L. Camus kt E. Gley, Soc. de Biol., 29 janvier

2. Il est possible pourtant que le sérum normal de hérisson possède une action antagoniste de l'action globulicide du sérum d'anguille, mais on ne péul le constater par de telles expériences.

le sérum d'animal immunisé augmente légèrement la résistance normale des globules.

Le sérum des animaux immunisés a donc acquis, par le fait de l'immunisation, une propriété qu'il ne possédait pas. Et ainsi cette expérience très simple fournit la preuve directe, in vitro, de la présence d'une antitoxine dans le sang d'animaux immunisés *.

Ces expériences montrent aussi, croyons-nous, qu'à côté des données purement physiques que met en jeu la méthode de Hamburger et des notions qu'on a pu tirer de son application, il importe d'accorder une très grande part aux actions d'ordre chimique dont l'importance même apparaît grâce à l'emploi de cette méthode. Dans nos expériences, en effet, ce sont des quantités évidemment infinitésimales de matière, et en elles-mêmes et par rapport au volume des solutions isotoniques, qui suffisent à modifier très profondément le globule, et des quantités aussi faibles d'une autre matière qui suffisent à empêcher la première de produire cette altération ^

Un certain nombre de faits rapprochant l'action du sérum d'anguille de celle des venins et des toxines microbiennes, nous avons été naturellement amenés à entreprendre avec quelquesunes de ces substances des recherches analogues à celles qui viennent d'être rapportées. Cette étude est en voie d'exécution.

1. Les expériences de C. Phisalix el G. Bertrand {Arcli. de Physiol., 5« série, t. yi, p. 611; 1894) et de J. Héricourt et Ch. Richet (C. R. de la Soe. de BioL, 23 janvier 1897, p. 74) ont montré que le sérum du sang d'un animal immunisé contre le venin de vipère ou contre le sérum d'anguille, injecté à un autre animal, protège celui-ci contre l'action de ces substances toxiques.

2. A moins qu'il ne s'agisse ici simplement d'une neutralisation chimique du sérum toxique par l'antitoxine.

SUR LE MÉCANISME DE L'IMMUNISATION CONTRE L'ACTION GLOBULIGIDE DU SÉRUM D'ANGUILLE*

Par L. CAMUS et E. GLEY

Nous avons montré précédemment(Comjo;e^ rendus, t. GXXVI, p. 428; 31 janvier 1898) quelle est la puissance de l'action destructive du sérum d'anguille sur les globules rouges du sang de diverses espèces animales, et que cette action est empêchée par une goutte de sérum sanguin d'un animal préalablement immunisé contre l'ichtyotoxique.

Cette dernière expérience, outre qu'elle démontre d'une manière très simple la présence d'une antitoxine dans le sang d'animaux immunisés, nous a paru posséder encore l'avantage de poser en termes clairs le problème de l'immunilé, du moins en ce qui concerne un de ses côtés actuellement les plus importants.

On est naturellement conduit, en effet, à se demander comment agit, dans notre expérience, le sérum de l'animal immunisé, pour empêcher m vitro la diffusion de l'hémoglobine des globules mis en contact avec une quantité donnée de sérum d'anguille. L'antitoxine se combine-t-elJe directement avec la substance globulicide, de manière à la neutraliser? Ce serait là un phénomène chimique, analogue à celui qu'Ehrlich admet

* C. R. de l'Acad. des Se, 8 août 1898, t. CXXVII, p. 330.

pour expliquer la suppression de l'action coagulante de lu ricine par le sérum d'animaux immunisés contre cette toxine végétale'. Ou bien est-ce la résistance de l'élément anatomique sur lequel agit le poison qui est augmentée par l'antitoxine? Le phénomène serait alors d'ordre histo-physiologique, plus ou moins analogue par exemple à l'action antisécrétoire de l'atropine, antagoniste de l'action sécrétoire de la pilocarpine.

Observons d'abord que les globules rouges du hérisson possèdent une résistance considérable à l'action destructive du sérum d'anguille, et que cependant le sérum de cet animal ne contient pas d'antitoxine.

En effet, nous avons vu que, si la substance toxique dont nous étudions l'action (la substance globulicide du sérum) perd tout son pouvoir, quand on la chauffe à 58° pendant 15 à 20 min., au contraire, la substance antitoxique qui existe dans le sérum des animaux immunisés n'est nullement altérée par ce chauffage; chauffons donc du sérum normal de hérisson, animal naturellement réfractaire au sérum d'anguille ; ce sérum chauffé n'est en aucune façon susceptible de s'opposer à l'effet de l'ichtyotoxique sur les globules rouges du lapin ou du cobaye. Ce n'est donc pas grâce à la présence dans leur sang d'une antitoxine pouvant neutraliser chimiquement la toxine introduite que les hérissons sont pourvus d'une immunité naturelle contre le sérum d'anguille ; mais leurs globules possèdent une résistance spécifique. Ajoutons que le sérum d'anguille chauffé ne manifeste non plus aucune propriété antiglobulicide. Ce ne peut donc être qu'en vertu de leurs propriétés physiologiques que les globules rouges de cet animal résistent à l'action si énergique de la substance globulicide qui se trouve dans son propre sang.

Il serait intéressant de rapprocher ces faits de la série de ceux qui ont montré que le sang d'animaux pourvus de l'immunité naturelle contre telle ou telle infection microbienne ne possède point de propriétés bactéricides.

Voilà, donc un mode d'immunité parfaitement défini, que l'on

1. P. Ehblich : Zur Kcnntniss der Anlitoxinwirkung (Forlschritte der Medic IS janvier 1897, p. 41).

pourrait appeler cytologique; il ne concerne pourtant que l'immunité naturelle. Les choses, en effet, paraissent se passer autrement dans le cas d'immunité acquise. Voici une expérience qui le prouve.

Sur un animal immunisé' (Lapin), on pratique une saignée. Le sang artériel est reçu dans de l'oxalate neutre de potasse, pour empêcher la coagulation, puis mis à centrifuger. Après seize heures, on décante le plasma; d'autre part, la bouillie globulaire est diluée dans une quantité équivalente d'une solution de chlorure de sodium à 0 gr. 66 p. 100 (dans laquelle les globules de Lapin ne laissent pas diffuser normalement leur hémoglobine). Toutes ces opérations doivent être réalisées aseptiquement. Comment vont se comporter ces globules et ce plasma vis-à-vis du sérum d'anguille? Or, les globules ne résistent pas plus à l'action destructive de ce sérum que les globules d'un animal témoin (non immunisé). Au contraire, le plasma contient la même substance antiglobulicide ' que nous retrouvons dans le sérum, quand on n'empêche pas la coagulation du sang.

Ainsi les globules d'animal immunisé n'ont acquis aucune propriété spécifique de la part de l'antitoxine qui circule cependant avec eux dans le sang, de la part de la substance spécifique qui les baigne. Si donc ils résistent à l'action de la toxine (substance globulicide du sérum d'anguille), quand ils y sont soumis, ce ne peut être que parce que l'antitoxine empêche cette action

1. Cet animal est immunisé par des injections répétées de sérum d'anguille chauffé. Nous avons, en effet, reconnu que le sérum chauffé, qui a perdu tout pouvoir globulicide, est susceptible néanmoins d'immuniser contre cette action globuhcide. Cette constatation offre un intérêt théorique réel, puisqu'elle fournit une preuve très simple, facile à donner in vitro, de ce fait qu'une antitoxine peut être produite dans l'organisme sans que celui-ci ait reçu la toxine spécifique correspondante; en d'autres termes, dans cette condition, il peut y avoir réalisation de l'état d'immunité active.

Nous nous occupons d'immuniser aussi des animaux par la toxine elle-même, comme d'ailleurs nous l'avons déjà fait [loc. cit.), pour l'étude d'un point qui nous semble très important : la question est de savoir si, à un moment donné, à une phase plus avancée de l'immunisation, il n'y aurait pas, outre la formation de substance antitoxique, modification des propriétés essentielles de divers éléments cellulaires (dans le cas dont il s'agit, augmentation de la résistance des globules rouges) : le processus aboutirait à une constitution des éléments anatomiques considérés analogue à celle que présentent les mêmes cellules chez les animaux pourvus de l'immunité natureUe. Une expérience de H.Kossel {Berl. klin. Woch., 14 février 1898) dépose déjà en faveur de cette supposition.

2. Dans ces expériences, il est vrai, le plasma contenait une moindre quantité d'antitoxine que le sérum des animaux immunisés par de petites doses croissantes de la toxine elle-même.

de s'exercer. Il semble bien, par suite, que le phénomène ne puisse s'expliquer que par l'action des deux substances l'une sur l'autre, par la neutralisation chimique de la toxine par l'antitoxine*.

C'est là un second mode d'immunité tout à fait différent du premier, immunité d'ordre chimique, tenant à l'action chimique réciproque de deux substances. Que l'on remarque enfin qu'il s'agit ici d'une immunité acquise. Celle-ci, dans le cas tout au moins du sérum d'anguille, pourrait dépendre conscquemment d'un tout autre mécanisme que l'immunité naturelle'.

1. On pourrait cependant encore supposer que les propriétés des globules rouges ne se trouvent modifiées qu'autant et tant qu'ils sont en contact avec l'antitoxine; à la vérité, contre cette hypothèse parlent les expériences qui établissent qu'il y a proportionnalité simple entre les quantités d'antitoxine et de toxine qui se neutralisent.

2. Dans un mémoire détaillé sur l'action du sérum d'anguille, qui paraîtra prochainement dans les Archives internationales de Pharmacodynamie ^on trouvera traitées quelques autres questions que nous avions posées dans notre première note.

RECHERCHES SUR L'ACTION PHYSIOLOGIQUE DU SÉRUM D'ANGUILLE. - CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE L'IMMUNITÉ NATURELLE ET ACQUISE*

Par

li. CAMUS, et E. GLEY,

hef adjoint dos travaux pratiques de physiologie Professeur agrégé de physiologie

à la Faculté do Médecine de Paris.

L — Historique.

C'est A. Mosso qui a découvert le fait si intéressant de la toxicité du sérum d'anguille*. Il a montré les effets généraux qui sont consécutifs aux injections sous-cutanées ou intra-veineuses de ce sérum sur des animaux divers, grenouille, pigeon, cobaye, lapin et surtout chien; à ce point de vue, il distingue les cas où les animaux meurent avec de fortes convulsions et ceux où ils présentent des accidents paralytiques ; mais il n'a pas recherché la cause de cette différence. Quant à la dose mortelle, elle est de 0,1 c. c. à 0,2 ce. par kilogramme pour le lapin et 0,2 c. c. à 0,3 c. c. pour le chien en injection intra-veineuse, cette dose amène la mort en quelques minutes ; si on emploie 0,4 c. c. ou un peu plus par kilogramme chez Je chien, et que l'on pratique la respiration artificielle, la mort n'en survient

* Arch. internat, de pharmacodynamie et de thérapie, 1898, t. V, p. i47-305. 1. A. Mosso : Un venin dans le sang des Murénides. Arch. ital. de Biol., t. X, p. 141-169, 1888.

pas moins et aussi rapidement. — Introduit dans l'estomac, le sérum d'anguille n'est pas toxique.

D'autre part, A. Mosso a étudié, d'une façon plus ou moins détaillée, plusieurs des troubles fonctionnels qui se produisent dans ces cas, troubles de la respiration, du cœur et de la circulation, du système nerveux. La respiration s'accélère d'abord, puis s'arrête; cet arrêt serait d'origine centrale ; la mort se produit donc par arrêt respiratoire; mais quand la dose est forte, le cœur cesse de battre en même temps que cessent les mouvements respiratoires. En ce qui concerne le cœur, tout se passe comme s'il y avait d'abord excitation des nerfs modérateurs, puis paralysie ; à un ralentissement du cœur succède en effet une accélération ; mais il doit y avoir en outre une action locale sur le cœur; cependant, le poison serait à peu près sans action sur le cœur de la grenouille; sur ce point, il est vrai, Mosso dit n'avoir fait que peu d'expériences. La pression sanguine intra-artérielle s'élève presque tout de suite après l'injection ; ce phénomène paraît tenir aux convulsions qui se produisent à ce moment, quand on injecte une forte dose; puis la pression s'abaisse. Le système nerveux est profondément atteint; l'excitabilité des nerfs moteurs, chez la grenouille, est très diminuée ; il en est de même de l'excitabilité propre des muscles; ces faits, à la vérité, n'ont pas été constatés avec le sérum de toutes les anguilles. Chez les animaux supérieurs, les accidents convulsifs ou paralytiques qui ne manquent jamais montrent bien l'action du poison sur le système nerveux.

Mosso a enfin très bien vu un autre fait fort intéressant, c'est que le sang des animaux intoxiqués devient incoagulable ; il s'était promis de l'étudier, mais il n'a pas, que nous sachions, réalisé ce projet. On sait combien dans ces dernières années s'est développée la question de l'action des substances anticoagulantes. Le fait découvert par Mosso a été soumis à une analyse soignée par Delezenne'. Cet expérimentateur a montré, entre autres choses, que le sérum d'anguille agit à la façon de

J^rPi l^"'-"'-^"^'" • du sérum d'anguille et des extraits d'oreanes sur la

coagulation du sang. Arch. de PhysioL, 5» série, t. IX, p. 646-660 1897

la propeptone ', en déterminant une réaction du foie qui aboutit à la formation dans cet organe d'une substance anticoagulante.

Telles sont les principales propriétés physiologiques connues du sérum d'anguille*.

Que sait-on de la substance à laquelle il doit ces propriétés? A. Mosso a déjà fait à ce sujet quelques constatations intéressantes : ce sérum, chauffé à 100°, perd sa saveur acre et en même temps sa toxicité; desséché dans le vide et redissous ensuite, il a conservé sa saveur et son pouvoir toxique ; le poison qu'il renferme ne se dissout pas dans l'alcool à 95".

Ces brèves indications chimiques ont été développées par Ugolino Mosso Ce dernier a constaté que le sérum d'anguille a toujours une réaction alcaline ; que sa densité varie entre 1,021 et 1,026; qu'il contient 7,20 à 7,43 p. 100 de matières solides et que là-dessus il y a 0,603 p. 100 de chlorure de sodium; que la température de 70° détruit l'ichtyotoxique (ce mot a été créé par A. Mosso) ; que les acides minéraux et organiques le détruisent aussi, et qu'il en est de même des alcalis, soude, potasse ou ammoniaque; si, après action de l'un quelconque de ces corps, on neutralise par un acide, le sérum ne récupère pas son activité ; les sels neutres sont au contraire sans effet. D'autre part, la substance toxique ne dialyse pas. La digestion pepsique

d. Ch. Contbjean : Nouvelles recherches sur l'influence des injections intravasculaires de peptone sur la coagulabilité du sang chez le chien. Arch. de Physiol., 5« série, t. VII, p. 245-251, 1895. — E. Gley et V. Pachon : Du rôle du foie dans l'action anticoagulante de la peptone. C. R. de l'Acad. des Se, 26 août 1895, p. 383; Influence des variations de la circulation lymphatique intrahépatique sur l'action anticoagulante de la peptone. Arch. de Physiol., 5« série, t. VII, p. 711-718, 1895 ; Influence de l'exirpation du foie sur l'action anticoagulante des injections intraveineuses de propeptone. Arch. de Physiol., 5« série, t. VIII, p. 715-723, 1896. — C. Delezenne : Formation d'une substance anticoagulante par circulation artificielle de peptone à travers le foie. Arch. de Physiol., 5e série VIII, p. 655-668,1896. — E. HÉDONetC. Delezenne : Effets des injections intra-vèineuses de peptone après l'extirpation du foie combinée à la fistule d'Eck. C. R. de la Soc. de Riol., 20 juin 1896, p. 633. — E. Gley : A propos de l'effet de la ligature des lymphatiques du foie sur l'action anticoagulante de la propeptone. C. JR. de la Soc. de Riol., 27 juin 1896, p. 663; De l'action anticoagulante et lymphagogue des injections intra-veineuses de propeptone après l'extirpation des intestins. I6ic/em, 12 décembre 1896, p. 1053.

2. Dans ces dernières années, il a paru plusieurs travaux sur l'immunisation contre les effets toxiques du sérum d'anguille. Nous en parlerons plus loin.

3 U Mosso • Recherches sur la nature du venin qui se trouve dans le sang de i'anguille. Arch. ital. de Riol., t. XII, p. 229-236, 1889.

ACTION PHYSIOLOGIQUE DES ICHTYOTOXINES 21 et la putréfaction la détruisent. Enfin, de quelques autres essais U Mosso conclut que l'ichtyotoxique n'est pas un ferment, mais une matière albuminoïde, et sans doute une senne.

C'est à un point de vue tout spécial que nous avions d'abord repris l'étude du sérum d'anguille. Au cours de recherches sur les variations que font subir à l'activité des ferments solubles diverses influences physiques et chimiques', il nous avait semblé que le sérum d'anguille subissait également quelquesunes de ces influences. Ces faits nous obligèrent à déterminer exactement la toxicité de ce sérum, injecté dans les veines, et les principaux phénomènes que l'on observe à la suite de ces injections; ces expériences, à leur tour, nous ont révélé l'action globulicide si intense de ce sérum ^ ; nous fûmes alors conduits à aborder l'étude du problème de l'immunité par un côté très particulier, par l'étude de l'immunité soit naturelle, soit acquise contre cette action si spéciale. — On trouvera dans les pages qui vont suivre l'exposé de toutes ces recherches.