CELA P TIRER

Absorption des rayons ultra-violets par les protéides et leurs dérivés.

23. Classification des protéides examinées. — On désigne sous le nom de protéides des substances qui peuvent être considérées comme résultant de Ta combinaison d'une substance protéique (albuminoïde, histone, albumoïde} et d'une autre substance organique non protéique, cette dernière constituant le groupement prosthétique de la protéide. Les protéides sont donc des substances protéiques copulées.

Les principales catégories de protéides, généralement admises, sont les suivantes :

Les hémoglobines (et les hémocyanines) :

Les nucléines (et les nucléoalbuminoïdes) :

Les paranucléines (et les paranucléoalbuminoïdes) : Les glycoprotéides.

I'est douteux que les paranueléines et les glvcoproléides soient de véritables protéides. Ce ne sont, semble-tal, que des pseudo-proléides que lon ne peut distinguer qu'assez arbitrairement des simples protéiques. Il est préférable d'appeler ces corps, suivant le cas : protéiques phosphorés ou protéiques hydrocarbonés. Voici pourquoi : Les paranueléines sont censées formées par Funion d'un groupement protéique et dun acide paranueléique. Or, les acides paranueléiques n'ont pas été, jusqu'à présent, isolés à l'état de pureté: on a seulement pu oblenir des complexes phosphorés présentant encore la plupart des réactions de coloration des substances albumimoïdes, L'existence d'acides paranucléiques non aibununoïdes est actuellement hypothétique.

Quant aux glycoprotéides, ce sont seulement des protéiques présentant une richesse remarquable en glycosamine, le mode de liaison de la glycosamine ne différant pas sensiblement de ce qu'il est dans les molécules protéiques proprement dites. On ne voit done pas pourquoi on les placerait à part des protéiques simples, alors qu'on ne sépare pas entre eux les protéiques contenant relativement beaucoup, ou peu, ou ne contenant pas de glycocolle, de tyrosine ou de tryptophane. Cette manière de voir, soutenue notamment par Abderhalden, semble en effet la plus correcte.

Pour ces motifs, j'ai eru devoir me borner à examiner les spectres d'absorption ultra-violets de quelques protéides typiques appartenant aux deux premières catégories : oxyhémoglobine de cheval, oxyhémocyanine ! d'escargot, nucléine de la levure de bière,

Dans l'aperçu hislorique qui suit, je n'aurai à parler que des recherches de mes devanciers sur le spectre des oxvhémoglobines, les spectres des oxvhémocvanines et des nucléines n'ayant pas été l'objet de travaux antérieurs.

S 1. — Absorption des ravons violets et ultra-violets par l’oxvhémoglobine.

24. Aperçu historique. — J.-L. Soret examina le premier, en 1878, l'absorption des ravons ultra-violets par l'oxyhémoglobine. € J'ai fait à la lumière solaire, dit:l, un petit nombre d'observations sur le spectre du sang oxygéné: je nai pas trouvé de bande d'absorption dans lultra-violet proprement dit; mais j'en ai observé une qui, à ma connaissance, n'a pas encore été signalée, dans le violet, entre G et h, plus près de cette dernière [raie]. Le sang était à un état de dilution tel que les deux bandes caractéristiques du spectre lumineux étaient nettement visibles. — La bande dans le

! J'exposerai plus loin (27) les raisons qui me font considérer lFhé-

mocvanine comme étant une protéide.

mu —

violet se distingue très facilement avec loculaire fluorescent elle est difficile à voir à l'oculaire ordinaire, à moins que l'on ne place un verre bleu devant la fente du spectroscope. Au delà on distingue les rayons ultra-violets : à ce degré de dilution, la lumière de l'étincelle est transmise jusqu'à 21! environ ?, »

Dans son mémoire de 1883*%, Soret revient sur ce spectre du sang; il signale le fait que la photographie reproduit très bien la bande dans le violet, puis ajoute : « Avec le sang dilué au 55 (soit {ec. dans 1 litre), placé dans une auge de [0 mm. d'épaisseur, cette bande est très distincte : elle occupe à peu près la moitié de l'intervalle compris entre G et H, son centre tombant sur h: lultra-violet est transmis. — Avec le sang au l4%. elle remplit tout l'espace compris entre G et H: la région entre H et L est assombrie. — Avec le sang au ! 450, elle déborde du côté de G d'une part et du côté de FH d'autre part: tout le spectre ultra-violet paraît assombri. — I v a du reste des différences notables suivant les échantillons.

< En employant la lumière des étincelles d'induction, Foculüre fluorescent et l'appareil à épaisseur variable, on trouve, avec de grandes différences dans les valeurs numériques suivant les échantillons, que la bande du violet, s'étendant dans l'ultra-violet, se manifeste par ce que la raie du magnésium, 2.383 1 (près de L) disparait avant la raie 9 du cadmium à laquelle correspond un maximum de transmission. Au delà on remarque deux nouvelles bandes d'absorption dont lune, tombant sur 12, est probablement due à lhémoglobine, tandis que l'autre, tombant sur 17, est évidemment celle de la sérine, Le maximum de transparence qui sépare ces deux bandes

coïncide avec la raie du magnésium À = 309 &wu: le maximum suivant tombe sur LS, puis l'absorption augmente graduelle-

! Il s'agit de la ligne Cd 21 (2 = 2419 À ©).

® J.-L. Sorer : Recherches sur l'absorption. ele. — Arch. des scienc. phys. et nat. LXI, 347, 1878.

M SORET, Loc. cit., 484.

ment Jusqu'à 29 »!, En 1890, d'Arsonval? fit paraitre un mémoire sur la Photographie des spectres d'absorption de l'hémoglobine el son emploi en physiologie el en médecine légale. D'Arsonval devait ignorer les travaux de Soret, puisqu'il ne les cite pas. Il observe, au moyen de la photographie, que l'oxyhémoglobine (sang oxygéné) présente, indépendamment des deux bandes caractéristiques au voisinage des raies D et E de Fraunhofer, <une troisième bande beaucoup plus large, dital, et qui est tout à fait remarquable par la netteté avec laquelle elle se termine dans Fultra-violet. Ainsi, chose inattendue, Fhémoglobine oxygénée, au dieu d'éteindre régulièrement le violet et lultra-violet, comme l'examen à l'œil semblait Findiquer, Fhémoglobine [dis-je] est absolument transparente pour les radiations ultraviolettes à partir d'une certaine longueur d'onde. Quelle que soit la concentration de cette solution, cette bande occupe toujours le même espace et se montre d'une sensibilité excessive. Quand le sang est dix fois trop dilué, pour qu'on aper. coive à l'œil les deux bandes du jaune, la photographie accuse encore très nellement la bande d'absorption de Pultraviolet.

« Il existe d'autres bandes dans Fultra-violet, mais qui sont moins nettes que celle que je viens de signaler: Fv reviendrai plus tard. Dans cette note, il me suffit d'indiquer que cette première bande semble s'étendre de la raie G, un peu au delà de la raie H,, et que, par conséquent, elle correspond à des longueurs d'onde allant de 430 à 593 millionièmes de millimètres environ. »

La question fit un progrès important par les recherches étendues que publia Gamgee en 1896 *. Ce physiologiste exa-

1 Cf, Sorer: Sur le spectre d'absorption du sang dans la partie violette et ultra-violette. — €. R. Acad. des Sciences, NON 1269, 1883. ;

? A, d'ARSONVAL. Arch. de physiol. norm. et pathol,, »

II, 340, 1890. | A, Gaumece: On the Absorption of the extreme violet and ultra-

ENSÈT:,

mina, par la méthode spectrographique, l'absorption des ra. dialions comprises entre les raies F°et Q de Fraunhofer (4 4861 À — 2 3286 A). Il observa que du sang artériel défibriné de bœuf, dilué avec de 400 à 600 volumes d'eau disüillée ou d’eau contenant un nullième de soude, montre, en couche de 10 mm. d'épaisseur, une bande d'absorption s'étendant de 2 404 uu à À 424 uu, c'est-à-dire occupant la plus grande parle de l’espace compris entre G et H. Avec du sang élendu seulement de 250 parties d'eau, la bande est beaucoup plus intense, mais elle conserve presque les mêmes limites, quoique ses bords ombrés se rapprochent de Get H Avec une solution à 1 p. 100, la lumière passe parfaitement de F à G:; la lumière est transmise avec difficulté de Là N (4 3819 À à 2 3580 A), le reste de l'ultra-violet étant completement absorbé, Une solution contenant 5 p. 100 de sang absorbe tout le spectre solaire, à l'exception d'une région entre F et G. mais plus près de F (2 460 uu à 2 490 un).

Gamgee dit qu'il a aussi employé, au cours de cette étude, de loxyhémoglobine purifiée par plusieurs recristallisalions ; mais il se borne à mentionner que les observations du spectre de ce corps peuvent être faites tout aussi bien avec du sang oxygéné dilué.

Outre l'oxyhémoglobine, Gamgee a examiné l'hémoglobine, la carboxyhémoglobine, lazotoxyhémoglobine, l'hémochromogène, lhématine, lhémine, la méthémoglobine et lhématoporphyrine. Notons, dès maintenant, que l'auteur affirme n'avoir pas pu constater de bande d'absorption, soit dans le violet, soit dans lultra-violet, en examinant des dilulions successives d'une solution alcaline d'hématine, Il ne s'est pas occupé de lhématine acide !,

violet Rays of the Spectrunt by Haemoglobin, its Compounds and Certain of its Derivatives. — Zeitschr. f. Biol, XXXIV, N. F. XVI, 909-529 (avec 3 planches spectrographiques), 1896.

! Dans sa « Croonian Lecture » : On certain Chemical and Physical Properties of Haemoglobin, Gamére est revenu sur le spectre

ultra-violet de l'hémoglobine, et a avancé que, d'après ses observations,

Entre le mémoire de d'Arsonval et celui de Gamgee, nous aurions pu mentionner la thèse de H. Grabet, parue en 1892, dans laquelle se trouvent d'intéressantes recherches sur les spectres d'absorption violets et ultra-violets de l'hémoglobine et de plusieurs de ses composés el dérivés. Ce travail à échappé à Gamgee : il semble étre passé inaperçu Jusqu'à ce que Rudolf Kobert? en ait rappelé l'existence à propos d'observations personnelles sur le même sujet qu'il publia en 1900. Cet auteur, après avoir dit que les spectrogrammes de Grabe manquent de netteté et ne sont pas à cause de cela convenablement utilisables, expose les résultats qu'il a obtenus en examinant l'absorption des rayons violets et ultra-violets par l'hémoglobine, loxyvhémoglobine, la carboxyhémoglobine, la méthémoglobine et la eyanméthémoglobine, Avant essayé, sans succès, de photographier ces spectres d'une façon satisfaisante *, il eut recours à la projection sur un écran de plalinocyanure de baryvum. Ce procédé avait déjà été employé par Gamgee, mais Kobert semble n'avoir pas eu connaissance du travail du savant anglais. Les résultats ainsi obtenus par Kobert manquent absolument de précision : ni la concentration, ni l'épaisseur des liqueurs

l'hémoglobine recristallisée ne présente pas de bande d'absorption correspondant soit à la raie 14, soit à la raie 17 du Cd. — Proceedings of the Royal Society. LXX, 79. 1902.

1 H, Grage: Untersuchungen des Blutfarbstoffes auf sein Absorptionsvermügen fur violette u. ultraviolette Strahlen. — Dissert. Dorpat, 1892. (35 pages et 1 planche).

? Ron. Koëerr: Beiträge zur Kenntnis der Methümoglobine. — Anhang : Ueber das Absorptionsvermügen des Blutfarbstoffes u. seiner Derivale f. violette u. ultraviolette Strahlen. — Pfläger’s Archiv, LXXXII, 626, 1900.

: « Beim Photographiren ging es uns aber ähalich wie Grabe, d. h. es ergaben sich schwer verständliche, vieldeutige Bilder. Jeh kam zu der Ueberzeugung, dass die Verfolgung der in Rede stehenden Frage mit Hülfe der Photographie eine recht mühsame ist, welche sich nur lohnen wird, falls man ein länger dauerndes Spezialstudium darauf verwendet, »

— (loc. cit. 628 et 629).

traversées par la lumière ne sont indiquées: aucune détermination n'est exprimée en longueurs d'onde, etc. Kobert, n'ayant pu réussir à obtenir de bonnes photographies, chargea de cette étude un de ses élèves, Reinert Hiller !, qui en fit le sujet de sa thèse en 1904, Hiller critique sévèrement les photographies de Grabe?, mais les siennes ne valent guère mieux et son travail est, dans l'ensemble, bien inférieur à celui de Grabe, Cette thèse ne mérite pas d'être analysée en détail. Le sujet est traité d’une façon tout à fait superficelle et avec un singulier défaut de rigueur: le tre luimême est déjà incorrect. Tel était l'état de la question quand j'ai abordé les recherches dont je vais exposer les résultats.

Il me faut seulement ajouter qu'alors que mes recherches étaient terminées, mais non encore publiées, L. Lewin, A. Miethe et E. Stenger présentèrent, à l'Académie des Sciences de Paris, une note sur la Détermination en longueurs d'onde des raies d'absorption photographiées des matières colorantes du sang”. Je communiquai peu après, à la Société de Biologie, les résultats que j'avais obtenus en examinant les spectres d’absorplion violets et ultra-violets de lhématine ! et de l’oxyhémoglobine *. Depuis, Lewin et ses collaborateurs ont publié un mémoire d'ensemble 5 où leurs recherches

! R. Hier : Die Absorptionsstreifen des Blutes und seiner Derivate im Ultraviolett. — Dissert., Rostock, 1904 (32 p. et 5 planches.)

* « Seine Phologramme (de Grabe) sind jedoch unbrauechbar, da sie eine Unmenge von Linien enthalten, welche mit dem Blute gar nichts zu thun haben. » — (loc. cit., 5).

* L. LewiN, À. Micrue et SrexGer. — C. R. Acad. des Sciences, CXLIII, 115, 1906.

! Duëré : Sur l'absorption des rayons violets et ultra-violets par l'hémaline. — C. R. Soc. de Biol., LXI 656, 1906.

® Duéré : Sur l'absorption des rayons violets et ultra-violets par l’oxyhémoglobine. — €. R. Soc. de Biol., LXI. 718. 1906.

51. Lewix, À Micrue u. E. Srexcer : Über die durch Photographie nachiveisbaren spektralen Eigenschaften der Blutfarbstoffe und anderer Farbstoffe des thierischen Kôrpers. — Pflüger's Archiv, CX VII, 80, 1907. (12 figures dans le texte et 1 planche.)

se trouvent exposées en détail. Ces auteurs ne citent pas mes notes parues près de six mois avant la publication de leur mémoire, Je reviendrai plus loin sur les travaux de ces savants, qui n’ont guère contribué, comme on le verra, à éclairer les questions que j'ai traitées.

25. Spectre de l’oxyhémoglobine cristallisée. — J'ai utilisé de l'oxyhémoglobine de cheval recristallisée deux fois, préparée au moven du procédé de Lapicque et Gilardoni !. Voici, empruntée presque textuellement à la note de ces auteurs, la description de ce procédé de préparation :

Du sang de cheval défibriné est filtré sur étamme el centrifugé: le sérum est décanté de facon à enlever la couche des globules blanes : les globules rouges, agités avec une solution

Fig. 45 — Oxvhémoglobine.

de Na CI à 3 p. 100, sont de nouveau centrifugés: le Hquide de lavage est décanté: les globules repris par environ deux volumes d’eau distillée se dissolvent : on centrifuge pour séparer les stromas : la solution limpide est additionnée d'alcool de facon à atteindre 25°, et on met à la glacière.

Lire première cristallisation, examinée au microscope, donne des cristaux bien nets et bien propres: ces cristaux, séparés des eaux mères par centrifugation, lavés avec l'alcool froid à 25°, redissous dans l'eau, sont remis à ceristalhser comme la première fois. La recristallisation est opérée encore une fois de la même manière. Les cristaux sont alors recueillis sur un filtre Schleicher et Schüll, essorés à la trompe, lavés à l'alcool à 25°, puis à l'eau glacée et dissous dans l'eau distllée.

1 [. Laricoure et H. Grrarvoxi: Sur la teneur en fer de l'hémo-

qglobine de cheval. C. R. Soc. de Biol., LIT, 459. 1900.

L'oxyhémoglobine ainsi obtenue contient de 0,29 à 0,30 de fer p. 100.

Pour titrer la liqueur, on en a prélevé 10 ce. qui furent évaporés dans le vide sec à la température ordinaire, puis desséchés à 1109 jusqu'à poids constant. On a utilisé pour l'examen spectrographique une solution décime contenant 02,774 d'oxyvhémoglobine par tre !.