C. — Technique

Voici les différentes méthodes que j'ai employées pour la fixation des pièces histologiques et embryologiques et la coloration des coupes.

1. Embryologie. — Les œufs non éclos et les tous jeunes alevins ont été fixés en entier suivant Les quatre méthodes :

1° Liquide de Kleinenberg ;

2% Liquide de Mayer;

3° Bouin alcoolique ;

4 Formol neutre 20 0/0.

Pour les premiers stades embryonnaires, le Kleinenberg m'a donné d'excellents résullats. Je l'ai préparé suivant la formule indiquée par Caevey (20) (Thèse, p. 148). Mais pour les alevins, à partir de l’éclosion, j'ai remarqué que ce fixateur durcit les

pièces et les rend friables et cassantes pour les coupes.

Le liquide de Mayer m'a donné des résultats très mégaux.

Le formol à 20 0/0 et le Bouin alcoolique de Duboscq-Brasil se sont montrés d’excellents fixateurs.

‘ 2. Histologie. — J'ai HER un nombre de fixateurs relativement peu élevé, car j'avais surtout à faire de la topographie. | | = Le Bouin-Duboscq-Brasil, le Bouin-Hollande et le Era)

salé ont toujours été DITES. avec succès:

En ce qui concerne le Bouin-Hollande, je l'ai employé en Y apportant une Isere modification.

J'ai cherché s’il n’était pas possible de faire, pour ce rs ce qui a été fait pour le Bouin ordinairé transformé par Dusosco et Brasiz en Bouin alcoolique par addition d’alcool à 80°. -

Après divers essais, je me suis arrêté à la méthode suivante qui m’a donné des résultats très satisfaisants. |

Je prépare Le Bouin-Hollande suivant la formule classique :

Fau-distitiée serre RMS RO" Re / Acétate neutre de cuivre . . . 2 gr. 50 Merde :pierique, "Sur OnEOnURrE À gr.

Formal40r 0e CRIE RRAETe 10 eme Acide acétique cristallisable . . 1 cm° 5

Au moment de l'emploi, j at 1/3 d'alcool à 95. Il est même possible de faire le mélange quelque PAU auparavant, sans inconvénient.

Les pièces sont fixées pendant le temps normal, Fr suivant la nature du matériel.

Elles sont ensuite passées directement dans l'alcool à 95°. puis 100, etc.

Ce procédé a l’avantage, pour les pièces délicates, de diminuer le nombre de manipulations et évite la longue et fastidieuse série des milieux intermédiaires : glycérine, alcool éthylique, chloroforme, ligroïne.

Il ne se produit aucun précipité. De plus, les pièces ne sont nullement cassantes, ce qui m'est arrivé assez souvent avec l'emploi de Bouin-Duboseq-Brasil.

Enfin, le grand avantage de ce fixateur est son pouvoir péné-.

ORGANE SENSORIEL LATÉRAL DES TÉLÉOSTÉENS a

trant. J'ai fixé des épidermes de Téléostéens adultes avec plein succès.

séd'ai également employé ce mélange pour la fixation de cer- tains Insectes à chitine très épaisse : des Carausius adultes. J'ai obtenu dans ce cas des résultats excellents.

Des Protozoaires, matériel très fragile, ont été fixés par ce procédé sans aucune altération,

La légère teinte verte des pièces, consécutive à de ce fixateur disparait. très facilement sur les coupes par un lavage rapide dans le carbonate de lithine à 5 0/0 et ne gêne nullement les colorations. |

Méthodes d'inclusion. — Siles coupes d’embryons et d'alevins de Truite n’offrent aucune difficulté pour l'inclusion, il n’en est plus de même des fragments d'épiderme de Téléostéens et. Sélaciens adultes. Après avoir fait une série d’essais peu satisfaisants avec le collodion, j’ai employé la méthode de double inclusion celloïdine-paraffine, suivant la technique do par à Mizcor dans sa Thèse (51).

J'ai remarqué que l'imprégnation à la celloïdine est plus complète lorsqu'on se sert d’une solution de celloïdine très fluide et qu’on laisse se concentrer la solution dans laquelle on à placé la pièce à inclure, pendant quelques instants (1/4 d'heure par exemple) au-dessus d’une étuve à 55°. La celloïdine pénètre vite, s’épaissit un peu et de ce fait facilite Pinclusion à la paralline.

Je suis arrivé à couper par ce procédé des écailles de Téléostéens adultes avec une extrême facilité.

Méthodes de coloration. — Hémalun-éosine. — Glychémalunéosine. — Méthode de Prenant. — Méthode de Masson. — Mallory. — Bleu Polychrome de Unna,

La méthode de Prenant m’a donné particulièrement de bons résultats, surtout lorsque je prenais soin de commencer la coloration par l’éosine et que je faisais passer, à nouveau, la coupe dans ce colorant après la différenciation de l’hématoxyline.

Pour l'étude des terminaisons nerveuses, j'ai essayé, mais sans succès, les méthodes de Cajal, Golgi. Mes essais ont porté sur des Poissons adultes et c’est sans doute la raison de cet échec. |

Par contre, l'hématoxyline et le Glychémalun m'ont permis de

mettre en évidence d’une façon très nette les fibres nerveuses, ds

notamment chez l’ Épinoche et l’embryon de Truite.