IL. — Etude des coupes frontales

La méthode de coloration de pe Liro-VozLaro permet de colorer électivement les corps cellulaires, leurs prolongements et leurs noyaux, laissant le tissu fibrillaire plus faiblement teinté. Grâce à celte méthode on peut mettre en évidence les transformations successives dont ces éléments sont le siège, la morphologie des cellules jeunes qui pénètrent le greffon et l'évolution du fibroblaste vers la cellule fixe étoilée normale. De même, les figures de dégénérescence peuvent être examinées en détail et la part peut être faite entre les cellules qui se nécrosent

d'emblée et celles qui, plus résistantes, paraissent conserver plus longtemps leur vitalité. On observe par ces examens :

1° Un stade de dégénération massive ;

2 Un stade de transformation des cellules épargnées ;

3° Un stade de régénération fibroblastique.

1° Stade de déyénération massive. — Dans la cornée normale du Lapin, après imprégnation au chlorure d’or ou après coloration par la méthode que nous avons employée, les cellules fixes ont l'aspect bien connu de masses protoplasmiques aplalies, de forme étloilée, avec des prolongements, plus ou moins étirées (fig. 22, PI. VI). Le protoplasma est finement granuleux. Elles appartiennent à ce que Ranvier appelait, comme nous le verrons plus loin, le type membraniforme. Le noyau, volumineux, est ovalaire, rénilorme, généralement rejeté à la périphérie du protoplasma avec un contour net, un réseau chromatique serré, contenant un ou deux nucléoles. Ses dimensions varient de 12 à 20 & dans le sens de la largeur, de 20 à 50 dans le sens de la longueur. Si nous examinons des coupes entre la douzième et Jaïtrente-sbuième heure (9-12, PIN IIT; et fig. 15,ePT. IV); après la grelfe, nous constatons que la presque totalité des cellules fixes du greffon sont frappées de nécrose. Dans les coupes superficielles, sous-jacentes à l’épithélium comme dans celles qui intéressent les couches plus profondes, au voisinage même du tissu de l'hôte, les éléments constitutifs de la cellule fixe sont complètement désorganisés. Ge sont des débris nucléaires réunis en amas plus ou moins volumineux formant des groupements arrondis ou des boyaux allongés, libres dans la substance intercellulaire, ou dissociés en une fine poussière qui saupoudre un corps protoplasmique déformé, flou et décoloré. Ces débris, résultat de la dégénérescence pycnotique du noyau, sont plus nombreux à la périphérie. Vers le centre du transplant, les fragments nucléaires sont moins morcelés; arrondis, renflés en haltère ou contournés en U, ils sont presque constamment enfermés dans des espaces vacuolaires entourés d’un protoplasma plus ou moins dégénéré.

Enfin, dans les parties les plus centrales, on retrouve des

corps nucléaires relativement conservés, quant à leur membrane d'enveloppe; mais ici la substance nucléaire est conglomérée en boules fortement colorées, isolées les unes des autres: De nombreux leucocytes polynucléés sont visibles dans toute l’étendue de la préparation, mais ils sont plus particulièrement abondants à la périphérie. À partir de la trente-sixième heure, ces agglomérations de débris cellulaires sont plus rares et plus irrégulièrement réparties; il existe des plages absolument nettoyées, ce qui parait bien témoigner d’un début d'élimination de ces substances mortiliées.

L'ensemble de ces préparations ne laisse subsisler aucun doute sur le sort réservé à la plus grande partie des éléments cellulaires du transplant. Toutelois l'étude des stades ultérieurs permet d'observer dans le tissu conjonctif quelques rares noyaux qui ont perdu la coloration intense normale et sont de ce fait assez difficilement décelables sur le fond clair de la préparation (/ig. 12, PI. ID). Ces cellules présentent des figures de division directe et même par endroits de karyokinèse (#g. 13, PL. III). Nous allons maintenant en décrire l'évolution particulière.

20 Transformation et mobilisation du reliquat cellulaire de la greffe. — L'examen des coupes entre la quarante-huitième et la quatrevinglième heure permet d'affirmer que ces formes cellulaires atypiques sont le résullat de transformations régressives des éléments fixes normaux du greffon épargnés par la karyolyse et la pycnose. Ces formes cellulaires s'observent, en effet, avant que les premiers éléments fibroblastiques aient envahi la greffe et ne peuvent jamais être confondues avec les cellules conjonctives néoformées : en eflet, à la suite des divisions directes et indirectes que nous avons signalées, ces éléments n'évoluent pas, comme nous le verrons pour les fibroblastes, vers la reconstitution de la cellule fixe normale. De volume beaucoup plus réduit, elles ont un noyau de contours irréguliers, d'aspect anguleux, parlois strié de plis longitudinaux; le protoplasma est réduit à une mince cuticule périnucléaire qui se résout aux deux pôles de la cellule en filaments grèles et de longueur variable (Ag. 17, PI. 111). Get aspect est assez caractéristique

EEE ar pour éviter toute confusion avec les cellules fixes normales ; mais sur des coupes méridiennes, la distinction devient beaucoup plus difficile à établir, et c'est ce qui explique que certains auteurs les aient décrites sur de telles préparations comme des éléments fixes respectés.

3° La régénération fibroblastique. — Les coupes méridiennes nous ont déjà renseigné sur le moment et le lieu d'apparition des cellules fusiformes qui à partir du troisième jour envahissent le greffon et vont reconstituer ses éléments cellulaires nécrosés dès les premiers stades. La méthode des coupes frontales après imprégnation par le Lixro-VoLLaro va nous permettre d'apporter plus de précision sur l'apparition et l’évolution de ces cellules jeunes, ou fibroblastes. Cette évolution constitue le phénomène capital dans les remaniements histologiques dont le tissu transplanté est le siège el je crois utile d'en reproduire ici la description que nous en avons donnée Bonxeron et moi.

&) APPARITION DU FIBROBLASTE.— Vers le troisième jour {/g. 10, PI. IT; et fig. 14, PT. III), quelquelois plus tôt, vers la quarante-huitième heure, la ligne de crêtes dentelées, qui sur une coupe frontale constitue la limite profonde de la bordure épithéliale, présente en certains points des signes évidents de désorganisation. Au niveau d’une crête épithéliale particulièrement marquée et qui représente précisément l’éperon marginal coupé perpendiculairement à son axe, la ligne de démarcation entre les deux tissus devient floue; les cellules épithéliales contiguës à cette ligne perdent leur coloration bleu foncé, les contours des noyaux ne sont plus aussi réguliers; il semble, en outre, que les lignes de ciment intercellulaire se relâchent et que certaines cellules sont déhiscentes. Ces modifications s’accentuent au fur et à mesure que l’on examine des coupes plus profondes. Sur les coupes passant par le sommet de l’éperon et intéressant, par conséquent, sur une grande partie de son étendue la travée épithéliale qui s’insinue sous la greffe à sa périphérie, nous trouvons de véritables îlots épithéliaux aberrants: les plus volumineux ont l’aspect de globes épidermiques ; d’autres, constitués par deux, trois ou quatre cellules inti-

Lacoste 9

mement accolées , en imposent au premier abord, à Ja faveur d’une surcoloration diffuse, pour des cellules géantes ; ces lormations épithéliales dégénèrent promptement par karyolyse el karyorhexis, et comme ils sont situés en plein üssu propre, dans une région qui est particulièrement riche, comme nous l'avons vu, en débris provenant des cellules fixes mortiliées, l'ensemble ne manque pas d’être fort complexe. Il devient extrêmement difficile de faire le départ entre ce qui est ou plutôt ce qui fut une cellule épithéliale et ce qui reste de la cellule conjonctive. |

C'est dans cette zone neutre de l’extrème pointe des pyramides épithéliales marginales, encombrée de déchets cellulaires et de leucocytes polynucléés que vont apparaitre insidieusement les cellules jeunes chargées de rénover et de régénérer non seulement le tissu de la greffe, mais encore les régions du portegreffe atteintes par le traumatisme opératoire. Quelquelois, dès la quarante-huitième heure, on voit, s’insinuant entre l'épithélium et le tissu propre, parfois même dans l'intervalle de deux couches épithéliales disjointes, une cellule effilée à ses deux extrémités, avec un noyau central fusiforme, à contour net, à réseau chromatique dense, avec un ou deux nucléoles. C'est l'élément fibroblastique, dont la pullulation va être si rapide que dès le troisième jour on voit de véritables travées sous-épithéliales formées par ces éléments jeunes disposés en files serrées. Promptement, ils s’insinuent entre les cellules épithéliales disjointes, se mêlant intimement à elles et aux débris nucléaires de la région, qui prend ainsi un aspect inextricable. Les éléments fusiformes accompagnent partout les colonnes cellulaires que l'épithélium envoie au sein du tissu propre; nous savons, par l'étude des coupes méridiennes, que ces éléments épithéliaux sont en progression constante jusque vers le sixième jour (fig. 11, PL. II). À ce moment, l'intrication conjonctivoépithéliale est à son apogée. Les extrêmes pointes des travées épithéliales se disloquent et s’éparpillent, tandis que de chaque côté les cellules fusiformes essaiment vers le Lissu propre qu'elles envahissent par groupes. De nombreuses figures de division

NAT cellulaire sont alors visibles, ce qui explique en partie la pullulation des nouveaux éléments.

Cet aspect ne fait, en somme, que confirmer pleinement les données qui nous ont été fournies par l'examen du bourgeon marginal sur les coupes méridiennes. Mais les coupes frontales vont nous révéler une autre zone de prolifération fibroblastique qui était passée à peu près inaperçue, celle de la région basale de la greffe {g. 16, PI. IV).

De la profondeur des bourgeons, les fibroblastes fusent vers les régions profondes de la greffe; on en rencontre bien dans les élages supérieurs, mais sous forme d'éléments isolés. À mesure que la coupe entame les plans plus profonds, leur nombre s’accroit dans des proportions telles qu’ils forment par endroits un véritable feutrage. Leur forme est légèrement différente des fibroblastes marginaux: ils nous ont paru dans l’ensemble plus allongés et plus grèles; le noyau est ordinairement moins effilé à ses extrémités. Ces cellules paraissent se diviser par scissiparité, si l’on en juge par les étranglements présentés par le corps cellulaire d’un bon nombre d'entre elles.

La production fibroblastique, très intense à partir du quatrième jour, se poursuit et même s'accroit jusque vers le huitième jour, pour décroitre ensuite lentement. Au quinzième jour, l’activité est très ralentie au voisinage des bords; on trouve néanmoins quelques cellules fusiformes parfaitement caractérisées jusqu'à une période très avancée (un mois et demi à deux mois). Mais, ici encore, il faut tenir compte des variations individuelles ; la production des fibroblastes est liée certainement à des causes mal connues, essentiellement variables suivant les cas. Qu'il nous suffise de constater ici la constance du phénomène. Les fibroblastes font leur apparition vers le troisième jour; leur activité s'épuise vers le vingtième. Dans ce laps de temps, ils subissent des transformations de la plus haute importance.

b) L'Évorurion pes rIBROBLASTES (fig. 14, Pl. III et fig. 16, PI. IV). — Les cellules fusiformes que nous venons de décrire au voisinage des bourgeons épithéliaux, et qui forment dès le

quatrième jour des groupes sous-épithéliaux importants, n’ont pas toutes une évolution identique. Il semble que les cellules les plus voisines de l’épithélium, celles qui tendent à s'organiser en un feutrage plus ou moins serré, qui court parallèlement à la basale, conservent plus longtemps leur aspect fusiforme. Mais, dès que les cellules qui essaiment autour des travées épithéliales et s’enfoncent dans le tissu propre de la greffe se trouvent à une certaine distance de ces travées, elles présentent dans leur texture des modifications tout à fait caractéristiques, intéressant à la fois le noyau et le protoplasma.

4 Le noyau se ramasse en quelque sorte sur lui-même. Il perd son aspect fuselé pour devenir ovalaire ou franchement arrondi. Ses contours ne perdent jamais de leur netteté et de leur régularité, ce qui permet de le distinguer assez facilement des noyaux irréguliers et beaucoup plus volumineux provenant des éléments fixes mobilisés. Il possède un ou deux nucléoles.

2 Le protoplasma, réduit dans la cellule fusiforme à une mince cuticule avec deux prolongements polaires, filiformes, devient exubérant. Dès’ le cinquième jour, on observe des noyaux entourés d'une petite plage protoplasmique d'aspect granuleux. En même temps, les prolongements polaires se modifient; ils deviennent plus massifs, se raccourcissent ou s'incurvent; leurs extrémités élargies se divisent et prennent un aspect digité. C’est le premier pas dans la transition entre la cellule fusiforme et la cellule fixe étoilée. Visibles dès le quatrième jour, ces figures de transformation ne cessent de se multiplier et de s’accentuer dans la suite. Au sixième et au huitième jour, on en trouve partout, à tous les élages de la grefle, au centre comme à la périphérie. En résumé, l'aspect des coupes frontales du quatrième au huitième jour nous révèle l'existence de formes cellulaires très variées. Ce sont tout d’abord les débris cellulaires provenant de la nécrose primaire des cellules fixes du greffon; en second lieu, des cellules à noyau irrégulier, à protoplasma filamenteux qui résultent de la division des éléments fixes épargnés ; enfin, des cellules fusiformes d’une vitalité très grande qui, parties du voisinage des éperons épithéliaux margi-