ASIE
agiter vigoureusement jusqu'à obtention d’un liquide homogène;
2° Filtrer ce liquide sur une toile métallique à grandes mailles. Les luiles ordinaires des réchauds à gaz sont parfaitement suffisantes ;
3° Recueillir le filtrat dans un grand verre à pied. Très vite les matières se sédimentent, on recueille le dépôt ou, si celui-ci est mal isolé, on décante les couches supérieures qu'on remplace par une nouvelle quantité d’eau filtrée ;
4° Quand la sédimentation est achevée, le dépôt est repris par une solution salurée à froid de sel marin (sa densité est voisine de 1.185) et versé tout entier dans un récipient cylindrique en verre, de petite capacilé (par exemple 6 centimètres de haut sur 4-5 centimètres de diamètre. On remplit jusqu'à ras bord de la solution saline et on couvre d’une lame de verre bien plane, de façon qu'aucune bulle d'air ne s'interpose entre le liquide et la lame. Abandonner alors le flacon dans un endroit à l'abri des heurts et des trépidations; 5° Vingt-quatre heures après, retourner d’un seul coup la lame. Couvrir un point d’une lamelle el examiner directement cette lame posée sur le chariot de la platine. Les œufs, parfaitement visibles, d'une définition remarquable, apparaissent dans des champs absolument nets et où ne subsistent que quelques masses grumeleuses
éparses, formées de savons calcaires ammoniaco-magnésiens.
Cette méthode a pour elle de très nombreux avantages :
Le matériel, très simple, peut se trouver partout; la solution saline est peu onéreuse.
Les manipulations sont rapides; pas de centrifugation et pas d'emploi de substance chimique corrosive, donc pas de modifications dans l'aspect des œufs d'helminthes.
Enfin, on peut pratiquer à la fois un très grand nombre d’analyses. C’est le procédé de choix pour les médecins coloniaux qui auront à établir l'indice parasitaire d'une région infestée par le Necator, par exemple, ainsi que pour les médecins chargés du service sanilaire des mines infestées par Ankylostome.
Nous rappelons (voir prélèvement) que celte méthode est suffisamment précise pour donner des résultats certains avec
l'emploi de 10 grammes de matières fécales.
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b) MÉTHODES GÉNÉRALES.
La thèse de Pirot démontre que les deux meilleures méthodes pour la recherche des œufs d'helminthes, en dehors de celle précitée, sont celles de Carles-Barthélemy et de Teleman-Langeron; nous les considérons aussi comme étant les plus favorables pour la recherche des kystes de protozoaires. Aussi feronsnous abstraction des autres.
Mérnone ne CanrLes-BanTHÉLEmY (9).
Exposé de la méthode. — Placer dans un verre de 200 ce. 20 à 25 grammes de matières fécales. Délayer et triturer à l’aide d’un agitaleur, avec une solution d’eau physiologique formolée à 10 p.100.
1° Passer cetle émulsion sur un tamis de laiton à mailles de 1 millimètre ou sur une toile métallique placée comme un filtre sur entonnoir.
2° Filtrer une seconde fois sur un tamis de soie disposé de la même façon, sans plis, sur un entonnoir cannelé (tamis n° 90 à mailles de 60 y, ou n° 32 à mailles de 295 y).
3° Centrifuger pendant une minule à 1.000 tours. Recueillir le culot.
4° Diluer ce culot dans un tube avec une solution citrique à 12 p. 100 (de densité 1,047). Ménager à la surface 1 à 2 centimètres que l'on comble avec de l'éther sulfurique. Agiter énergiquement pour détacher le culot, émulsionner l’éther.
5° Centrifuger une seconde fois à 1.000 tours pendant trente secondes. Il se forme un voile à la limite de séparation de l'éther et du liquide sous-jacent.
6° Avec une eflilure de pipette, dilacérer ce voile pour mettre en hberté les kystes qui ont pu y être englobés.
7° Centrifuger une troisième fois pendant trente secondes. Rejeter brusquement le liquide et ne conserver que le culot.
Nous considérons cette méthode comme la méthode de choix pour la recherche des kystes de protozoaires surtout. Tout au
DO OÈEEE
plus, pourrions-nous lui trouver quelques minimes inconvénients : sa longueur, sa complexité.
La nécessité d’un centrifugeur électrique et de trois centrifugations {(V. A/férations parasitaires).
La filtration sur tamis à mailles fines.
Pourquoi cette filtration est-elle un inconvénient ?
Le produit de l'homogénéisalion des selles, examiné au microscope, montre, entre autres, la présence de débris végétaux dont les plus communs sont : Les cellules en palissade de l'enveloppe des graines de légumineuses (haricots, pois) (50 à 400 v);
Les cellules (de même provenance) avec cristaux d’oxalate de calcium (en amas 100 à 400 v);
Les grains d'amidon cru (30 à 400 u);
Les cellules végétales.
Les dimensions de ces éléments, prises à la chambre claire, varient dans les limites indiquées entre parenthèses, en face de chacune d'elles. Si on filtre le produit de l'homogénéisation sur un tamis à mailles de 60 v, tous ces débris végétaux seront arrêtés et en s'accumulant constitueront un filtre organique dont les mailles irrégulières et de dimensions inconnues emprisonneront la majorité des œufs d'helminthes (la dimension de ceux ci varie entre 30 et 100 y environ); les kystes, plus petits, passeront plus facilement.
Si on emploie un tamis à mailles de 225 v, le même fait se reproduira, mais en moins grand, car une assez forte proportion de débris végétaux passera au travers du filtre. Mais alors, autre écueil : si la selle est très riche en débris végétaux, les champs miscroscopiques seront encombrés par ces éléments, indésirables parce qu'ils masquent les œufs et les kystes.
Malgré ces quelques désagréments, la méthode de Carles- Barthélemy doit être considérée à l'heure présente comme étant la plus précise pour la recherche des kystes de protozoaires.
Pour la pratique courante, nous lui préférons cependant la méthode de Telemann, modifiée par Langeron.
RC (ME
Méruone pe TELEMANN-LANGERON (30).
Exposé de la méthode. — 1° Dilution : Prélever en cinq ou six points différents de la masse fécale gros comme une noisette de matières. Les placer dans un flacon à large goulot bouché à l'émeri; ajouter de l’eau physiologique en quantité suffisante (10 ec.) et une vingtaine de billes de verre. Homogénéiser ;
20 Tamisage : Sur toiles de bronze inoxydables, mailles de 4 millimètre ou 500 uw, Où 340 y, ou 200 y;
3° Additionner le liquide obtenu (8 cc.) de la moitié de son volume d'HCI ordinaire étendu de son volume d’eau (4 ce.). Agiter, laisser reposer quelques minules;
4° Ajouter au mélange (12 ce.) son volume d'éther sulfurique;
5° Centrifuger à faible vitesse. Rejeter les parties supérieures.
Examiner le culot.
On a avantage à se servir des filtres à tamis interchangeables recommandés par Langeron (31).
La contenance des tubes à centrifugalion étant, en général, de 12 cc., nous avons mis entre parenthèses les quantités à employer de chaque produit pour utiliser toutes les matières fécales homogénéisées.
Celte méthode est rapide, n’exige qu'un matériel peu compliqué et donne de très bons enrichissements, supérieurs à ceux de Carles-Barthélemy pourles œufs d'helminthes, d'après Pirot. Pour les kystes de protozoaires, elle lui est un peu inférieure, mais donne, malgré tout, des résultats très suffisants pour le diagnostic.
Un seul inconvénient signalé déjà pour le Carles-Barthélemy, mais ici plus marqué, puisque le tamis ordinairement employé a des mailles de 340 w. Le culot de centrifugation renferme fréquemment des débris végétaux, en telle abondance que la lecture des préparations est difficile, sinon impossible.
Cet inconvénient nous à peu à peu amené à meltre au point une méthode qui, tout en nous débarrassant de ces éléments gênants, nous donne des enrichissements comparables à ceux que fournissent les techniques précitées.
Nous allons maintenant l'exposer dans tous ces détails.
Lib de ‘ii
MérTone PERSONNELLE (Al, 42).
Pour nous débarrasser des éléments énumérés plus haut, nous nous sommes adressé au réactif de Schweilzer, après avoir rejeté la filtration sur tamis à mailles fines pour les raisons que l'on connait. Ce réactif de Schweitzer, dissolvant à froid de la cellulose, est peu coûteux et facile à préparer. Il suffit pour cela d'introduire de la tournure de cuivre et de l’'ammoniaque dans un flacon à deux tubulures relié à une trompe à eau, de façon à faire passer de l’air dans le mélange pendant six à huit heures.
Le réactif est prêt à être employé quand il dissout de facon convenable le papier filtre ordinaire.
Une fois en possession du réactif, nous avons essayé son action sur les débris végétaux contenus dans les selles :
1° Action sur les débris cellulosiques purs. — Dissolution immédiate; ‘
2° Action sur les cellules. — Dans le cas où des cellules végétales ont une enveloppe cellulosique et un contenu autre, l'enveloppe est dissoute; le contenu est mis en liberté;
3° Action sur les débris végétaux imprégnés de lignite. — Ceux-ci restent inlacls.
%° Action sur l’amidon cru. — Hydrolyse; les cellules d’amidon, d’opaques qu’elles étaient, deviennent translucides et leurs dimensions sont de beaucoup accrues.
Il fallait ensuite s'assurer que la modification ou la destruction des débris végétaux ne s'accompagnait pas de changements d'aspect et de structure des œufs et des kystes.
Pour cela, nous avons expérimenté le réactif sur des selles contenant des débris cellulosiques et des éléments parasitaires de toutes
sortes.
Nous nous sommes ainsi rendu compte que ces derniers n'étaient modifiés qu'au bout d'un temps relativement long (sept à quinze minutes). Done, pas d'obstacle jusqu'ici à l'emploi du réactif de Schweitzer.
Mais comment faire intervenir ce réactif au cours d'une méthode
d'enrichissement connue?
