INFLUENCE DO GLYCOCOLILATEZ DE CUIVRE SUR LA DIAPEDESE

| Dans le péritoine d'un premier cobaye, on injocte 25 Ccmo d'un bouillon stérille et dans le péritoîne d'un deuxieme ayant sensiblement même taille que le premier, on injecte aussi 25 cmd du même bouillon stérile, mais additionné aseptiquement de glycocollate de cuivre, de façon à réaliser une dilution D = 500 (par rapport à la solution mère donc équivalente à celle que réalise dans le plasma sanguin d'un adulte l'injection de 10 cm5 de solution mère,

Puis, dans les deux cas, on procède, six heures après les deux injections à la numération des leucocytes,

On trouve 2,700 leucocytes au mmS dans le ler cas (injecéton sans cuivre) et 5.200 dans le deuxième cas (injection avec

cuivre); la vitesse de diapédèse ne paraît donc pas sensiblement modifiée par le cuivre,

En est-11 de même de la phagocytose du staphylocoque en présence ou en l'absence de glycocollate de cuivre dans le plasma sanguin ?

Ici, les essais de mesure de l'indice opsonique que nous avons “menés selon la technique classique (5) ne nous ont oérmis ”

aucune conclusion nette, la phagocytose äu staghylocoque s'est montrée inopérante dans les deux cas, sans que nous ayions pu discerner la cause de l'échec éprouvé,

D - INFLUENCE DU GLYCOCOLLATE DE CUIVRE SUR LES ENZYMES . STAPHYTOCOCCIQUES. |

Nous n'avons, dans cos essais, examiné que les trois énzymes utilisés dans l'identification biochimique de la bactérie: Glucidase, Caséase et Tryptase,

Le réactif cuivrique gôêne-t-11 la sécrétion où atténue-t- 11 l'activité de l'enzyme secrétée? On n'a pas cherché à résoudre les deux questions séparément et à constater le résultat d'ensemble .

| Donc on s'est borné à vérifier ici, si la présence de glycocollate de cuivre modifie ou non l'activité de l'enzyme par rapport à ce qu'est cette activité en l'absence de ce réactif.

Ainsi l'on a recherché, si sous l'influence du cuivre aux concentrations indiquées, 11 y a eu : . et

Atténuation de l'action de la caséase sur le lait Atténuation de la glycolyse sur le glucose Atténuation de la liquéfaction de la gélatine,

SE L'exécution des essais sur la bactérie ayant végété en présence de cuivre a été réalisée comme suit : :

a) Influence de Glycocollate ds cuivre sur la tryptase Tiquéfiant la gélatine (eau peptonée HELENE) | Après avoir vérifié la réalité du pouvoir liquéfiant du staphylocoque mis en oeuvre, sur des tubes stériles de gélatine en culot (snsemencement par piqûre et observation pendant 10 jours puis abandonnés à la température du laboratoire. | £ On opère de même sur une autre série de tubes analogues, mais où Chaque tube contient du glycocollate de cuivre à des dilutions décroissantes qui étaient : (exprimées en solution mére): D = 800, D = 100, D = 20, D = 10, D = 6,6 et D=ss (témoin sans cuivre). | SEE

1 60 — TABLEAU IV Atténuation ar le Gl cocollate de cuivre de Ïia Tiquéfaction de la gélatine.

Dilution (en Cenore) Liquéfaction Repiquage après S mois

après © mois Culture D = 500 + totale + D = 100 | + totale + D = 20 + totale + D = 1o 0 + Dis 26,6 (e) 9 +

(témoin sans cuivre)D + totale

Dans tous les tubes, la 1iquéfastion était d'autant rs rapide que la dilution en cuivre était plus forte.

Même dans la dilution D = 10, correspondant à. une concentration en cuivre de 259 y/emS (23209), d'après la formule générale,

on trouve encore au bout de trois mois du staphylocoque survivant ILE la gélatine et capable de se multiplier après repiquase,

3 11 faut arriver à une concentration de eu = 580 y/cn5 pour qu'il disparaiîsse totalement et que la concentration bactéricide soit atteints. C'est donc par inhibition qu'agit in-vitro le glycocollate de cuivre sur la tryptase. Celle-ci est secrétée mais son activité est ralentie.

b) Influence du Glycocollate de cuivre sur RL coBpuADEe : es secrétions du Enpay ocoque doré sur le lait

Cette action n'est pas simple puisqu'elle peut résulter de l'influence de la caséase, de la tryptase, des acides formés sur le caséinosène du lait.

Cet essai a été mené de facon comparable à l'essai fait sur la tryptase, On a utilisé des tubes de lait stériles contenant du glycocollate de cuivre à concentrations variables ot ensemencés aseptiquement à raison de environ 100.000 germes par cm5 et culture à+37°C. Les tubes étaient examinés chaque jour :

Résultats :

Action du Glycocollate de Cuivre sur la caséase stapnylococcique faisant coasuler le lait

Dilution en Observation des tubes (coasulation) après :

D = oo + +/ + +/ + (témoin sans cuivre)

D = 500 0 + + + F° D = 100 0 0 0 + à D = 20 0 e) 0 0 + D = 10 (9 0 Q 0 0 Dés 76,6 (0) e) Q 0 (e)

Dans cette série aussi, le repiquage a donné des résultats positifs partout même après trois mois de culture à +57°0 et cela à toutes les concentrations en cuivre sauf quand on a atteint celle de 589 gamma de cuivre par çmS, Le

En résumé, pour ces diverses protidases secrétées par Staphylococcus auréus le cuivre ne peut inactiver leur sécrétion qu'ä des concentrations considérables (soit 580 microsramnes (gamma/par emo) alors que ses effets bactériostatiques sont déjà nets sur ce germe à des concentrations de 4 microsrammes par emo, comme les essais ultérieurs ont permis de le vérifier par la suite

c) Influence du Glycocallate de cuivre sur la glycocolyse rovoqué par le stapnylocoque doré -

Pour résoudre cette question, nous sommes partis d'un milieu glucosé à concentration connue en glucose et dans lsquel nous avons ajouté du glycocollate de cuivre à concentration croissante, | "

Le milieu a été ensemencé de facon à contenir 5 à 59090 germes par Cm ; ensuite il a été placé dans l'étuve à +579C et observé au bout de 24/48 heures er upres queiaues juurs u-ecuve À chaque tube d'essai correspondait un vemoin identique au poini de vue concentration et au point de vue durée d'étuvage, mais aane lequel on n'avait pas introduit ds germes,

Ce témoin était absolument nécessaire dans cette série d'essai ou l'étuvage de longue durée pouvait provoquer des évaporations irrégulières. De même aussi pendant le dosage du glucose.

dB —

En offet, ce dosage se fait par colorinétrie, L'apnréciation du temps de chauffe pendant la période de réduction et de refroidissement consécutif pour être exacte nécessite absolument la présence d'un témoin de concentration connue et ayant subi exactement les

mêmes traîitements, ainsi que l'expérience nous l'a montré,

Au départ, la teneur en glucose est la même dans tous les tubes des deux séries. Le dogare colorimétrique effectué d'après Folin-“ïu avec l'appareil de Dornon a donné dans les deux séries 1; 16 gr de pglucoss LIÉE avec une erreur relative ne dépassant pas Din o/.

Le milieu employé avait la composition suivante °/, : Peptons 2 grammes NaCl 0,581 Gdoose:z1,0 :." Eau - 190 cm Le pH final est de 7,5.

Voici les résultats observés pour chaque essai. Nous donnons d'abord dans une première ligne 1ss résultats pour le témoin non inoculé caractérisé par la lettre T et au-dessous pour le milieu inoculé., L'étuvage ayant eu lieu à +570C dans tous les cas et pendant une durée variable indiquée.

jé TABLEAU VI

Glycolyse due au staphylocoque "in vitro"

Glucose en sr, °/, après étuvage de:

y/cnS

1 T non limpide 1,28 inoculé .

1 inoculé trouble

: Ce premier essai sans cuivre introduit montre qu'apres 15 jours d'incubation, le slucose s'est concentré dans le tube témoin non inoculé, tandis que dans le tube inoculé il a baissé d'une façon régulière et nette, Au bout de 5 jours d'étuve cette ‘concentration s'est stabilisée dans les tubes malgré l'absence de cuivre c'est-à-dire que le staphylocoque n'a pas consommo la tota- 11té du glucose et que ce sont les produits acides de la glycolyse ques ont stoppé l'opération. ;

LRO

Après cet exemple, nous donnerons en tableau les essais suivants :