B. — COLORATION

a) Hématoxyline au fer de Heïidenhain.

Ce procédé est applicable aux pièces fixées soit par la méthode de Regaud, soit par les fixateurs osmiqués. Elle comprend trois temps :

Un mordançage ! de vingt-quatre heures dans une solution d’alun de fer ammoniacal à 5 p. 100. Après un lavage soigné de une heure environ, on place les coupes pendant vingt-quatre heures dans la solution suivante proposée par Regaud ?.

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1 La durée du mordançage et de la coloration peut être raccourcie en plaçant les

bains dans l’étuve à 370, 2. À titre d'indication nous signalerons qu’on peut également utiliser une solution

La différenciation se fait avec l’alun de fer ammoniacal. Pour obtenir de bons résultats il y a intérêt à utiliser une solution ne dépassant pas 3 p. 100. On évite ainsi les décolorations brutales; la différenciation peut être plus aisément graduée, puis arrêtée au moment voulu par un abondant rinçage à l’eau distillée.

Nous avons le plus souvent coloré le fond de nos préparations soit par l’érythrosine, soit par le rouge Bordeaux, soit par l'orange G. Notre préférence va au rouge Bordeaux.

b) Méthode de Benda.

Cette méthode nécessite la fixation osmiquée; elle comprend plusieurs temps.

4. MORDANÇAGE de vingt-quatre heures dans l’alun de fer ammoniacal à 5 p. 100 à l’étuve de 370. Vient ensuite un lavage prolongé pendant une heure.

8. TRAITEMENT DES COUPES dans une solution de sulfalizarinate de soude préparée avant l’usage, en versant dans l’eau distillée quelques gouttes d’une solution aqueuse concentrée de ce colorant, jusqu’à obtention d’une teinte jaune d'ambre.

y. COLORATION AU CRISTAL-VIOLET : après vingt-quatre heures

de séjour les lames sont enlevées, séchées au buvard et traitées par une solution :

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diluée d’un égal volume d’eau anilinée saturée. On chauffe pendant cinq minutes après émission de vapeur, puis on enlève l'excès de colorant au papier buvard.

Ô. TRAITEMENT ACÉTIQUE. — Les coupes sont immergées dans une solution d'acide acétique à 30 p. 100 pendant une minute ; les noyaux doivent apparaître en rouge, le protoplasma en violet. Pour faire disparaître toute trace d’acide, il faut laver à l’eau courante pendant cinq à dix minutes, après quoi l’on plonge très rapidement la coupe dans l’alcool absolu.

à 1 p. 100 dans l'eau distillée rigoureusement neutre (cette dernière condition est indispensable). Nous avons pu obtenir ainsi des résultats comparables à ceux donnés par les solutions plus fortes avec adjonction d’alcool et de glycérine.

d’hématoxyline