CHAPITRE. II

La technique que nous avons établie tant au point de vue du milieu de culture que de l'extraction éthérée, pour la recherche qualitative de l’indol, est simple et pourra facilement être répétée toujours dans les mêmes conditions.

Elle donnera toujours des résultats comparables, et les divergences entre les différents auteurs en seront atténuées.

Dans nos recherches, ce que nous avons voulu établir, ce n’est pas si un microbe pouvait produire de l'indo]l au bout de huit jours ou plus; nous nous sommes efforcé de démontrer que la réaction à la p.-diméthylaminobenzaldéhyde pouvait être utilisée pour établir un diagnostic sûr et rapide.

Nous avons eu pour but de mettre au point une méthode, de telle sorte qu'il ne soit plus permis de dire, comme dans de nombreux traités, que le signe différentiel des microbes, basé sur leur production d’indol, n’a qu’une valeur relative.

Nous pensons qu'on ne trouvera plus, comme Lembke, Vallet, Baginski, Rodet et Roux, Widal, Malvoz, Dunbar et d’autres, des colibacilles ne produisant pas d’indol. Il n’y a pas de raison pour qu'ils n’en fabri-

ri quent pas, et si l’indol n'apparait pas dans les cultures, on ne se trouve pas en présence de colibacilles, mais de paracoli. Il est permis de raisonner ainsi pour tous les microbes qui sont nettement classés. Nous nous sommes efforcé d’en étudier le plus possible.

Etude des microbes en particulier au point de vue de leur propriété indologène. — Pour rendre plus claire leur classification, nous n’avons pas adopté, comme on le fait généralement, l'ordre alphabétique, nous avons essayé de faire rentrer chaque microbe dans un cadre. Il ne faudrait pas s’attendre à voir dans ce cadre une liste complète; nous y avons placé seulement les microbes les plus connus.

Nous avons adopté une première division en deux grandes classes, comprenant, la première, les microbes pathogènes et la deuxième, les microbes non pathogènes, saprophytes ou autres. Il est bien évident qu’au point de vue de l'histoire naturelle proprement dite, on ne peut baser une classification sur la pathogénéité ou la non-pathogénéité d’une espèce; mais étant donné la difficulté de trouver des caractères nettement définis pour classer chaque microbe et l'importance pratique des caractères choisis, nous avons cru pouvoir adopter sans grand inconvénient la division indiquée. Nous avons ensuite subdivisé chaque classe en deux grandes familles : celle des Coccacées et celle des Bactériacées. À chacune d’elles correspondent quelques genres dont font partie un certain nombre d'espèces.

Etude des microbes pathogènes — :° Famille des Coccacées. — Dans cette famille, parmi les patho-

The gènes, nous ne trouvons guère que le genre Micrococcus. Nous avons commencé nos essais avec le s{aphylocoque pyogène. Plusieurs auteurs en distinguent trois espèces, mais la plupart, maintenant, ne voient entre les trois qu’une variation de pigment et pas même des races différentes, puisque l’on peut provoquer à volonté la production de tel.ou tel pigment en faisant varier les conditions d'existence.

Nous n'avons étudié qu’un s{aphylocoque, pensant que les conclusions appliquées à l’un conviendraient aux autres.

D'après Kitasato, il n'y a pas production d’indol. D'autres auteurs admettent qu'on en trouve un peu dans les cultures. Certains signalent la réaction de Salkowski avec le sf. aureus et le citreus. Tissier et Martelli (56), en particulier, admettent qu'on trouve un peu d’indol avec le sf. blanc. Le fait est cependant contesté.

Le 16 août, nous avons ensemencé, avec une culture récente de sfaphylocoque en bouillon, des tubes de solution de peptone qui poussèrent rapidement. Le 20 août, 1ls ne contenaient pas trace d'indol. Le 13 septembre non plus. Nous sommes done autorisé à conclure que le séaphylocoque ne donne pas d'indol. Du reste, Buard (25) est arrivé à la même conclusion en employant la vamilline comme réactif,

Au point de vue de l'unité du s{reptocoque pyogène, on rencontre des divergences beaucoup plus accentuées

56. Tissier et Marre, Recherches sur la putréfaction de la viande de boucherie (Ann. de VI. P., t. 16, p. 865, 1902).

que pour le sfaphylocoque. Quoi qu'il en soit, il semble réellement qu'il y ait non seulement des races différentes, mais aussi des parastreptocoques. Les auteurs admettent que les séreptocoques pyogènes ne donnent pas d’indol. N'ayant pas d'échantillons à notre disposition, nous n'avons pu faire de contrôle et nous admettons leurs conclusions.

Le preumocoque ne pousse pas facilement en eau peptonée. Le méningocoque ne donne pas d’indol, l'entérocoque non plus. Nous n’avons pu les étudier.

Le 27 mai, nous avons ensemencé avec du f{étragène du bouillon dont quelques gouttes étaient transportées le 30 dans des tubes d’eau peptonée. Le 2 juin, ils donnaient une réaction négative ; 1l en était de même le 6 juin. On remarquait un petit anneau rougeâtre disparaissant rapidement par légère agitation et ne pouvant être confondu avec la réaction de l’indol.

Le tétragène n’est donc pas indologène, au bout de dix jours du moins.

Le gonocoque ne pouvant être cultivé en eau peptonée, nous n'avons pu l’étudier. Il ne produirait pas d'indol.

Nous n'avons pas cultivé le micrococcus melitensis. D'après les auteurs, il ne fabrique pas d’indol.

A côté des microbes que nous venons de citer, on en classe un assez grand nombre d’autres plus ou moins connus et que nous avons négligés.

>° Famille des Bactériacées. — GENRE BACILLUS. — La famille des Bactériacées, beaucoup plus importante que la précédente, a été l’objet d’une étude plus approfondie. Le genre bacillus est celui qui

"6% retiendra le plus notre attention. Nous l'avons divisé en plusieurs groupes présentant entre eux des différences assez nettes. À la tête de chacun de ces groupes, nous avons placé un microbe type autour duquel gravitent les autres.

a) Groupe des acido-résistants. — Ilest admis généralement que le bacille tuberculeux n’est pas indologène. D'après Kühne, il l’est.

Nous l'avons étudié assez attentivement. Pour l'obtenir en cultures homogènes dans l'eau peptonée, il faut avoir soin d’ajouter à celle-ci 6 pour 100 de glycérine et d’agiter de temps en temps; mais la glycérine n'empêche-t-elle pas la production de l’indol, comme le font le glucose et le lactose ? Pour le vérifier, nous avons procédé aux essais suivants : nous avons ensemencé, le 12 juin, un coli en milieu glycériné; vingt-quatre heures après, l'extrait éthéré ne donnait qu'une faible réaction avec la p.-diméthylaminobenzaldéhyde; quarante-huit heures après, la réaction était encore très faible. Le 17 juin, nous ensemencions quatre tubes d’eau peptonée glycérinée avec du coli C et avec le même coli, deux tubes d'eau peptonée pure. Huit heures plus tard, nous constations que le milieu glycériné était plus louche que l’autre mais, par contre, il donnait, avec le réactif d'Ehrlich, une réaction à peine visible, tandis qu'avec l’eau peptonée simple, cette réaction était légère, mais nette. Elle aurait dû être plus intense. Cela provenait vraisemblablement d’une atténuation de la virulence du coli. En effet, la culture employée pour les ensemencements était restée exposée longtemps à l'action directe des rayons lumineux.

br

Le 19 juin, la réaction avec le coli en eau peptonée est toujours légère. Il en est de même le 20 et le 23. Ce Jour, nous ensemençons à nouveau quatre tubes d'eau peptonée glycérinée avec un coli d'une autre origine (coli du laborat.); le 26, il avait poussé en donnant une pellicule blanche assez épaisse et de forte consistance. Au-dessous, le liquide était très peu trouble. La réacton de l'indol était très nette.

Nous ensemençons avec le même coli deux tubes de peptone pure et deux tubes de peptone glycérinée. Après quatre heures, il ne donnent ni l’un ni l’autre la réaction de l’indol ; après huit heures, elle est positive et presque aussi nelte pour le milieu glycériné que pour l’autre.

Plus tard, avec une vieille culture de coli (d’une origine différente) en milieu glycériné, nous avons eu une réaction d'Ehrlich, qui n’était pas très intense. Au microscope, on voyait dans la culture plutôt la forme cocci que la forme bacille.

De ces essais, on peut conclure que si la glycérine entrave parfois la production de l’indol, elle ne l'empêche pas totalement.

Pendant que se poursuivaient ces expériences avec le colibacille, nous avons étudié le bacille tuberculeux.

Le 12 juin, nous avons ensemencé quatre tubes d'eau peptonée glycérinée avec le bacille de Koch ; le 19, il n'y avait pas encore production d’indol; le 23, non plus; on constatait un léger anneau jaune verdâtre Le 30 également. Il n’était pas dû à l’indol. Le 12 juillet, la réaction d'Erhlich était encore négative.

b) Groupe du bacille diphtérique. — D'après cer-

nn tains auteurs, le hacillus mallei ou bacille de la morve donne des traces d’indol; d’après presque tous, il n'en produit pas.

Le bacille de Léffler non plus. D'après plusieurs bactériologistes, la production est très tardive et irrégulière. Palmirski et Orlowski (57) en signalent la présence. Elle peut se manifester assez tard, parfois après plusieurs mois. Dans les vieilles cultures, on trouve la réaction du nitroso-indol.

Nous avons expérimenté toute une série de microbes de la diphtérie. Ils ont très mal poussé : quatre jours après l’ensemencement, les tubes sont clairs et, en les agitant, on aperçoit qu’un très léger dépôt s’est produit, La réaction d'Ehrlich est négative. Dix jours après, les cultures ne sont pas plus luxuriantes, la réaction est encore négative.

En somme, étant donné l’état de nos cultures que nous n'avons pu recommencer, 1] nous est impossible de conclure fermement à la non production d’indol.

D'après Steensma (54), le bac. de la pseudo diphtérie fabriquerait une substance qui donne, avec le réactif d'Ehrlich,une coloration rappelant celle que l’on obtient avec l'indol. D’autres auteurs admettent que ces bacilles sont réellement indologènes. Ne les ayant pas à notre disposition, nous n'avons pu les étudier.

A côté de ces microbes, se placent le bacille de la diphtérie des pigeons et le bacille de la diphtérie aviaire proprement dite. Ni l’un, ni l’autre ne sont indolo-

57. Pazmmski et OrLowsxt, Ueber die Indolreaktion in Diphteriebouillonkulturen {Cent. f. Bakt., 17, 358, 1895)

— A9 — gènes d’après quelques auteurs. D'après Steensma (54), le bacille de la diphtérie des colombes donne de l’indol. Plusieurs bactériologistes obtiennent la réaction de Salkowski avec le hacille de la diphtérie aviaire.

c) Groupe du coli bacille. — Nous allons étudier maintenant un groupe, dont deux genres, le coli bacille et le bacille d'Eberth, ont été l'objet de nombreuses et vives discussions. Actuellement, la plupart des bactériologistes admettent que la manifestation fonctionnelle du coli est réellement spécifique et ne se rencontre pas chez le bacille d'Eberth, même dans de très vieilles cultures. La question présentant un grand intérêt, nous l’avons étudiée particulièrement.

Nous avons tout d’abord dressé une liste bibliographique, concernant les derniers travaux relatifs à la production d'indol par le coli. Nous la résumons succinctement.

Les cultures en eau peptonée (pept. de Witte, pept. Defresne), de 11 échantillons dont 9 extraits de selles de nouveau-nés, examinés par Buard (25) ont donné avec le réactif à la vanilline un résultat positif.

Trois échantillons examinés par Steensma(54) donnaient la réaction d'Ehrhich.

Nonotte et Demanche (45) indiquent qu'en chauffant la culture avec le nitrite de soude et de l’acide, on a rapidement une réaction positive (voir critique de ce procédé, p. 68 et suiv.), et que la méthode ne présente jamais d’insuccès pour la différenciation du coli et de l'Eberth.

Bühme (10)a examiné quatre échantillons retirés des selles de nourrissons, trois échantillons rencontrés

Re dans « différents états pathologiques de l’homme », neuf échantillons extraits de matières fécales de huit espèces animales, tous ont donné une réaction positive avec le réactif d'Ehrlich. Il est vrai que quatre échantillons « trouvés dans des états pathologiques de l'homme » et un autre extrait du contenu intestinal d’une guenon n'ont pas fabriqué d'indol.

Des échantillons extraits de l’eau ou de matières fécales par Escallon et Sicre (14) ont donné une réaction positive avec le furfurol.

Péré (38) a eu production d’indol avec un coli retiré de ses excréments, avec un autre extrait des eaux d'Alger, avec un troisième isolé d’une urine de dysentérique du Tonkin et un quatrième isolé d’une urine de typhoïdique.

Nous même, nous avons retiré des colihacilles de matières fécales d'homme : cohù H, et coh EH, : de chien, coli C et coli CG», de cobaye : coli Cb;, de poule: col P, de lapin : coli L, de pigeon : coli Pig. Nous avons idenüfié d'une façon certaine les colis H;, H, C;, C2 et P. Tous ont donné la réaction de l'indol par le procédé que nous avons signalé.

Nous en avons tiré la conclusion que nous avons indiquée précédemment, à savoir, que la fonction productrice de l'indol chez le coli est réellement spécifique, à condition, cependant, de faire la culture en eau peptonée simple ou additionnée de sels, mais jamais de sucres.

De nombreux auteurs, el en particulier Buard (15), Nonotte et Demanche (45), Escallon et Sicre (14), Bôühme{10) ont démontré que le bacille d'Eberth ne donnait pas d'indol. Crossonini (11) a rencontré un bacille

EX VE typhique qui donnait une réaction positive avec le réactif de Salkowski, et négative avec le réactif d’Ehr- Lich. Le distillat de la culture ne donnait plus la réaction de Salkowski, d'où il conclut qu'il s'agissait de scatol et non d'indol. Un échantillon étudié par nous n’a pas donné de réaction d'Ehrlich positive après un mois.

Il était intéressant de rechercher si, parmi les bacilles dits paratyphiques, quelques espèces ne devenaient pas indologènes au bout d’un certain temps. Nous avons alors ensemencé le 24 mai toute une série de tubes avec les paraltyphiques Aertrych, Conradi, Drigalski B, Rennes, Kurth B, Fœcalis alcaligenes, Enteridis de Gärtner, Schottmüller, Brion À, Paris À.

Le 6 juin, ils ne donnaient pas la réaction caractéristique avec la p.-diméthylaminobenzaldéhyde. Le 20, elle n’était toujours pas positive. Le 16 août non plus, c’est-à-dire deux mois et demi après l’ensemencement.

Les six paratyphiques étudiés ne donnent pas d'indol. Bôhme (10) est arrivé à la même conclusion avec quatre échantillons de paratyphiques B, un paralyphique À et un Fœcalis alcaligenes. Nonotte et Demanche (58) n’ont pas trouvé d’indol au bout de huit jours avec les paratyphiques À et B, le bacille de Gärtner el le bactlle de l’angiocholite. De même Escallon et Sicre (14) ne trouvent pas d'indol avec le paratyphique A (Brion- Kayser), le paratyphique B (Schotimüller), le bacille de Gärtner et le bacille de Danysz.

58. Noxorre et Demaxcur, Recherche de l’indol dans les cultures microbiennes (C. R. Soc. Biol., p. 494, 1908),