ANNALES DES ÉPIPHYTIES. EU

tique à la concentration de 3.10-7. Ils ont proliféré régulièrement en continuant à produire des amas de racines analogues à ceux qui constituaient le nodule initial. Nous avons ensuite supprimé l’hétéroauxine du milieu et la souche a continué à proliférer de la même façon. En ne repiquant que les renflements qui se forment à la base de certaines de ces racines nous avons pu isoler une souche de tissus capable de proliférer d’une manière diffuse en produisant beaucoup moins d'organes, mais ces tissus étaient excessivement mous et fragiles et il nous a paru difficile de les utiliser pour les expériences de pathologie que nous désirions entreprendre; c’est pourquoi après deux ans de culture,

NA) ALORS RON STATS NORRIS NET MARAIS OS SN 2 | \SÉÉRGECERRR RRSST (0 & A EAN Q; 1 Sen 272 EU DÉS () o ES TJ LS BC EU Eee DE RTORESEU RCE ATOS SLA | RATS NEO RER RE CA RGO 77 EC EEE (| 7) PSS - D eo

Fic. 26. — Nodule cribrovasculaire formé par une culture de tissus d’Antirrhinum majus.

H est constitué par une zone génératrice semi-circulaire qui produit du côté de sa face interne du parenchyme vasculaire et de l’autre côté du parenchyme libérien.

nous avons abandonné cette souche pour tenter d’en isoler une nouvelle, formée de tissus plus compacts.

b. Souche non rhizogène. — 1. Caractères physiologiques. — Pour y parvenir, nous avons repiqué des fragments de cals primitifs sur des milieux renfermant des doses variées d’hétéroauxine et diverses vitamines ; pyridoxine, biotine, méso-inositol et acide d-pantothénique. La croissance la plus active a été obtenue en combinant du méso-inositol à la concentration de 10-#, de la biotine à la concentrat'on de 10-8, du pantothénate de calcium à la concentration de 10-5 et de l’acide naphtyle acétique à la concentration de 5.107. Nous ne sommes toutefois pas assurés que ces vitamines soient réellement indispensables à la prolifération indéfinie des tissus ; nous pensons plutôt qu’elles ont simplement une action stimulante qui favorise les premiers repiquages. Sur ce milieu, certains fragments formaient des amas très volumineux de tissus fermes et compacts. Mais la plupart cessaient de se développer et se nécrosaient rapidement. Nous

avons observé au cours des premiers passages une mortalité considérable atteignant 60 à 75 p. 100 des cultures, puis après cinq ou six repiquages certaines cultures se sont considérablement modifiées ; elles sont devenues légèrement translucides, ont perdu complètement la faculté de produire des racines, et, au lieu d’être formées de tissus charnus, ont pris la forme d’une mince croûte bombée en forme de cloche et ne reposant sur la gélose que par ses bords (pl. XIL, fig. B). En repiquant les tissus qui s'étaient ainsi modifiés, nous avons constaté que leur croissance devenait très régulière et que la mortalité cessait presque entièrement.

Nous avons alors pu faire une étude quantitative de l’action de l’hétéroauxine en repiquant ces tissus sur des milieux de concentrations variées. Nous avons ainsi constaté qu'ils étaient devenus capables de se développer sans substance de croissance aussi activement que lorsqu'on leur fournissait de l’hétéroauxine. Ils avaient donc subi le phénomène d’accoutumance. Ainsi les tissus normaux de Mauve prolifèrent très difficilement en culture. Î paraît impossible de les maintenir en survie indéfinie. Les tissus accoutumés au contraire se développent intensément. Nous en avons isolé une souche qui prolifère actuellement depuis deux ans (juin 1948) et a subi 19 repiquages.

2. Structure anatomique. — Ces tissus accoutumés sont composés d’un grand nombre d'îlots méristématiques accolés les uns aux autres, disposés absolument au hasard, dans une masse parenchymateuse et proliférant de façon indépendante. Certaines cellules âgées se lignifient et s’entourent d’une zone génératrice circulaire produisant à l'extérieur des éléments libériens; il se forme ainsi de nombreux nodules cribrovasculaires répartis dans toute la culture. En outre, il se forme fréquemment dans ce parenchyme des ébauches de racines qui n’évoluent pas et ne parviennent pas à se développer au dehors. Cette disposition anarchique contraste avec la structure régulière des cals primitifs qui contiennent de longues zones génératrices, produisant d’épaisses assises de tissu ligneux bien organisé comme dans une tige normale.

3. Acruga. — Les tissus des deux Althea : Althea thuringiaca L. et Althea offiainas L. que nous avons entrepris de cultiver se comporte in vitro de manière assez différente. Les fragments de tige de la première espèce produisent des cals volumineux réguliers peu chlorophylliens; ces cals repiqués en présence d’acide naphtyle acétique à des concentrations comprises entre 3 et 5.107 prolifèrent de façon irrégulière au cours des premiers passages, puis, peu à peu, la croissance s’améliore et au bout d’un an devient beaucoup plus homogène. Ces cultures comme celles de Mauve sont formées de nodules proliférant indépendamment et ayant une tendance marquée à se détacher les uns des autres et, après les premiers repiquages, elles ne produisent plus de racines. Nous avons ainsi isolé une souche qui prolifère depuis trois ans et a subi 18 repiquages. Les tissus produits par la Guimauve officinale sont, au contraire, excessivement compacts et peu mamelonnés, comme s'ils étaient recouverts d’un périderme régulier; ils prolifèrent très lentement. La concentration optimum du milieu en acide indole acétique paraît être de 5-10-7 et, même dans ce cas, l'accroissement de fragments de 100 milligrammes est excessivement faible et ne dépasse pas 200 à 300 milligrammes, en deux mois. Ces tissus gardent leur structure compacte et se différencient profondément. I se forme à l’intérieur du parenchyme des nodules cribrovasculaires de grande dimension, très coriaces et difficiles à sectionner avec un scalpel. Ces tissus ne perdent jamais la faculté d'émettre des racines. mais ces racines se développent peu: elles se forment surtout à l'air libre, et ne s’enfoncent pas profondément dans la gélose,

comme c’est le cas pour les autres espèces. Nous avons isolé une souche de tissus de chacune de ces deux plantes qui prolifèrent depuis trois ans et ont subi 18 repiquages.

4. Nicorrana Tasacum L. var. « White Burley». — La culture de tissus de plantes atteintes de maladies à virus présente un très grand intérêt; sa réalisation doit en effet permettre de conserver facilement au laboratoire des souches actives dont l'entretien sur des plantes entières est toujours délicat en raison des contaminations accidentelles. D'autre part les cultures de tissus qui sont très homogènes, facilement maniables et se développent en milieu.entièrement synthétique, constituent un matériel de choix pour l'étude physiologique de ces maladies. Or les virus les mieux connus actuellement sont ceux qui attaquent certaines Solanées : Virus de la Mosaïque du Tabac, Virus X et Virus Ÿ de la Pomme de terre, Virus du Bushy stunt de la Tomate. La plupart se transmettent facilement au Tabac. Nous avons donc essayé de réaliser la culture indéfinie des tissus de cette plante afin d’obtenir &n witro le développement des . Virus susceptibles de les infecter.

Nous avons obtenu des cultures de deux types de tissus : tissu normal et tissu accoutumé que nous allons décrire successivement :

a. Tissus normaux. — 1. Caractères physiologiques. — [est très difficile d'obtenir des cultures de tissus normaux de Tabac. Lorsqu'on repique des fragments de cals initiaux formés sur des fragments de tige sur des milieux dépourvus d’hétéroauxine ou contenant celle-ci à des doses inférieures à 107, on constate que leur croissance s’arrête. [ls demeurent vivants pendant plusieurs mois en proliférant excessivement lentement, puis finissent par se nécroser. Si, au contraire, le milieu renferme de l'acide naphtyle acétique à des concentrations supérieures à 1077, les tissus continuent à se développer, mais on constate qu’au lieu de demeurer fermes et compacts et de couleur blanc-jaunâtre, 1ls se modifient lentement, deviennent mous et translucides, se décolorent ou prennent une teinte brunâtre. Cette transformation est toutefois lente, et si le milieu ne contient que de faibles doses d’hétéroauxine, c’est-à-dire de 0,1 à 0,3 mgr. par litre (1077 à 3.10-?), certaines parties du cal ne subissent pas cette modification et demeurent constituées de tissus fermes et compacts qui S’accroissent très lentement. En repiquant les minuscules fragments qui échappent à la transformation que nous venons de décrire, en présence d'acide naphtyle acétique à des concentrations voisines de 10-7, on parvient à les maintenir vivants pendant plus d’un an. Leur croissance est toutefois très lente et la mortalité est après chaque repiquage très élevée. Si bien que la plupart des souches finissent par périr. |

2. Structure anatomique. — L'examen microscopique de ces tissus montre qu'ils sont constitués par des régions formées d’un parenchyme compact à cellules régulières renfermant de nombreux nodules cribrovasculaires analogues à ceux que l’on rencontre dans le cas primitif. À la périphérie de ce parenchyme on rencontre des amas volumineux de cellules transformées en éléments géants qui correspondent aux parties brunes de la colonie.

b. Tissus accoutumés. — 1. Caractères physiologiques. — Après un an de culture en présence d'acide naphtyle acétique à la concentration de 10-7 nous avons constaté À plusieurs reprises que la croissance des colonies s’améliorait brusquement.

# Elles s’accroissaient beaucoup plus rapidement et cessaient de produire des cellules géantes. À partir de ce moment le développement devenait beaucoup plus rapide et plus régulier, et se poursuivait normalement, même lorsqu'on supprimait l'acide naphtyle