INTRODUCTION

Avant d'aborder l'exposé de mes recherches sur la fécondation, je crois devoir dire quelques mots de l!histoire des découvertes récentes qui ont amené Tétat actuel de nos connaissances sur cette question fondamentale. H n^y a pas longtemps l'on ignorait encore si le spermatozoïde pénètre dans le vitellus; Ton ne s'occupait guère de ce qu'il devient dans l'œuf et il semblait que tout le problème se réduisît à la constatation de ce fait afftrmé par les uns, nié par les autres. Le mérite d'avoir inauguré une ère nouvelle dans l'histoire de la fécondation revient avant tout à Butschli, l'éminent professeur de zoologie de l'Université d'Heidelberg.

Parmi les auteurs qui ont fait connaître les notions nouvelles dans leurs comptes-rendus ou dans des œuvres didactiques, et même parmi ceux qui ont contribué, par leurs propres recherches, & faire progresser la question de la fécondation plusieurs ont méconnu la part prépondérante qui revient & ceux qui ont ouvert la voie.

L'on doit à Bûtschli la découverte de trois faits, dont toutes les recherches plus récentes ont établi l'importance capitale.

10 Dans son mémoire sur les nématodes libres (1), publié en

1873 dans les " N^ova Acta der Kôn. Leop. Carol. Deittscliari Akademie der Natiirforscber „ et déposé dès !e 13 juin 1872, Blitschli monb-a que, chez Bliabditis doUchura, deux noyarOx prennent naissance dans le vîtellus de l'œuf fécondé, qu'ils se réunissent bientôt an centre de l'œuf et qu'ils se confondei enfin poui- donner naissance au noyau de la première ceUn] de l'embryon.

Dès l'année 1874, cette découverte se trouva confirmée par les belles recherches de Auerbach (2) sur VAscaris nigro^M venosa et le Stro'iigyhis auricidaris, entreprises et termiaéefti sans que l'auteur ait eu connaissance des résultats auxquel Blitschli était arrivé deux ans auparavant.

Bientôt après, Butschli (3) constata des faits semblables non ' seulement chez plusieurs antres nématodes, mais aussi chez deux mollusques Gastéropodes Limnœa stagnalis et Sucdnea Pfeifferi. Dans la note préliminaire qu'il publia dans le but j de prendre date pour ses nouveaux résultats, il consigna la j seconde et la troisième découvertes.

2" Il a constaté que chez Cmullanus elegans, aussi bien que chez les mollusques dont je viens de citer les noms, à la place de la vésicule gemiinative, apparaît un fuseau flbrillaîre semblable à. celui qui se forme aux dépens d'un noyau de cellula'J au moment où cette cellule va se diviser.

3" H a le premier reconnu que le fuseau internent dans la J formation des globules polaù-es.

Si l'on se rappelle en outre la pai't prépondérante qnt^ revient à BiitschU dans la découverte des phénomènes qui caractérisent la division cellulaire indirecte, l'on ne peut hésiter à placer son nom à la tête de ceux qui ont le plus laidement contribué à fonder l'état actuel de nos connaissances sur la genèse des cellules. Ses travaux sur l'ensemble •] des phénomènes qui se rattachent à la fécondation dea j animaux et à la division des cellules animales et ceux Strasburger dans le domauie de l'histogenèse ( ont été le point de départ des nombreuses recherches donti le pi-oblème de la formation des cellules a été l'objet dans C6BI

Il ^^

dernières années. Bûtschlî n'a pas pu élucider l'origine des deux noyaux que l'on observe dans le vitellus peu après l'imprégnation de l'œuf : constatant dans certains cas Texistence non pas de deux, mais de plusieurs éléments nucléaires, ignorant les liens qui rattachent l'un de ces éléments à la vésicule germinative de l'œuf, l'autre au corps du zoosperme, Bûtschli n'a pas pu arriver à l'interprétation vraie du phénomène de la fusion des noyaux. H s'est trompé quand il a admis l'expulsion totale de cette partie de la vésicule germinative qui se transforme en un fuseau; mais ses découvertes n'en ont pas moins donné l'impulsion ; elles ont fait entrevoir des horizons nouveaux et elles ont servi à poser nettement les questions que ses successeurs ont partiellement résolues.

Parmi ces derniers les noms de 0. Hertwig et ^e Fol méritent d'être cités en premier lieu. Plus que tous les autres ils ont contribué à résoudre les problèmes soulevés par les publications de Bûtschli.

Longtemps avant Blitschli, Warneck(4) avait vu, il est vrai, les deux pronucleus de l'œuf récemment fécondé. H avait reconnu que la tache claire, conique, qui chez Limnœiis et Limax occupe la portion de la surface du vitellus dont les globules polaires viennent de se détacher, rentre dans l'intérieur en reprenant une forme arrondie. Chez Limax l'on distingue alors deux taches claires qui ont des contours parfaitement distincts et renferment chacune un corpuscule très net et quelques autres granulations : ce sont des noyaux. Wameck a vu ces noyaux se fusionner en une seule masse transparente et celle-ci prendre bientôt une forme allongée dont le grand axe est perpendiculaire à l'axe de formation des globules polaires. Mais il faut bien reconnaître et en même temps regretter que ce mémoire si remarquable soit resté inconnu jusqu'au jour où Fol l'a retiré de l'oubli; venu avant son heure, il n'a exercé aucune influence sur la marche ultérieure de la science.

Peu de temps après que Bûtschli publia les résultats de ses premières recherches, j'ai repris l'étude de la fécondation

EDOCARD VAN BENEDEN.

chez les mamnufères. Dans mon mémoire sui- la composition I et la signification de l'œuf, publié en 1870, j'ai montré, qu'avant la première segmentation, l'on distingue dans le vitelluB de l'œuf, aussi bien chez le lapin que chez certaines chauves-souris, deux éléments nucléaires parfaitement indépendants l'un de l'autre. J'ai figuré ces deux noyaux dans le vitellus fécondé de la lapine (j)lanche XII, fig. 4) et du mnrin (même planche, fig. 4) (5). J'ai considéré alors ces deux noyaux comme étant le produit de la division de la vésicule germinative. La lecture des travaux de Biitschli et de Auerbach me fit douter de l'exactitude de cette manière de voir et me détermina à reprendre l'étude de la fécondation chez les mammifères.

En décembre 1875 (6), je communiquai à la classe des sciences de l'Académie les résultats des nouvelles recherches que j'avais entreprises dans le but de m'assurer si, chez les mammifères, les noyaux que j'avais antérieurement décrits se réunissent entre eux pour donner naissance à un noyau unique comme Biitschli et Auerbach l'avaient constaté chez les nématodes. Non seulement je pus confirmer de la façj}n la plus positive, en ce qui concerne le lapin, les faits que les deux obseiTateurs que je viens de citer avaient découverts chez les nématodes, mais je reconnus, eu outre, que les deux éléments nucléaires présentent des caractères différents, que l'un d'eux prend naissance près de la surface de l'œuf, au moment od l'autre occupe d^à, le centre du globe vitellin reti-acté ; qu'ils s'accroissent en se rapprochant l'un de l'autre, que le noyau périphérique conserve toiyours, même lorsque les deux éléments se trouvent réunis au centre de l'œuf, des caractères qui permettent de le distinguer de son congénère. Je crus pouvoii' déduire de mes observations que le noyau périphérique se forme, chez le lapin, aux dépens de la substance constitutive des zoospennes, tandis que le noyau central est d'origine ^ovulaire, et j'exprimai l'opinion qu'il s'agit, dans la ûision des deux éléments nucléaires d'un phénomène de conjugaison entre noyaux présentant des caractères sexuels différents. Eu éta-

blissant que les deux éléments nucléaires diffèrent entre eux par leurs caractères aussi bien que par leur origine et par leur lieu de formation, en exprimant Pidée que le pronucleus central est un élément ovulaire, l'autre un dérivé des zoospermes, j'ai donné, et cela avant que le travail de 0. Hertwig ait paru, l'interprétation universellement admise aujourd'hui de la signification des pronucleus. L'opinion que dans la flision des deux pronucleus il s'agit d'un phénomène comparable à la conjugaison des Protozoaires et des Protophytes se trouve clairement exprimée dans mon travail. Je fis observer en outre que la première cellule de l'embryon ne se trouve constituée qu'après la conjugaison des deux premiers éléments nucléaires et qu'il y a lieu de distinguer dès lors entre le noyau de la première cellule de l'embryon et les éléments nucléaires aux dépens desquels se forme ce premier noyau. J'ai proposé le nom iepronucletis pour désigner les éléments formateurs du premier noyau de Tembryon et ce nom a été généralement adopté.

La plupart des auteurs récents attribuent exclusivement à O. Hertwig la théorie actuellement admise de la fécondation. On ne rend pas justice à Btftschli et sans vouloir enlever & Hertwig rien de ce qui lui appartient, je tiens à revendiquer en partie pour Blitschli, en partie pour moi-même, la part, fort inégale d'ailleurs, qui nous revient à l'un et à l'autre. Balfour (7) et Mark (8) sont à mon avis les seuls qui aient relaté d'une manière exacte Thistoire des découvertes récentes relatives à la fécondation.

En même temps que mon travail, parut l'important mémoire de 0. Hertwig (9) sur" la formation, la fécondation et la division de l'œuf chez Toxopneustes lividus.

Ses recherches il les a faites sans avoir connaissance de mes résultats et j'ignorais moi-même que Hertwig s'occupât de la fécondation quand j'ai rédigé la communication prélîliminaire de mes recherches sur le lapin. Je n'hésite pas & reconnaître d'aiUeurs que si l'idée à laquelle nous sommes arrivés l'un et l'autre, en ce qui concerne la signification

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des pronuclens et lear fusion en un noyau uniqae, nous l'avons conçue eu même temps et indépendamment l'an de l'autre, Hertwig a incontestablement et à lui seul le mérite d'avoir reconnu qu'une partie du zoosperme se maintient en tant qu'élément mor[)hologique distinct et qu'elle devient mon pronucleus périphérique, le noyau speimatique de O. Hertwig (Spermakern). En ce qui concerne l'origine du pronucleus femelle {Eikern), Hertwig cherche à établir, dans son premier travail, qu'il ne serait antre chose que la tache germinative libérée. Cette manière de voir ne pouvait se soutenir; j'ai tâché de le démontrer dans un opusciUe qui parut peu après la publication du mémoire de Hertwig (10) et, dans ses tra- , vanr subséquents, (il) Hertwig a lui-même reconnu son eiTeur. H a confirmé, en effet, les données de BUtschli en ce qui concerne la transfonnation de la vésicule germinative en rai fuseau, et il a été le premier à. reconnaître la part qui revient à cet élément dans la formation des globules polaires d'une part, du prœiucleus femelle de l'antre.

Vers la même époque paraissent les belles et importantes recherches de Fol (12). Fol est le premier qui ait de ses yens vil le zoosperme pénéti'er dans le vitellua. L'observation a été répétée un grand nombre de fois et les détails du phênomëne sont décrits avec beaucoup de détails. H faut bien l'econnaitre que le mémoire de Hertwig laissait encore place au doute, et que la théorie ne reposait encore que sur une base bien peu solide, 0. Hertwig a vu un aster formé, près de la surface du vitellus, cinq minutes après le mélange des œufs et du sperme; un corpuscule arrondi qu'il considère comme une tète de zoosperme occupe le milieu de l'aster. De ce corpuscule partait parfois nn filament très grêle que l'auteur a vu sortir du vitellus et flotter dans l'espace périvitellin. Cet élément étaitril bien un zoosperme en conjugaison? Si l'on s'en rapporte ans observations de Fol, il est permis de douter que Hertwig ait apporté la preuve du fait qui forme la base de sa théorie à savoir, l'identité morphologique du pronuclens mâle avec la tête d'un zoosperme. Cette démonstration a été faite par Fol

qui partage en outre avec Bûtschli et avec Q. Hertwig, le mérite d'avoir fait connaître l'origine et le mode de formation des globules polaires et du pronucleus femelle. Je reviendrai plus loin sur l'historique des découvertes relatives à cette dernière question.

Je veux me borner à préciser davantage ici l'état actuelde nos connaissances sur la pénétration du spermatozoïde, ses rapports avec le pronucleus mâle et l'histoire de ce dernier élément.

Si tous les auteurs qui se sont occupés de cette question et qui tous ont choisi les échinodermes pour sujet d'étude Hertwig, Fol, Selenka et Flemming sont d'accord pour affirmer la pénétration du zoosperme dans l'intérieur du vitellus, si tous admettent que le pronucleus mâle n'est qu'une partie modifiée du spermatozoïde, de notables divergences d'opinions existent, quant à la manière dont se fait l'entrée des zoospermes et sur la part d'intervention qui revient à ces éléments dans la formation du pronucleus mâle.

Cinq minutes après le mélange des produits sexuels O. Hertwig observe une petite tache claire au bord du vitellus. Cette tache est entourée d'une étoile dont les rayons divergents s'allongent à mesure que la tache s'étend. Dans l'espace clair se voit un petit corps homogène qui devient surtout visible par l'action de l'acide osmique et du carmin et qui mesure 0,004™". Dans les œufs vivants l'auteur a vu parfois une ligne délicate partir de ce corps pour atteindre la surface du vitellus et se prolonger encore au-delà en un filament tenu qui s'étend dans l'espace compris entre le vitellus et la membrane de l'œuf. Hertwig prend la ligne et le filament qui lui fait suite, pour la queue d'un spermatozoïde et le petit corps renfermé dans la tache claire pour la tête d'un zoosperme. Ce petit corps il l'appelle " noyau spermatique, Spermakern „. La tache claire grandit, elle progresse vers le centre de l'œuf entraînant avec elle le petit noyau qu'elle renferme.

Le noyau spermatique s'approche du noyau de l'œuf que l'auteur a cru pouvoir identifier d'abord à la tache germinative.

mais qu'il a reconnu plus tard pour n'être que la moitié interne du second amphiaster de rebut. Le noyau spermatique et le noyau de Tœuf se juxtaposent; puis se confondent en un noyau unique auquel Hertwig donne le nom de noyau de segmentation (Fiirchtingskem).

' Fol a réussi à observer directement la ptoétration du zoosperme dans le yitellus et cela chez Asterias glaciaUs et chez des Echinides. Après avoir traversé la plus grande partie de la zone pellucide de l'œuf, le spermatozoïde entre en communication avec le vitellus par l'intermédiaire d'un prolongement sarcodique en forme de cône qui est émis par le protoplasme vitellin (cône d'attraction). Le corps du zoosperme (tête) est alors attiré dans le vitellus, tandis que le cU vibratUe reste en dehors et se décompose. De l'endroit où le corps de l'élément mâle vient de pénétrer sort une substance très-pâle qui aflFécte d'abord la forme d'un cône (cône d'exsudation), puis change souvent de contours et enân disparaît. Pendant ce temps une membrane vitelline se soulève en commençant par le point- de pénétration. L'auteur soutient qu'il ne s'agit pas ici seulement du gonflement d'une membrane préformée, mais d*un durcissement de la surface du vitellus qui donne naissance à la membrane, au moment où elle va se soulever. L'auteur s'accorde avec O. Hertwig à reconnaître que le corps du zoosperme devient le pronucleos mâle (Spermakem)] seulement il pense que le sarcode vitellin entre pour une part dans la formation de ce pronuclens.

Chez Pterotrachœa les noyflux sexués sont fort gros et égaux en dimensions. Ces noyaux se rencontrent et se fusionnent pour constituer le noyau fécondé.

L'auteor fidt une description spéciale de certains cas pathologiques obtaios par la fécondation dorafs altérés à*A^eri4Ms glackUis. Dans ce cas il pénètre plusieurs zoospermes dans chaque vitelh» ce qui. d'après Fol, n aurait jamais lien à 1 état normal et chaque zoospenne donne naissance à un pn»iacleis mâle. L'auteur attribue cette pénétration multiple à la lenteur avec laquelle la membrane vitelline se &me chez des œnfe alléféâL

Disons encore qn^il résulte clairement des observations de Fol que le pronucleus mâle est loin de présenter partout les mêmes caractères. Tandis qu'il reste petit et homogène chez les échinodermes, auquel cas le pronucleus donne lieu à la formation d'un aster, il devient très volumineux et ressemble beaucoup au pronucleus femelle chez PterotracJiœa. Ces pronucleus volumineux ne sont pas entourés de rayons étoiles, de filaments extra-nucléaires comme l'auteur les appelle.

Fol admet que le spermatozoïde peut entrer dans le vitellus par n'importe quel point de sa surface : il n'y a pas de lieu prédestiné pour l'imprégnation.

Selenka(13) a étudié la fécondation chez Toxopneustes variegatus. Ses observations diffèrent, par des points fort importants, de celles de 0. Hertwig et de Fol. D'après Selenka, le zoosperme après avoir traversé la zone pellucide, par un des pores radiaires de cette membrane, s'élance comme libéré de tout empêchement dans l'espace périvitellin qui existerait déjà à ce moment; il nage autour de la couche corticale du vitellus. Le vitellus présente à l'époque de la maturité une protubérance qui marquerait l'endroit où l'ovule était attaché aux parois de l'ovaire et celui par lequel sortent les globules polaires. Cette protubérance ferait constamment défaut dans les espèces étudiées par Fol.

Le zoosperme s'introduisait de préférence, 88 fois sur 100, par cette protubérance. Dans la règle il l'atteint de suite à sa pointe; d'autres fois il ne la rencontre qu'après avoir nagé entre la membrane let la surface du vitellus. Dès que la pointe du zoosperme a . pénétré dans la couche corticale du vitellus une membrane mince se soulère, de la surface de ce dernier, autour du point de pénétration et s'étend rapidement au reste de la périphérie. La membrane une fois formée constitue un obstacle infranchissable pour d'autres zoospermes. H n'en entre plusieurs que quand ils se sont présentés exactement en même temps à la face interne de la zone pellucide, ou si l'œuf étant malade, sa membrane ne se soulève que lentement.

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Une fois que le spermatozoïde a son corps dans la protubérance il secoue rudement les granules lécithiques qui l'entourent, grâce aux ondulations de sa queue, qui est toute entière en dehors. Sous l'influence de ce mouvement violent, le sarcode vitellin se soulève autour du corps et le dépasse en formant une sorte de houppe. Tout à coup la queue devient immobile, la houppe rentre dans le vitellus en laissant à la surface une petite excavation d'où sort le cil vibratil du zoosperme. Le corps du spermatozoïde devient le centre d'une figure étoilée et s'avance vers le noyau femelle. La queue, encore attachée au corps, travef^e en ligne droite les couches superficielles du vitellus et s'étend au-delà de la surface. La pointe et la queue du spermatozoïde sont résorbés, tandis que le col se gonfle et détient le noyau mâle.

Comme le fait remarquer Fol, il y a entre les observations de Selenka et les siennes bien des désaccords. Fol a toujours vu la pénétration dans le vitellus s'effectuer rapidement, mais sans aucun de ces mouvements désordonnés dont parle Selenka : - pendant cet acte, dit Fol, j'ai toujours va la queue immobfle «. Cet auteur n'a jamais réussi à voir la queue attachée au corps de l'élément spennatique, lorsque ce dernier avait déjà quitté la surface du vitellus et il n'a pas remarqué que le col du zoospenne continuât seul à croître. Le noyau mâle, après sétre juxtaposé au noyau femelle, croit continuellement, jusqu'à ce qu'il ait atteint des dimensions égales à ceUes du noyau femelle. La fusion n'a lieu que lorsque cette égalité s'est établie,

F»>l Eût observer avec raison l'intérvt qui s'attache à cette ol?serTatî->n. si «mi la rapprvvhe de celle de Hertwig, qui pense que. la réoni*>a des n«>yaux est d'autant plus pr\^mpte et le ih>yaa màle d aatjui: plus petit, au moment de sa c«>i\fQgaisoii, que rorai est phK> arincé dans sa mamration au ui»>Bient oà il Tient à être feo>o»lé, SvHIS ce rapport le T.^ri^i^Hensief wi'.-vî*> est un rxtrémie par la petitesse de soq noy^u màle. Sel«eiika »>as m»>ntre que dans ce cas aassi îe pr>nacîeas mÀle atteint la même iumea>i*>n que l aatr^ u»>yau avjuit «le

se souder à lui. La seule différence entre tous ces cas résiderait dans l'endroit où le noyau mâle opère sa croissance qui aurait lieu, tantôt en chemin, tantôt dans le voisinage immédiat du noyau femelle.

Selenka a vu se développer normalement de jeunes larves provenant d'œufs qui avaient reçu deux, trois et même quatre zoospermes, sans découvrii* aucune irrégularité dans le développement de la Gastnda. Cependant il ne pense pas, qu'à tout prendre, le développement d'un œuf surfécondé puisse rester normal.

Flemming (14) confirme les conclusions formulées par O. Hertwig et par Fol en ce qui concerne le nombre des zoospermes nécessaires pour provoquer un développement embryonnaire normal. Chez les œufs (^ se développent régulièrement il n'est entré qu'un seul zoosperme.

Pour la manière dont se fait la pénétration il se rallie à la description de Fol ; mais il confirme, contrairement à l'opinion de Fol, l'existence d'une protubérance vitelline signalée par Selenka. Flemming n'a pas eu le loisir de rechercher si c'est par cette protubérance que les zoospermes pénètrent. Il ne voit plus rien de la queue du zoosperme dès que celui-ci a pénétré dans le vitellus. " Von dem Schwanze des schon ganz im Eikorper befindlidien Samenfàdens ist niclits màir wàhrzur nehmen. „ En se servant du carmin acétique, Flemming suit le noyau spermatique, qu'il identifie avec la partie antérieure de la tête du spermatozoïde, jusqu'au moment où il va se coiyuguer avec le noyau femelle. Quelques minutes après la pénétration, la partie plus pâle et moins avide de matières colorantes qui succède â la tête proprement dite, celle qui répond à ce que Selenka appelle le col et à laquelle Flemming donne le .nom de portion postérieure de la tête " hintere KopfOmlj „ cette partie disparaît. Flemming suppose que cette portion postérieure de la tête, unie à la queue, pourrait bien produire, en gonfiant, la tache claire qui renferme le noyau spermatique. Mais c'est là une simple hypothèse à l'appui de laquelle Flemming n'apporte aucun fait d'obser-

Tà&'in. * J& K-'lre wkiygf^f^. dit-fl. eiiu» en» Arjn, nefef iIom S:rt*f'itks. 4*tr<h AHfqueRt.tntj der h^île Hof Je» Samtenkenu rfh*Ar^%K 4/^ fidk ron jrtzt an zeitjt mmi der pm Herhcig ak

\^ noj^a spenBadqne d*>iit la tyram <e$t w début celle de la xètK da z/yjspeno^ devient ensuite irrêgiilière.

C^ue manière de toit de Flemmine snr rofigine du noyan «pienaatl'iue difiêre de celle de Hertwig et de Fol en ce que ces derniers atimettent qne ttxit le o»>rpl^ dn loospenae (la tête entière; deTient ntjyan spermatiqne. tandis que pour Flanming la (Krinte •j<i p>>rtion antérieure seule de la tèie deTient le prooncleiis mâle.

La pfjrûoa pûstérienie de la tète n^pond an Hais da S^i^f^fid^is de Selenka. Celni-d &it disparaître la portian antérieure de la tète et faix dériver t«]int le n>>Tan ^ermatiqne dn OM c'est-à-dire de la partie pcistèrienre de la tête.

Quant à la conjugaison des deux pnonncleos. Flemming ooiiircx^ en t<>ns p>>ints la description de O. Hertwig.

T'>aiê§ ces observations qoi dans leor ensemble, concordent (•kinement avec Içs données de O. Hertwig et de Fol, Fi^mming les a entreprises à la suite d*une publication récente de A- Sdmeider^lô > qui. après avoir étudié i Ostende la fécondation de Y Ai^fer'V>iHthkm minons, nie purement et idmplement l'existence d'un noyau spermatique* ** £^ î^ kem

D'après luL au nK*ment de la fécondation, la vésicule gn^ mioative de l'œuf envoie des prolongements ramifiés dans viau^ les directions. Elle change de forme comme le ferait tm Khizopode. Le zo«>sperme peut atteindra l'un de ces prolongements à la périphérie du vitellus: mais aussitôt il disparut; aucune de ses parties ne se maintient eu tant qu'élément morxihologique distinct: le spermat<^zolde détermine tout au plus une excitation pi»uvant provoquer peut-être l'apparition d'une étoile. Ce qui a fidt croira à l'existence de deux pttmucleus capables de oHijngaison, c'est que. au moment où Tœuf

va se diviser, les deux étoiles de Tamphiaster, nées en deox points opposés et souvent fort éloignés l'un de l'autre de la vésicule germinative, peuvent se rapprocher de la surface de section qui plus tard séparera les deux premiers blastomères.

Les données de Schneider sont, comme on voit, le renversement de tous les résultats qui pouvaient paraître définitivement acquis par toute une série de travaux, publiés à la suite des mémorables découvertes de Biitschli.

La question n'est donc résolue ni dans son ensemble, ni dans ses détails; et même entre les auteurs qui sont d'accord pour afiOrmer la pénétration du zoosperme, l'identité morphologique du pronucleus mâle avec une partie du spermatozoïde, enfin la formation du premier noyau embryonnaire par conjugaison de deux éléments nucléaires distincts, il existe des divergences d'opinions sur des points essentiels.

Malgré les belles découvertes de Hertwig et de Fol l'on n'est pas non plus complètement édifié sur la formation des globules polaires et du pronucleus femelle.

Les divergences de vues qui existent sur presque tous les points prouvent tout d'abord que la constatation des faits dont il s'agit présente, chez les échinodermes, de sérieuses difficultés. Pour qu'un observateur aussi distingué que Schneider puisse nier l'existence du pronucleus mâle chez les échinodermes, il faut bien admettre que la recherche de cet élément nucléaire soit entourée de difficultés réelles. Est-ce que la raison principale des controverses ne résulta pas de la petitesse du spermatozoïde, de la difficulté de reconnaître dans le zoosperme les parties constitutives de la cellule, du petit volume du pronucleus mâle?

La conviction qu'il pourrait en être ainsi m'a déterminé à rechercher, pour l'étude de la fécondation, un animal qui, à raison des dimensions et de la constitution de ses zoospermes, se prêterait plus facilement à des recherches de' ce genre que les oursins et les étoiles de mer.

J'ai trouvé dans l'Ascaride du chevaï un matériel admirable, et je suis convaincu que les œu& de ce nématode devien-

(Iront bientôt l'objet classique pour l'étude et la démonstration des phénomènes qui se rattachent à la fécondation. L'on peut se procurer très facilement l'Ascaride mégalocéphale, surtout en hiver. Au printemps et en été les chevaux infestés sont moins communs. La simplicité de son organisation et ses dimensions considérables font de l'ascaride du cheval l'un des animaux les plus faciles à disséquer que l'on connaisse. H suffit d'inciser longitudinalement, d'un coup de ciseaux, le tube musculo-cutané pour mettre à nu les organes sexuels. Je recommande de fixer les deux extrémités du ver au moyen d'une grosse épingle, afin d'empêcher la rétraction de la paroi du corps. Le sénim ai-tificiel de Kronecker(*) constitue un excellent liquide indifférent : il n'altère pas du tout les œufs et l'on peut s'en servir avec avantage pour y plonger l'animal pendant la préparation des organes sexuels.

Indépendamment des avantages qui résultent des dimensions et de la forme des spermatozoïdes, de la présence dans la plupart d'entre eux d'un corps réfringent particulier et très volumineux qui les fait reconnaître immédiatement, de la transparence parfaite des œufs, quand on les a traités par certaines méthodes que je vais décrire, l'ascaride du cheval se recA)mmande encore par la lenteur avec laquelle s'accomplissent chez lui tous les phénomènes qu'il s'agit d'étudier.

En enlevant un segment de l'nterus ou de Tovidûcte d'un demi centimètre de longueur, chez une femelle fécondée, on est certain d'y trouver des milliers d'œufs qui tous se tnnivent exactement au même stade de développement. L'on aura quand on voudra, sur un même porte objet, des miUiers d'œuis montrant tous un ZiK>sperme fixé au bouchon d'imprégnation, ou à moitié engagé dans le micropyle, ou complètement plongé dans le vitellus ou montn\nt soit le premier soit le sei^md globule polaiiv en voie de formation, ou les deux pivuuolous en pivsenoe,

1^ j^ênêtnuion du sinninatozoïde, la genèse du pronucleus

*^ Kuu iibi)UÀ\ t(HV Chlorure i)<» soiiium, ti. Soude causti«iae, 0,06.

ii:hi;iies sir la FÉco^D*TION.

mâle, la formation des globules polaiies s'accomplissent toujoors en des points constants de l'organe sexuel et les miUiei-s d'œnfs qui occupent ces points sont exactement au même stade de développement.

L'utems n'a pas moins de 15 à 20 centimètres de longueui', chez une femelle adulte ; dès le moment oii ils y pénètrent les œufe arrivent en contact avec les zoospermes. Quand ils sont arrivés dans le vagin ils sont munis chacun de deux pronncleos; l'expulsion des globules polaires s'est accomplie; mais If segmentation n'a pas commeucë. Je ne crois pas que l'on puisse désirer un matériel se prêtant plus merveilleusement à l'étude de la maturation et de la fécondation de l'œuf : il n'est persomie, qui connaissant les organes sexuels femelles de notre Ascaris, ne soit capable de démontrer en cinq minutes, non pas seulement à des Mstologistes expérimentés, mais au dernier des profanes, la pénétration du zoospenne.

aiÊXHOUEB DE i>iiÉi>,\HA-rio:v.

1° Quand on veut faire l'examen des œufs vivants, on peut ouvrir l'animal dans le sérum artificiel, le plus tôt possible après la mort dn cheval qui hébergeait les vers, et examiner, soit dans le liquide de Ki-onecker, soit dans le liquide naturel du corps de l'Ascaride. On peut parfaitement, sur le vivant, observer toutes les phases de la pénétration des zoospermes.

Les œufs fi-ais retii'és de la portion inférieure de l'utenis et du vagin montrent distinctement les diverses membranes, les

Ideux globules polaires et les pronucleus qui siègent dans le vitellus retracté. Mais on ne peut arriver, par l'étude des œufs frais, à s'édiâer ni sur la formation des globules polaires, ai sur l'histoire du spermatozoïde.

2'' L'une des méthodes qui m'ont donné les meilleures préparations permanentes consiste & traiter les œufs pail'acide nitrique à 3 "/o. Après un séjoui* d'une heure environ dans ce liquide les œnfs sont lavés à l'eau, puis portés (! de l'aJcool au tiers et après une heure on deux dans de

M EDOUARD VAN BENEDEK.

l'alcool à 70^. Si Ton a en yne d'obtenir des préparations d'oenfe non encore fécondés on de mettre en évidence les diverses phases de la pénétration dn zoosperme, s'il s'agit en un mot de préparer des œnfs encore déponrvns de memlM'ane oa présentant tont an plos la membrane vitelline qni est tonjours mince et pen résistante, il est nécessaire dopérer sor porte-objet. On range les nns à côté des antres line vingtaine de porte-objets ; snr chacun d^enx l'on dépose nne gootte de la sûlntion acidulée. Puis on y plonge un fragment dn tnbe sexnel de trois on quatre millimètres de longueur; on ouvre aussitôt le tube en se servant de deux aiguilles à dissection, de fitçon à libérer les oeu£$; puis on agit« légèrement de manière à ce que les œuÊ se disséminent uniformément dans le liquide. Si le premier fragment enlevé répond à .rextrémité inférieure de ToTiducte et si Ton excise des fragments successif de plus en plus rapprochés de Textrémité vaginale de Tuterus, (m obtiendra une série de préparations montrant les modifications de Tceuf depms le moment où. arrivé i la fin de la première période de maturation, il est prêt à recevoir le spermatozoïde, jusqu^au moment où, à la suite de la pénétration complète de rélément fécondateur, une membrane résistante se trouve exmr stituée sur tout le iM)urtour du vitellus. Si au lieu de procéder comme je viens de le ilirv on plonge successivement dans Taoide nitrique* puis ilans les alcools et les matières colo* r^mtes le tube sexuel entier, on n*obtient que des prépars* tions délictueuses, l^es œuÉ^ serrvis et pressés les uns contze les autres dans rintêrieur do Toviduote et sunont de luterus y atfecteut dos 6>nnes iK\lyê%lriques irtvgulières qui. fixées an utonieut \n\ Timmersix^ \isuis Tacide amène la coagulation des sulv^taïuvs albmuinouU^ss ^' maintiennent indéfiniment. Si. au ovHtlraiiw les anifs 2î>knu Ulvrx^s sur iv^rte-objet. quand ils sont euvvw vix^tts. chacun d'ou\ ptvnd iu\iuov.iiA:< aient ime forme v>\v\do r^^s^tlu^r^v ^^^nublaKo iv>ur t>>ixs e; b^^swic^ap plus favorabV \vHtr letudo,

l^auuv \vAti. dA«s lo u\lv *^Axu*î. les vvci^^ sc-nt agglutinés eixtiv ^\\ \var wh> siiKm;uuv vi^tttHis>e qui s^ vvagnle aussi

par les acides. Une fois coagulée cette substance constitue une sorte de ciment qui rend difficile Tisolement des ovules durcis. Cette difficulté n'existe pas si Ton opère sur le frais.

Mais le plus grand inconvénient résulte de ce que d'innom^ brables spermatozoïdes se trouvent mêlés aux œufe^ dans la partie supérieure de Tuterus. Tous ceux qui sont entraînés n'ont pas réussi à s'unir à un œuf, il s'en faut de beaucoup. Si l'on ouvre sur porte objet un fragment de la portion supérieure de Tuterus, les spermatozoïdes copules restent seuls unis aux œufs; les autres n'étant pas fixés se libèrent sans aucune difficulté et on les trouve répandus sur le porte-objet, entre les œufs. Mais il n'en est pas de même quand on durcit le tube utérin dans son ensemble, pour faire des préparations d'ovules, après que l'on a coloré en masse. Les spermatozoïdes qui se trouvaient accidentellement en contact avec les œufs restent accolés à la surface de ces derniers et peuvent être facilement confondus avec des zoospermes en copulation.

Tous ces inconvénients disparaissent quand il s'agit des œufe des neuf dixièmes inférieurs de l'utérus. Aussitôt que la membrane qui se développe à la périphérie du vitellus, après la pénétration du zoosperme, a atteint une résistance et une épaisseur suffisante pour donner à Tœuf sa forme ovoïde ou sphéroïdale, il devient inutile de préparer sur porte-objet, ce qui nécessite des manipulations plus longues et plus délicates. On peut plonger Tuterus tout entier dans l'acide, puis dans les alcools et enfin dans les matières colorantes. Les œufs se trouveront parfaitement conservés et se prêteront admirablement à la confection de préparations permanentes.

Les meilleures méthodes de coloration, pour les œufs durcis par l'acide nitrique et l'alcool, sont le carmin boracique et la fuchsine. Le vert de méthyle m'a aussi donné de bons résultats.

3* On peut employer avec grand avantage l'alcool au tiers, puis l'alcool à 70, au lieu de l'acide nitrique, pour duixir les œufe. On colore soit par le picro-carmin, soit par le carmin boracique. On monte soit dans la glycérine, soit dans le

E. VAK BBNEDEN.

baume. Il faut [irendie de grandes préeautïuus pour empêJ cher la rétraction et la déformation des membranes qnand oi|i| monte dans le baume. Pour cela U convient de ne pas pas directement de Talcool à l'essence et de celle-ci an baume, ' mais d'user d'une série de mélanges successifs et gradués.

En ce qui concerne la question de savoir s'il faut traiter les œufs sur porte-objet ou si l'on peut les durcir et les colorer an masse dans l'organe sexuel les indications sont les mêmes qu si l'on emploie l'acide nitrique.

4" L'acide osniique à 1 "/o rend aussi des services pou l'étude des œufs de l'oviducte et pour la pénétration defl zoospermes. 11 faut laisser a^ir très peu de temps, queslquot secondes à peine, laver ensuite avec soin et colorer par ] picrocarmin (24 heures). On dépose aloi's sur chacun dtt bords de la lamelle un goutte de glycérine picrocarminaté Au bout de quelques jours on obtient de superbes préparations

Cette méthode ne peut êti'e employée avec avantage qn6< poui' tes stades qui précèdent ou qui suiveut immédiatement 1 la copulation des produits sexuels. Aussitôt que la première.! couche périvit«lline a commencé à se former 11 devient impos- I sible de faire pénétrei' le carmin.

5" L'acide acétique glacial est aussi recommandable, surtout ' pour l'étude des derniera stades; cependant il a riuconvénîent de distendi-e considérablement la membrane vitelline et de ] g'onfler la substance unissante interposée entre les œufs.

Les méthodes indiquées ci-dessus donnent des résultats' [ complets, quand il s'agit de préparer les preiniei-s stades. Maift.l comme le nombre et Tépaisseur des membranes augmenteat, I progressivement, il devient de plus en plus difficile de faire T pénétrer les réactifs à l'intérieur de l'œuf. Aussi n'est-il pas \ aisé de préparer convenablement les œufs de la partie inffr^ 1 rieui-e de l'utérus et ceux du vagin. Jusqu'à présent je n'ai pas T réussi à trouver une méthode qui permette de bien colorer les j prouuclena. J'avais songé à me servir de la pœnpe pneumatique 1 pour activer la pénétration; mais je n'ai pas eu le loisirl d'essayer le procédé.

RiîruEncHEs srn la ficcondation

J'ai divisé le présent travail en cinq eliapitres :

I, Le premier comprend : A/ la description de l'œuf, tel qu'il se trouve constitué au moment oii il se détache du rachis ovarien; j'y rattache l'histoii-e des modifications qu'il snbit en traversant l'oviducte; anivé à l'extrémité de ce canal il est devenu apt« à recevoir le zoosperme. L'ensemble de ces changements caractérise ce que j'ai appelé la première période de la maturation.

B/ La description des diverses formes que revêtent les zoospemies dans l'intérieur des organes génitaux de la femelle,

II. Le second chapitre traite de la pénétration du zoosperme. D convient de distinguer l'imprégnation de l'œuf, ce que je propose d'appeler la copulatimi dos proilmts sexjiels, le phénomène qui consiste essentiellement dans l'introduction de l'élément spermatique dans le corps ovidab-e, de la fécondation proprement dite ; celle-ci consiste dans Vwiificaiion des éléments sexnels, ou si l'on veut dans la formation de Ia première cellule de l'embryon aux dépens de deux éléments cellulaires distincts.

ni. Le troisième chapitre comprend l'étude de la seconde période de la maturation de l'ovule. Celle-ci s'accomplit après la copulation. Elle comprend l'ensemble des modifications qui s'accomplissent dans l'œuf, depuis le moment de la copulation des produits sexuels, jusqu'à l'instant où commence l'unification de l'œuf mur et du zoosperme.

IV. Dans le quatiième chapitre j'ai exposé les phénomènes qui, dans mon opinion, constituent la fécondation proprement dite : la formation des pronucleus et la conjonction de ces éléments.

V. Le cinquième chapitre comprend l'exposé sommaire des résultats de cette étude.

^H . EDOUARD VAX BENEDEN.