A. — FIXATION

La plupart des fixateurs du chondriome ont été emplovés par nous. Les uns et les autres présentent des avantages et des inconvénients.

a) Le liquide de Regaud.

Il fixe les pièces dans toute leur épaisseur et donne des blocs faciles à couper. Il est aisé d'établir, par comparaison avec l’étude vitale, qu'il n’altère ni la forme ni les rapports des chondriosomes.

La méthode de Regaud comprend deux temps :

%. LA FIXATION PROPREMENT DITE qui est effectuée dans le mélange suivant (liquide IV) :

Solution aqueuse de bichromate de K. à 3 p. 100. . . . . . . . 80 parties. HOTMOLAUCOMMELCO M TR CRC Re 20 parties.

L'immersion des fragments dans cette solution doit être en moyenne de quatre jours.

8. LA POSTCHROMISATION, second temps du procédé, se fait dans un bain de :

Bichromate de K. à 3 p. 100.

Cette opération a pour but, d’après Regaud, d’insolubiliser les lipoïdes dont les mitochondries seraient constituées !.

Après une série de tâtonnements nous avons constaté que les meilleurs résultats étaient obtenus sur le foie après une postchromisation de vingt-cinq jours environ.

La méthode de Regaud nous paraît être la méthode de choix pour le chondriome hépatique, car, si on peut lui reprocher de ne pas mettre en évidence les graisses neutres, elle a l’avantage de montrer avec une netteté très grande les deux catégories de plastes d’origine mitochondriale que nous désignerons ultérieurement sous le nom de « grains pleins » et de « grains à coque ». De plus le liquide de Regaud ayant une pénétration parfaite permet l'étude topographique du chondriome dans le lobule. Cette fixation constitue enfin une variante du procédé de Ciaccio et peut être utilisée pour la détection ultérieure des lipoïdes. Le seul inconvénient réel réside dans la longue durée de son application.

b) Liquide de Tupa.

Un gros progrès, qui supprime le mordançage chromique, a été récemment introduit par Tupa.

On fixe pendant vingt-quatre heures dans l’une des deux solu-

tions suivantes :

1. Solution de formaline à 20 p. 100. . . . . . . . . . . . . 100 parties. NStratend UTANO ER TE Me ee Diane 1 partie.

2NSoiutiontiVEde Repaud eV NE 0.000100 parties. INitratondiurane 200, 0,10 0 Rd DEN 2 Lu 1 partie.

Il importe de renouveler la solution après huit ou dix heures. Nous avons utilisé cette technique avec avantage, les résultats

1. Dans une série de travaux publiés en 1908, Regaud a montré qu'il est nécessaire pour obtenir de bons résultats de mordancer les pièces fixées dans une solution de bichromate à 3 p. 100; ainsi se trouve insolubilisée une substance, ordinairement soluble dans l’alcool et qui entrerait dans la constitution des chondriosomes. Les lipoïdes présentent cette propriété. Regaud en déduit que les lipoïdes forment en grande partie la substance mitochondriale. Fauré-Fremiet, Mayer, Rathery et Schaeffer pensent également que les chondriosomes sont formés d’une substance albuminoïde imprégnée de lipoides. Quelques auteurs et en particulier Duesberg et Guilliermond ont contesté l’utilité de cette postchromisation. Sjôbring en 1900 avait coloré le chondriome après fixation dans le formol plus ou moins dilué; nous avons également pu observer des chondriosomes sur des préparations fixées au formol salé et traitées parle Scharlach ou le Soudan IIT. — Ces éléments n'étaient évidemment pas colorés, mais apparaissaient par leur réfringence plus grande que celle du cytoplasma.

qu’elle donne sont comparables à ceux obtenus par la méthode de Regaud. Elle présente sur cette dernière le gros avantage de la rapidité beaucoup plus grande (vingt-quatre heures au lieu d’un mois), mais elle ne permet pas la détection des lipoïdes, en raison de l’absence de postchromisation.

c) L’acide osmique.

A été utilisé par nous suivant la formule de Benda modifiée par Meves. On fixe pendant huit jours dans le mélange :

Solution d’acide osmique à 2 p. 100 . . . . . . . 2 io cm Solution d'acide chromique à 1 p. 100... . 4 cm. Acide acétique cristallisé. + . . . . : . . .. . . + . . . 3 à 4 gouttes.

Cette formule est identique à celle du mélange fort de Flemming, seul l’acide acétique a été considérablement diminué. On peut sans inconvénient le supprimer, car il altère le chondriome.

La technique de Benda comporte ensuite un lavage sommaire, suivi d’un séjour de vingt-quatre heures dans une solution à parties égales d’acide chromique à 1 p. 100 et d’acide pyroligneux rectifié; on lave encore rapidement, puis les fragments sont à nouveau immergés pendant vingt-quatre heures dans un bain de

Bichromate de K. à 3 p. 100.

Un dernier lavage prolongé précède la déshydratation et l’inclusion.

Meves a montré l’inutilité des temps 2 et 3. Nous avons suivi sa

technique en fixant nos fragments pendant huit jours dans le mélange suivant :

Acide osmique à 2 p. 100. . AE CR 10 LS DO fc 4 parties. Acide chroamiqueenép lOOE RER 15 —

Ce procédé nous a paru excellent pour l'étude analytique du chondriome et nous a rendu de grands services pour la constatation des rapports existant entre les mitochondries et la graisse. On peut obtenir de belles cellules au sein desquelles les chondriosomes (après coloration par l’hématoxyline) se détachent nettement en noir sur le fond blanc mat du cytoplasma parsemé de boules graisseuses grises. II semble que par ce procédé les éléments

4u chondriome soient légèrement gonflés sans que cette modification entraîne de déformations appréciables dans la forme générale.

Tous les fixateurs osmiqués ont le grave inconvénient de pénétrer très lentement, de telle sorte que l’examen des préparations ainsi traitées montre deux parties absolument dissemblables. Dans la couche superficielle dont la profondeur varie de 150 à 200 vw, on trouve des mitochondries et des chondriocontes diversement amalgamés, tandis que dans la zone centrale le chondriome est uniquement représenté par des grains sidérophiles plus ou moins volumineux. Nombre d’entre eux sont le résultat de phénomènes autolytiques et représentent des chondriocontes altérés et qui n'ont été fixés qu'après leur altération. Il importe de ne pas considérer cet aspect comme normal.

Nous signalerons, enfin la difficulté qu’offrent au rasoir les fragments fixés par les mélanges osmiqués.

La fixation constitue le temps essentiel dans la technique mitochondriale; elle seule joue un rôle véritablement électif. La coloration ultérieure ne fait que « révéler » l’action du fixateur, comme l’a très justement écrit Mangenot (1921).