinc, et faisant réagir sur le précipité de l’acide acétique, avaient obtenu des cristaux d’hémine. Pour cela ils n’avaient pas conclu à la formation d’iodhydrate.

Nous avons reconnu que sans chlorure les cristaux d’hémine ne se formaient pas dans l’expérience de

(1) Zeitschrift fur analvtisehe Chemie. t. X. p. SOK.

W. Cunniug et J. Van Genns. Dans les essais d’Husson, nous retrouvons aussi les chlorures qui souillent en quantité plus ou moins faible les solutions d’iodure et de bromure.

Ce chimiste emploie des solutions au l/20e ; t 0/0 de chlorure dans les iodure ou bromure donnera des solutions de chlorure au 1/2 millième qui sont suffisantes pour donner des cristaux de chlorhydrate.

Nous avons, d’ailleurs, opéré avec de l’iodure et du bromure exempts de chlorure sans obtenir les cristaux signalés par Husson. Plus de doute pour nous^ la confusion a été poussée par cet expérimentateur jusqu’à ses dernières limites.

Il est donc inutile pour caractériser une tache desang de recourir à des solutions salines qui doivent aux chlorures la propriété de donner de l’hémine.

Nous concluons de nos expériences que le procédé que nous avons décrit minutieusement est le seul logique, rationnel, pour les cristaux de chlorhydrate si précieux en médecine légale.

Réactions spectrales. — Un autre groupe de caractères très-importants, lorsque l’on dispose de quantités de sang suffisantes, ce sont les réactions spectrales de l’hématine. Nous les rappelons brièvement. Elles sont largement exposés dans tous les livres de chimie biologique.

Les solutions alcalines (aqueuses, alcooliques ou éthérées) sont dicroïques, vert-olive en couches minces, rouges en couches plus épaisses. Les solutions alcooliques ou éthérées acides sont brunes , non dicroïques.

Les deux espèces de solution ont leur minimum d’absorption au rouge extrême jusqu’à la raie B, et leur maximum d’absorption pour le violet. Jusqu’à une concentration de 1 gramme pour 6667 centimètres cubes, l’hématine alcaline sous une épaisseur de 1 centimètre offre une raie d'absorption entre G et D. En solution alcoolique ou étbérée acide, il y a une raie étroite partagée en deux moitiés parla raie G.

Une réaction spectrale remarquable des solutions d’hématine et qui est peu connue, est celle que l’on obtient sous l’influence de l’acide cyanhydrique. On dissout de l’hématine dans l’eau ou l’alcool, à la faveur de l’ammoniaque ou de la potasse. Si on ajoute à ces solutions un grand excès d’acide cyanhydrique, la teinte dicroïque disparcbt, en même temps qu’une coloration rouge de sang se manifeste, coloration peut-être plus vive avec l’ammoniaque qu’avec la potasse.

Au spectroscope on reconnaît une large bande d’absorption, un peu différente de celle de l'hémoglobine réduite. Cette dernière va de 98 à 1 1 d du micromètre (4 00 portant sur la raie du sodium;. La solution d’hématine cyanhydratée va de 106 à 120.

Nous bornons là ces considérations analytiques visà-vis de l’hématine. Nous savons préparer ce corps important. Nous connaissons ses affinités. Nous savons le caractériser en quantité très-faible. Il nous reste à torturer la molécule pour en saisir les dédoublements. Ge sera l’objet de prochaines études.