HISTORIQUE

L'histoire de la culture des tissus végétaux a déjà été exposée maintes fois. À trois reprises, Wurre a résumé les résultats acquis par les différents chercheurs qui ont étudié ce problème (73, 76, 78). Frepcer a publié, en 1938, un article traitant également ce sujet (14) et Gaurwener (16, 17, 20) dans plusieurs mémoires, a été amené à exposer de la même manière les étapes successives qui ont abouti à la réalisation de la culture des tissus végétaux. Mais, depuis quelques années, les progrès réalisés dans ce domaine ont été très rapides, si bien qu’il nous a paru utile-de faire une nouvelle mise au point historique en insistant seulement sur les travaux récents. Nous ne nous proposons pas d’énumérer les nombreux mémoires consacrés à la culture des tissus végétaux, mais plutôt d'indiquer les principales tentatives dont elle a fait l’objet en nous étendant plus spécialement sur l’état qu’elle avait atteint au. moment où nous avons commencé nos recherches.

C'est Hasercanor (30) qui, dès 1898, eut l'intuition du grand intérêt que pourrait présenter l'étude du développement de tissus végétaux hors de l’organisme. Dès cette époque, il essaya de réaliser des cultures de tissus. Pour cela, il isola de très petits fragments de tissus provenant par exemple de parenchyme palissadique de Lamium purpureum, de moelle d’Æichhorma crassipes, d’épidermes de Fuschia, d’Ornithogalum, etc., et il les transporta dans des milieux nutritifs variés où ils survécurent un certain temps, mais sans jamais se multiplier. Haserranpr ne pouvant comprendre les raisons de ces échecs, se découragea, et ce problème fut abandonné pendant de longues années. C’est seulement en 1917 que de nouveaux eflorts furent tentés pour le résoudre. Boscrorr-Prersser (6) essaya de cultiver des cellules isolées obtenues en dilacérant des fragments de tissus dans une solution nutritive. Il observa ainsi une survie considérable de certaines cellules, mais ne parvint pas à provoquer leur multiplication. L'année suivante, Lamrrecur (39) s'inspirant des premiers travaux d’Hasercannr, essaya de cultiver des fragments de feuilles de Crassulacées. Mais, au lieu de les transporter dans des milieux artificiels, 11 les transplantait à la surface de blessures provoquées sur des feuilles adhérant encore à la plante, de manière que les cellules vivantes puissent ainsi servir de substratum. LawprecaT ne parvint pas mieux que ses prédécesseurs à faire proliférer ses explantats. En 1919, Knupson (34) tenta sans plus de succès de cultiver les cellules qui se séparent spontanément de la coiffe des racines; en 1921, Hasenzanor (31) fit une nouvelle tentative en utilisant des fragments de tissus beaucoup plus volumineux qu’au cours de ses premiers essais, mais sans obtenir de meilleurs résultats que dans ses premières expériences.

C’est alors que Korre (35) et Rosmns (63) orientèrent le problème de la culture x vitro dans une voie nouvelle. Ils tentèrent de cultiver des méristèmes radiculaires et leurs

recherches furent rapidement couronnées de succès. Ils obtinrent pour la première fois la multiplication des cellules de ces méristèmes, et mirent au point une technique qui devait permettre à Ware (74) de réaliser en 1934 la culture indéfinie des racines de

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Tomate et de quelques autres Dicotylédones. Ces méristèmes radiculaires cultivés in vitro se transformaient toujours en racines. Ils étaient donc le point de départ de cultures d'organes ayant une structure bien définie et non de véritables cultures de tissus. Malgré ces brillants résultats, le problème demeurait donc entier. Aussi, tandis que beaucoup de chercheurs suivaient la voie inaugurée par Rossms, d’autres, tels que Bôüncer (7) [1926], Czecn (13) [1926], Urrnra (72) [1928], Scumucxer (65) [1929], Prerrer (61) [1931], etc., continuaient à subir l'influence d'Hagerzanpr, et s’eflorçaient de réaliser de véritables cultures de tissus en isolant des fragments de parenchymes, et en les plaçant dans des milieux variés. Comme les précédentes, leurs tentatives furent entièrement négatives. La plupart des botanistes se rallièrent alors aux idées de Küsrer (38), qui déclarait le problème insoluble, et, en 1931, Cracrun (12) résumait l'opinion générale en écrivant : « Tous les auteurs paraissent d'accord sur le fait qu'il est impossible d'obtenir de véritables cultures de tissus ».

Cependant, ces conclusions pessimistes ne parvenaient pas à convaincre tous les chercheurs, et Gauragrer fut le premier à comprendre la raison de ces échecs répétés. La plupart des tentatives réalisées jusque là avaient en effet porté sur des tissus très différenciés, par exemple des parenchymes ou des épidermes composés de cellules incapables de se diviser, même s’ils demeurent sur la plante entière, tandis que d’autres mettaient en culture des méristèmes primaires qui sont incapables de proliférer d’une manière désordonnée, et reforment constamment des organes suivant un processus immuable. C’est pourquoi il abandonna la culture de ces points végétatifs, et s’adressa aux méristèmes secondaires des Dicotylédones, dont les cellules sont capables d’une prolifération désordonnée qui se manifeste lorsqu'on blesse les tiges, par la formation de cals souvent volumineux. En plaçant des fragments de tissus cambial de différents arbres, Érable, Saule, Orme, Peuplier, etc., sur des tampons de coton imprégnés de la solution de Knor glucosée, ou en les piquant dans un milieu gélosé ayant la même constitution générale Gaurerer (15) [1934] obtint une prolifération intense ; les fragments isolés produisaient en quelques semaines des masses volumineuses de tissus parenchymateux et il réalisa pour la première fois de véritables cultures de tissus végétaux.

Gauruerer chercha à prolonger la survie de ses cultures par des repiquages, mais il ne put les maintenir plus de dix-huit mois. Les milieux qu'il utilisait alors étaient impropres à assurer la survie indéfinie de cette catégorie de tissus. Il fallut encore plus de quatre ans de recherches pour obtenir ce résultat, qui fut annoncé presque simultanément par Wnire (77) en décembre 1938, par Gavruerer (18) en janvier 1939 et par Nosécourr (59) en février 1939. Pour y parvenir, Wurre s'était adressé à un type de tissu très particulier. Il mettait en culture des tumeurs qui se forment spontanément sur les tiges d’un hybride de Tabac obtenu par Kosrorr (Wicotiana lanpsdorffa X N. plauca). Le milieu de culture qu'il utilisait était une solution minérale rendue à demi solide par de la gélose, et contenant en outre, du saccharose et de l'extrait de levure. Gaurnerer et Nosécourr parvinrent à cultiver non pas un tissu pathologique, mais le tissu normal .de la racine de carotte sur un milieu entièrement synthétique renfermant des sels minéraux, du glucose et des substances de croissance. Ces substances de croissance bien définies étaient l’Aneurine, la Cystéine et l’acide Indole & acétique.

Gaurerer (19) étendit alors ces premiers résultats à des organes charnus appartenant à d’autres végétaux tels que le rhizome de Topinambour, la racine d’Endive, de Scorsonère et de Chou-navet, et, en 1941, il parvint à en isoler des souches de tissus qui prolifèrent encore. Waire (80, 81) de son côté, étudia d’autres tissus de tumeurs, et

il put cultiver les tissus de galles provoquées par le Phytomonas tumefaciens sur des tiges de Soleil et de Pervenche de Madagascar.

Ainsi, en 1943, au moment où nous avons commencé nos recherches, on était parvenu à cultiver des tissus de diverses tumeurs, et ceux de quelques plantes produisant des organes charnus. On ignorait encore si les tissus normaux de la plupart des végétaux étaent susceptibles de proliférer en vitro. C’est ainsi que les tissus d’espèces ligneuses comme les arbres n'avaient fait l’objet que de travaux incomplets. Les tissus des lianes dont l’élongation si rapide des tiges témoigne d’une activité intense n’avaient pas été étudiés, de même que ceux des espèces herbacées qui produisent des tiges annuelles. Enfin, tous ces essais n'avaient porté que sur des Dicotylédones.

Pour effectuer la culture des parasites obligatoires que nous nous proposions d’entreprendre, il nous a fallu tout d’abord réaliser des cultures de tissus de ces différentes catégories de végétaux, arbres, lianes et plantes herbacées.