A. Spectres des albumines

a. Ovalbumine cristallisée. — Les cristaux ont été préparés en suivant les indications données par Hopkins let par Cohn? Les blancs de quelques œufs pondus le jour méme furent, après filtration sur étamine, addilionnés d'un volume égal au leur d'une solution saturée de sulfate d'amimonium *; et le tout fut battu en neige. Quinze heures plus

UE, Gowraxn Horkixs: On fhe separation of a pure Albumine from Egy- While. — Journ. of Physiol. XXV, 306, 1900.

Zeitschr. f. physiolog. Chem., XLIII, 41, 1904-05.

On ne doil employer que du sulfate d'ammonium soigneusement purifié, car le sulfate de qualité ordinaire contient souvent un peu de picoline qui, comme Sorel l'a observé (Arch. des sc. phys. et nat, 3 période, IX, 547, 1883), absorbe les rayons compris entre les raies 17

tard, on sépara par filtration la liqueur du précipité de globulines et on ajouta à la liqueur de l'acide acétique à 10 p. 100 dans la proportion de 2 ce. pour 100 ec. de la solution d'albumine : la liqueur devint aussitôt fortement laiteuse. En prélevant immédiatement quelques gouttes du liquide trouble, on observa au microscope (gr. — 400) qu'il y avait producon d'un fin et abondant précipité amorphe. Au bout d'un quart d'heure, l'examen répété permit de constater par places un debut de cristallisation: au bout d'une heure, la cristallisation étut presque complète : au bout de vingt-quatre heures, il n'y avait plus trace de particules amorphes. Les cristaux étaient constitués de fines aiguilles souvent groupées en rosettes. IIS furent séparés des eaux mères par centrifugation, lavés avec une solution demi-saturée de sulfate d'ammonium contenant 1 p. 1000 d'acide acétique, séparés des eaux de lavage par centrifugation et dissous dans l'eau disullée dans laquelle ils sont très solubles. La liqueur obtenue était rigoureusement incolore, On ajouta à celle liqueur de la solution de sulfate d'ammonium saturée, jusqu'à production d'un fin précipité persistant. Au bout de vingt-quatre heures environ, le précipité — formé exclusivement de cristaux aciculaires — fut séparé, lavé et redissous comme la prennére fois. On soumit la liqueur à la dialvse dans un courant d'eau disüllée, à basse température, jusqu'à élimination des dernières traces de sulfate (ce qui exigea 72 h.).

D'après Hopkins, l’albumine ainsi recristallisée est chimiquement pure et absolument homogène: son pouvoir rotatoire a pour valeur : [a]b = — 30,7. Sa composition centésimale est : © 92,7 ;

ÉVAPEENS OMS ESS ES CeEndres DU ROPSU

Cette solution d'albumine dialvsée était faiblement, mais nettement acide au tournesol ! et très légèrement opalescente.

et 22, Le sulfate pur de Kahlbaum, que J'ai employé, est parfaitement transparent. J'ai constaté qu'une solution en renfermant 30 gr. par litre éteiguait seulement la raie 25 (2 2065) sous l'épaisseur de 15 mm.;: et la raie 27 (2 2100) sous l'épaisseur de 45 mm: il n'y avail aucun aflaiblissement appréciable des raies moins réfrangibles.

! D'après A. Gaurier (Leçons de chimie biologique, 53, 1897), l'albumine dialysée rougit le tournesol el peut étre désignée sous le nom d'acide albuminique.

Tu. Osporxe (Zeitschr. f. physiolog. Chem., NXXIII, 242, 1901) à trouvé que, pour rendre neutre au tournesol 1 er. de diverses substances

Fi. 14

Ovalbumine

acide,

Ovalbumint

neutre

Ovalbumine

alcaline,

Le résidu de lévaporation de 10 ce. pesail (après dessication à poids constant à 110?) 03914. La calcination ne laissa pas de cendres visibles. *

L'examen du spectre d'absorption à été fait avec la solution décime successivement : normalement acide a), neutralisée B) et alcalinisée y. Voici la reproduction des spectroorammes obtenus.

at F4

CNT TITTERNN | +

Les données numériques se rapportant à chacun de ces spectres sont contenues dans les tableaux suivants :

albuminoïdes pures parmi lesquelles lovalbumine cristallisée préparée par le procédé de Hopkins il fallait y ajouter de Oct à fee5 d'une solulion d'aleali décinormale.

CE aussi E. G. Wirrcocr: Cryslalline Egq-Albumine. — Journ. of

Physiol. XXXVII, 35, 1908.

— ki

a) Ovalbumine acide. — Concentration: 3% ,914 par litre.

ÉPAISSEUR BANDE D'ABSORPTION DERNIÈRE RAIE en mm. À À Û 2288 3 (2873 — 2667) 2344 D (2873 — 9665) 2365 7 (2873 — 92663) 2389 9 (2881 - 9663) 2394 ill 2851 — 2698 2405 15 2427 — 92698 2444 15 2997 — 9614 2470 17 294$ — 2607 2476 19 2949 = 92599 2493 21 2981 - 92573 2502 23 D 2981 N. B. — Epaisseur indique l'épaisseur de la couche liquide tra-

versée par la lumicre.

BANDE D'ABSORPTION indique les raies qui délimitent la bande d'absorption. La parenthèse signifie qu’il y a obseurcissement dans la région désignée, mais non extinction des raies les plus brillantes.

DERNIÈRE RAIE indique la rate extrême transmise.

__ Les longueurs d’onde sont toujours exprimées en unités d’Angstrôm.

Bb) Ovalbumine neutre. — Concentration: 38,914 par litre.

Neutralisation par NaOH avec le papier de tournesol comme indicateur. Solution à peine opalescente. Le ütre en albumine est exactement le même que pour l'ovalbumine acide, car la

ÉPAISSEUR BANDE D'ABSORPTION DERNIÈRE RAIE en mm. À Àl { (0873. 2667) 92329 3 (2873 — 92665) 2365 5 (2881 - 2663) 2394 fl (2881 — 266) 92498 9 DODTEMOC?E 2444 dh£ DOM 2628 92445 13 9945 — 9614 2470 15 92949 — 9599 92476 17 9981 — 2573 92493 19 > ——> 2981 il — 2981

neutralisation a porté sur 10 ce. de la solition mère que l'on avait étendus à un volume un peu inférieur à 100 ce. On à complété à 100 ce., après seulement que la neutralisation était obtenue.

N.B. — A moins d'indication contraire, on a toujours procédé ainsi quand un corps a été examiné à un même degré de concentration en milieux de réactions différentes.

») Ovalbumine alcaline. — Concentration : 34,914 par litre. Solution contenant 10ce, de soude normale (soit 08,4 NaOH) par litre. IT s'agit done d’une solution d’albumine neutre dans la liqueur de soude N/1007. Alecalinité franche au tournesol; liqueur parfaitement limpide.

ÉPAISSEUR BANDE D'ABSORPTION DERNIÈRE RAIE cb mu. À À 1 (2873 — 9748) 2313 à) (2873 — 2748) 2365 » (2881. — 2667) 2394 7 («927 — 9665) 2145 9 2944 — 9663 2476 11 DOI ONTCES 2493 13 DILOON DCIE 2558 15 DOS 9599 2573 17 PRE 2981 19 — 2981 21 — 3018 23 - 3018 b. Sérumalbumine cristallisée. — Lu sang de cheval

défibriné fut filtré sur étamine, puis centrifugé : on décanta le sérum auquel on ajouta un volume égal au sien de soluüon de sulfate d'ammonium saturée. On abandonna au repos pendant quelques heures et distribua alors le sérum sur plusieurs filtres qui relinrent le précipité de globulines. Le Hltrat fut additionné d'acide sulfurique N/35 dans la proporüon de 10 ce. à peu près pour 100 cc. de la liqueur On observa le lendemain un assez abondant dépôt d'aspect nettement cristallin déjà à l'œil nu: au microscope (gr. == 400), le dépôt apparut constitué de cristaux parfaitement nets et

! Une solution de soude N/100 éteint la raie À 2100 sous l'épaisseur

de 10 mm. et la raie À 2139 sous l'épaisseur de 40 mm.

réguliers, relativement gros, généralement isolés, mélangés de rares parlicules de substance amorphe. Les cristaux furent séparés des eaux mères par centrifugation, lavés avec une solution demi-saturée de sulfate d'ammonium contenant 10 ce. d'acide sulfurique normal par litre !, et dissous dans l'eau disüllée. On filtra pour éliminer un léger résidu amorphe qui restut Imsoluble, On versa, dans la liqueur, de la solution de

lie, 17 DéerUnNiIalbumine

acide,

DeETUN)ilbunnine

neulr

Sérunialbum

alealin

sulfate d'ammonium saturée jusqu'à production d'un trouble Jaiteux. On obtint amsi, au bout de quelque temps, une nouvelle cristallisation. L'examen microscopique, pratiqué le lendemain, montra que les cristaux étaient exempts de toute trace de matière amorphe. Ces cristaux, séparés des eaux mères, furent lavés comme la première fois el redissous dans

! J'ai constalé que celle solution n'allère pas la forme des cristaux

l'eau distillée. Cette liqueur fut dialysée dans un courant d'eau distillée, à la glacière, jusqu'à ce qu'il n'y eût plus d'entrainement de sulfate : elle fut alors recueillie. Elle était parfaitement limpide et incolore, à peine opalescente, nettement acide au tournesol. Le résidu de Are de 10 ce. pesait, après dessication à poids constant (à 110c), O£:,1108. La caleination laissa des traces de cendres re de chaux, absence de fer). Avant l'emploi, la hqueur précédente fut étendue d'un volume d'eau distillée égal au sien (ou double du sien, suivant le cas).

D'après Michel ‘, le pouvoir rotatoire de la séramalbumine ceristallisée oscille entre [als = —6l° et [ain = —61",2; sa composition centésimale este Cro8 0 MANS NAS 08 SP OI2E OR IOESE Cendres 0,16.

Notons la différence suivante, signalée par Môrner ”, entre l'ovalbumine et la sérumalbumine cristallisées : la sérumalbumine (préparée avec du sulfate d’ammonium, mais même sans adjonction d'acide sulfurique libre) constitue un sulfate: il n’en est pas-de même pour l’'ovalbumine dont sensiblement tout le soufre est albuminoïde.

J'ai successivement étudié le spectre de la sérumalbumine en solution normalement acide a), en solution neutre p} et en solution alcaline y).

Données numériques :

a) Sérumalbunine acide. — Concentration : 38,54 par litre.

ÉPAISSEUR BANDE D' ABSORPTION DERNIÈRE RAIE en mm. À À 0,5 2315 (2802 — 2683) 2943 3,0 (2833 — 2667) 2500 ÿ (RSS = 260) 2582 6,9 CS30 = 2663) 2394 à (2873 — 2628) 2413 9,5 2873 — 2628 2428 11 2881 — 2623 2115 120 2881 2628 2470 11 2927 — 2614 2476 19,9 2927 — 2612 2493 I à Se 2927

A, Micuer. — Verhandl. d. physik. mediz. Gesellsch., Würzburg, XXIX, 1, 1895.

Ke A M Münxer: Zur Kenntniss der Bindung des Sclovefels

P} Sérumalbumine neutre. — Concentration: 28,7 par litre. Neutralisation par NaOH, avec le lournesol comme indicateur.

ÉPAISSEUR BANDE D'ABSORPTION DERNIÈRE RAIE en mi. À 7) Il 2515 4 (2835 — 2663) DoAz # (2835 — 2665) 2504.

10 (2873 — 2663) 2413 15 (2873 — 2651) 2428 16 Den —. A 2445 19 2873 — 2628 2455 22 2881 — 2628 2470 2, 2927 — 2612 2456 28 ps - S 2927 31 — 2927 34 2048 y) Sérumalbuinine alcaline. — Concentration : 28,77

par litre. Solution d'albumime neutre dans la liqueur de soude N/100.

ÉPAISSEUR BANDE D'ABSORPTION DERNIÈRE RAIE en mm. À À }l 226 { (2927 — 2881) 2176 7 (P9DTE — 12861) 2531 10 (2948 — 2873) 2586 15 (2981 2833) 2612 16 2081 2771 2593 19 20362749 2749 Re »» a 3076 25) == 3076 25 = 5076 D 3076 à = 3076