CHAPITRE I

I. — De l*œiif et des changements qu'il subit pendant la première période de sa maturation.

Au moment où il se détache du rachis ovarien Tœuf n'est pas encore apte à recevoir le zoosperme. Les œufe libres de la partie inférieure du tube ovarien diffèrent notablement de ceux qui, arrivés à Textrémité utérine de Toviducte, sont sur le point de pénétrer dans la poche séminale, où sont accumulés des milliers de spermatozoïdes. Laissant de côté l'ovogenèse proprement dite, je décrirai, dans la première partie de ce chapitre la constitution de Uœuf, tel qu'il se présente au moment même de l'imprégnation, j'y rattacherai l'exposé des changements qu'il subit pendant son passage à travers l'oviducte. Ces modifications semblent préparer l'œuf à recevoir le zoosperme; ils caractérisent ce que j'appelle la première période de la maturation de Vœuf.

La seconde période de la maturation comprenant l'ensemble des phénomènes qui se rattachent à la formation des globules polaires et des couches périvitellines s'accomplit dans l'utérus, après la. pénétration du zoosperme. L'étude de cette seconde période fera l'objet du chapitre III.

J'ai étudié avec le plus grand soin et décrit avec beaucoup de détails la constitution de l'œuf et celle du zoosperme. Peut-être convient-il que je me justifie d'avoir consacré à cet objet tant de pages : bien des particularités sur lesquelles j'ai cru devoir insister pourront paraître de maigre importance à plus d'un de mes lecteurs. Plusieurs raisons m'ont déterminé à entrer dans ces détails.

Des découvert.es récentes ont attiré l'attention sui' des phénomènes de structure que révèle l'étude du protoplasme cellulaire et les noyaux eux aussi présentent une composition bien plus" compliquée qu'on ne l'avait soupçonné jusques dans ces derniers temps.

RECHEltCRES StiR Là FÉCONDATION.

La question de V organisation de la ceUuk a été sérieusement abordée et parmi les antenrs qui ont jeté les premiers jalons de cette science noEvelle il faut avant tout signaler Heitzmann, Frommann, Kupffer, Klein et Flemming.

Les phénomènes compliqués qui s'accomplissent lors de la division des cellules et dont on doit la connaissance aux laborieuses recherches d'im grand nombre d'histologistes, parmi lesquels je me plais à citer A. Schneider, BUtschli, Strasbnrger, Mayzel, Flemming, Schleicher, Balbiani, Pfitzner et &■ Retzius, semblent se rattacher intimement à la structure du protoplasme. II est établi dès à présent que l'un des phénomènes les plus caractéristiqnes de la vie cellulaire, la multiplication, s'accompaçne de changements de structui-e fort compliqués, qni n'intéressent pas seulement le noyau, mais aussi le corps protoplasmiqne de la cellule. ■ Tous les jours nous voyons donc se confirmer plus complètement l'idée qne Brticke (16) exprimait il y a vingt ans quand il disait " Wîr werden mît No&iwendigkeit dastt f/efurt, im ZnUffiiinJuàte mnen im Verhaltnisse complidrtm Bau su erkmnm, loenn vir die LAetiserscheimmgen herilclcsichtigen, wddie wir an detnselhen wahméimen. „

Cette organisation de la cellule, dont Briicke affirmait l'existence sans pouvoir la dévoiler, l'on a commencé à l'analyser. Grâce au perfectionnement de la technique microscopique, grâce à des objectifs et à des appareils d'éclairage plus parfaits, l'on entrevoit la complexité qui se cache sous une uniformité appai-eute. Il ne peut pins être question aujonnl'hni de considérer le protoplasme comme uu coi-ps i chimique à propriétés définies et l'on doit renoncer à confier 1 aux chimistes le soin de trouver, dans l'analyse de la substance 1 protoplasmique, l'explication des phénomènes qni caractérisent I essentiellement la vie cellulaire. Autant vaudrait demander à i l'analyse chimique du corps humain, pris dans son ensemble, l'explication des phénomènes qni distingaent l'activité de notre espèce, que d'attendre de l'analyse qualitative on quantitative du protoplasme, l'explication des phénomènes par,'

EUOl'ARD VAn BENEDEN.

toute Cellule témoigne de sa vitalité. La cellule ÉtQOBB appamit aiynurd'hui comme un organisme complexe dont

B appareils nous sont inconnus; nous devons commencer par "Sèbrtmiller l'organisation cellulaire et êtudiei' les modifictLtions morphologiques qui accompagnent les actes de la vie. De même qu'il existe des différences entre le muscle cou-tracté et le muscle au repos, entre la cellule grandulaire en voie de sécrétion et cette même cellnle inactive, l'on constate des difl'érences dans la composition du corps de l'œuf ans divers moments de sa maturation. La portée de ces modiâcatiens nous échappe totalement pour le moment; mais c'est quelque chose que d'avoir constaté que chaque phase de l& maturation de l'œuf, chaque phénomène qui se rattache sfjît à la maturation, soit à. la fécondation, s'accompagne de modi< fications qui intéressent tout le corps ovulaire.

Je ne puis que me rallier pleinement aux idées de Flemmiug, quand il écrit dans cet admirable exposé qu'il vient de faire de l'état actuel de nos connaissances sar la cellule (1 7) ; " Hat die Svbstam der Eizdle emen fiait, kann dieser und dû Be^chaffetiheit der FOden in besUmmten Bezirken des Zelleit'' hSrpers verschieden sein, sa kann darin owcft eine Onandiagéder EntwicJcdungspradestinatioji gesucht werdfin, in der $idi' dos eine Ei von dem anderen unterschmdel und dièses SuchetC mrd moglich sein mit dem Mikroskop — bis me tveii, ktmn' Niemand sagen cher sein Ziel ist niihts Oeringeres, als em* uirhliche Morphologie der Vererbung. ,. i.

Ce sont ces idées, c'est cet objectif que j'ai en en vue daD8< mes étndes, sans me faire la moindre illusion sur la distancSi qui nous sépare de cet idéal. L'on se trouve encore, dans .cesrecherchei» sur la structure cellulaire, dans la situation d'un homme qui, ignorant que l'œil est l'organe de la vision, étranger à toute notion de physique et de physiologie se mettrait k analyser anatomiquement l'organe visuel. Nous sommes exposés, ilaus nos tâtonuementa pour découvrir la. route qui doit nous conduire an but dans ces régions inexplorées, à suivie souvtint des cheuûns sans issue : l'essentiel se

RECHERCHES SIH LA rU<;ONIIATI(l>.

confoiidi-a pour nous avec l'accessoire i car la portée des faits nous échappe et nous eu sommes réduits à recherclier par voie d'analyse les matériaux qui devi'ont servii' un jour à édifler le schéma de l'organisme élémentaire.

n y a deux ans envb-on, nous avons consacré six semaines, l- Charles Julin et moi à l'étude du développement d'une ' Ascidie simple, la Corella paraïîeîoiframma, que nous avons trouvée en grande abondance, sur les feuilles de Laminaires, dans la baie de Leervik (Strordo, Norwège). L'un dea faits les plus intéressauts qui ressortent de cette recherche, c'est que, dès les premières phases de la segmentation, l'on peut distinguer le plan médian, l'avant et l'aiTière. la face dorsale et la iace ventrale de la larve et par conséquent de l'animal futur. Dès les débuts du fractionnement l'embryon présente une symétrie bilatérale paifaite. Rabl(lS) et Hat3chek(19) avaient signalé déjà antérieurement des feits du même ordre chez d'autres animaux bilatéraux et tout récemment AV. Roux(20) et Rauber(21) ont montré que chez les grenouilles aussi les axes dn corps de l'adulte se dessinent dès le début de la segmentation. H est peimis dès lors de se demander si les plans de sjTiiétrie de l'embryon ne se ti-ouvent pas déjà préformés dans l'œuf lui-même et si l'un des traits les plus caractéristiques de l'organisation de l'espèce, la symétrie qui la distingue, ne se trouve pas déjà indiquée dans l'œuf. L'œuf d'un animal à symétrie bilatérale aurait-il <!omme l'animal dont il provient et qn'il doit devenir une extrémité antérieure, une extrémité postérieure, une face ventrale, une face dorsale, une droite et une gauche? les matériaux qni doivent servli- à édifier la moitié droite du coi-ps siègent-ils dans la moitié droite de l'œuf et la substance de la tète ne se trouve-t-elle pas concentrée en un point déterminé du corps ovulaire? Il importait, dans l'espoir d'arriver à éclalrcir ce problème, dont l'importance théorique n'échappera à pereoniie, de rechereher avec le plus grand soin si la stnicture de l'œuf révèle une symétrie comparable à celle de l'adulte. Nous n'avons pu aboi-der l'étude de l'œuf non fécondé chez CoreUa paraMelo-

72 EDOIARD VAN BENEDEN.

gramma; mais j'ai porté toute mon attention, pendant mes études sur les produits sexuels de l'Ascaride du cheval, sur toutes les particularités relatives à la symétrie de Tœuf et du zoosperme.

Les considérations qui précèdent me justifieront, je l'espère, d'avoir consacré beaucoup de pages à la description des produits sexuels de l'Ascaride mégalocéphale et d'y avoir consigné bien des détails, Bctuellement inintelligibles et qui pourront paraître fort insignifiants.

Avant de décrire les phénomènes qui s'accomplissent pendant la première période de sa maturation, voyons comment l'œuf est constitué au moment où, arrivé à l'extrémité inférieure de l'oviducte, il est sur le point de pénétrer dans l'utérus et tel qu'il se présente, quand il est prêt à recevoir le zoosperme qui doit le féconder.

Liibérés sur porte-objet, dans une goutte d^ liquide indifférent, ou bien même dans l'acide osmique, l'acide nitrique ou l'alcool au tiers, les œufe de la portion tout à fait inférieure de l'oviducte prennent la forme 'd'un ovoïde. Le grand axe de l'ovoïde ne l'emporte que fort peu sur son petit axe. Un examen attentif de la forme extérieure de l'œuf, et plus encore l'étude de sa structure, démontrent l'existence dans ces œufs d'un axe morphologique, dont les extrémités, que j'appelle les pôles de l'œuf, présentent une valeur tout différente tant au point de vue anatomique qu'au point de vue physiologique. L'un de ces pôles est prédestiné à recevoir le zoosperme : par ce point seul l'élément fécondateur peut pénétrer dans le vitellus; à cet effet ce pôle présente des particularités de structure que je vais faire connaître. Je l'appellerai pôle d' mjyrêgnation et je réserverai le nom de pôh neutre pour désigner l'extrémité opposée de l'axe morphologique de l'œuf. Dans l'immense majorité des œufs. Taxe morphologique se confond avec l'axe de figure de l'ovoïde. Cependant il n'en est pas toujours ainsi.

S'il est vrai, d'une manière générale, que la forme de

RECHERCHES SIR LA FÉCONDATIOiN . 73

Tœuf est celle d'un ellipsoïde, il y a lieu de faire observer néanmoins que c'est là une moyenne qui n'est peutêtre jamais mathématiquement réalisée. Si l'on trace à la chambre claire le contour de la coupe optique d'un œuf, ce contour est d'habitude une ligne légèrement irrégulière, qui, projetée sur celui d'une ellipse tracée mathémathiquement, se trouve ici un peu en dedans là un peu en dehors du tracé mathématique. Ces inégalités diffèrent d'un œuf à l'autre. Cependant, si Ton prend à la chambre claire un certain nombre de contours d'œufs placés de façon à ce que leur grand axe soit parallèle aux faces du porte-objet, l'on remarque que la partie de l'ovale qui avoisine l'un des pôles est constamment un peu saillante, que son rayon de courbure est régulièrement un peu plus court que celui du reste de l'œuf et que la limite de cette portion plus convexe est marquée par un léger sillon régnant le long d'un parallèle, à quelque distance du pôle. Souvent cependant, au lieu d'un sillon, on n'observe .qu'une légère dépression. L'étendue de cette partie saillante varie entre un cinquième et un sixième de la périphérie de l'ovale. L'existence d'une région saillante de Tovoide ovulaire se remarque sans difficulté si l'on jette les yeux sur une préparation d'œufs vivants non comprimés. La forme de l'œuf rappelle celle du globe de l'œil, la saillie répondant à la cornée oculaire; j'appellerai cette saillie la région parapolaire de l'œuf et le cercle parallèle qui la délimite et suivant lequel règne un léger étranglement de l'ovoïde sera le cerde parapolaire. Ces particularités se voient encore fort bien sur des œufe traités par l'acide osmique ou l'acide nitrique et conservés par la glycérine, à la condition que l'on ait évité avec soin de comprimer les œufs par le couvre-objet (pi. X, fig. 6).

Ce qui permet de reconnaître assez facilement l'existence de la région parapolaire sur le vivant, c'est que le contour de l'œuf, dans les limites de cette zone, est un peu plus brillant et que le vitellus s'y montre un peu moins transparent, comme si, dans les limites de cette région, la substance ovulaire était

74 EDOIARD VAIS BENEDEN.

un peu plus réfi-ingente et un peu plus opaque (pi. X, fig. 26).

Le cercle parapolaire se distingue non seulement à la coupe optique de l'œuf, à raison du sillon ou de la dépression qui règne suivant cette ligne, mais aussi à la surface de l'œuf^ par suite des légères différences que paraît présenter le vitellus, considéré dans la région parapolaire d'une part, le reste de l'œuf d'autre part. H est inutile de dire qu'à raison des positions diverses que prennent les œufe sur le porteobjet, chacun d'eux ne montre pas à l'observateur les particularités que je viens de signaler; mais cependant, à raison de leur forme ovoïde, la plupart des œufs se placent de préférence de faç^n à ce que leur grand axe soit parallèle à la sor&ce du porte-objet.

Quand on examine les œufe vivants, on remarque tout d'aboi^d, que le vitellus présente une couche corticale plus claire et mi noyau médullaire plus sombre (pi. X, fig. 14, 25 et 2()); la masse médullaire est excentriquement placée et se trouve toiyours plus rapprochée du pôle d'imprégnation que du pôle neutre (pi. X, fig. 14, 25 et 26). Bien loin d'être centi-ale et d'êti-e enveloppée de toutes parts par la couche corticale, la masse médullaire paraît s'étendre jusqu'à la surface de l'œuf, dans tout« l'étendue de la région pan^olaire (fig. 25 et 26). lia couche corticale revêt la masse médullaire suivant tout Thémisphère neutre; elle se prolonge jusqu'au cercle pîU'apolaire. Elle s amincit assez brusquement en appnH'hant de cette ligne limite et semble s'y terminer pai* un lH>ni {ûg, 25). I^a couche corticale a donc la forme générale d'une calotte appliquée i>ar sa concavité sur la masse méilullaii'e qui. de tout le ixnirtour de la région parapolaiiv. s'étend à l'intérieur du vitellus. 11 s'en faut cependant que la masse méiiuHaire se présente avec des caractères uniformes dans tiHite son étendue (fig, 14 et 26); à sa périphérie elle est moins Si>mbiv qu'à son milieu, de sorte que, dans la masst* méilullaiiv mèuu\ l'on innit distinguer vague* ment un novau plus iilxscur et une zone iwiphérique qui, interiKfcsêt* entiv ce noyau et la couche corticale de l'œuf,

HEiailiftCHES SUR LA FKCOXUATItlN. (5

constitue une aorte de couche intermédiaire à limites vaguement indiquées. C'est cette couche intermédiaire qui conflue & la smface de l'œuf dans toute l'étendue de la région parapolaiie.

Les différences entre ces diverses parties du vitellns sont légères; les coucha passent, sans ligne de démai'catioQ bien nette, de l'une à l'autre; dans les différentes zones la constitution du vitellus ne présente que de légères variations; aussi n'est-ce qu'en se servant de grossissements faibles que les particularités que je signale, se reconnaissent sans grande difficulté.

Dans les préparations à l'acide osmiqne, coloriées par le picrocarmin, comme dans celles qne l'on obtient en montant dans la -glycérine des œnfs durcis par l'acide nitrique et colorés par te cannin boraciqne on la fiichsine, les différences sont encore perceptibles; sons l'influence de l'acide osmique ]b conche corticale de l'œuf prend une teinte plus sombre que la masse médullaire.

Le vitellus e;ïanûné tlans l'œuf frais se fait remarquer par son apparence^t^c^etée (fig. 12, 13, 14) .- des taches circulaires, plus grandes dans la masse médullaire que dans la couche cwticale se détachent en clair dans le fond grainileux du vitellus. Qnand on traite par l'acide osmique et le picrocai'min, Ton distingue deux sortes de taches : les unes délimitées p&r un caûtour très net se montrent colorées en rose pâle (pi. X, tiig. 1 & 6); elles sont dues à la présence dans le vitellus de CorpB arrondis, doués de propriétés chimiques particulières et remarquables par une affbiité marquée pour le picrocarmin; je les désignerai sous le nom de sphères hyalines. Les autres .apparaissent comme des taches aiTondies, dont les contours très pâles sont difficiles à voii'; elles prennent une teinte jaone-verdâtre, t^uidis que les sphères hyalines se teintent en rose (pi. X. fig. 6); je Its appellerai les gouttelettes hmogèties.

EDOrA&D VAN BENEDE».

Ce qui reste (iu vitellus, si par l'imagination l'on ét'ai'te l sphères hyalines et les gouttelettes homogènes, c'est une snb-~ stance claire, finement ponctnée, et fortement châtiée de corpuscules rêfringpnts et hriUants. Cette substance forme k la périphéi-ie de l'œuf une conche continue et & son intérieur un système de lames, de puissance variable, anastomasé^s entre elles, qui remplissent complètement lee espaces laissés entre les sphères hyalines et les gouttelettes homogènes. Le microscope permet de distinguer claii-ement les corpnseules réfringents empâtés dans une substance fondamentAle clai à laquelle nous réservons le nom de protoplasme ovalai Le protoplasme de l'œuf tient donc en suspension des i ments figurés de trois catégories : les sphères hyalînea, gouttelettes homogènes et les corpuscules réfringents.

Indépendamment de ces éléments qui ne font jamais défeut ou rencontre parfois des éléments accidentels, dont il i question plus loin.

iéfeut

se^H

Sphères hyalines. — Dans l'œuf vivant ces sphères apparaissent, nous l'avons déjà dit. sous l'apparence de taches claires, arrondies et à contours fort peu apparents. Si l'on écrase les œufs, dans un liquide indifférent, dans le liquide ca'iitaire de l'ascaride ou dans le sérum artificiel de Ki-onecker, le vitellus ge décompose partiellement eu corps clairs, transparents et d'apparence homogène, que l'on peut voir (»)niplétement isolés. Ces corps présentent alors une forme sphérique ou ovoïde, et un contour très pâle, mais bien net.

Si l'on soumet des œufs vivants à l'action de l'acide osmique h 1 "/o pendant un tpmps très court, si aussitôt après on remplace l'acide par du picrncarmm et si, après avoir laissé agir pendant 24 heiu'es. on dépose sur le bord de la lamelle des gouttelettes de glycérine picrocamiinatèe, on obtient, au bout de quelques joui's. de fort belles préparations. Elles montrent, dans fe, masse du vitellus légèrement colorée en jaune, indépendamment de la vésicule germinative fortement colorée en rouge, des globes sphéi'oidaux faiblement teintes (

^s d'un beaj^H

rose (pi. X, fig. 6). Ce rose passe au bran après quelques mois. Ces globes présentent un contour bien accentué ; ils ne sont ni granuleux, ni même ponctués ; ils paraissent constitués d'une substance parfaitement homogène et assez réfringente. L'on distingue cependant dans chaque sphère le plus souvent une, quelquefois deux ou trois taches circulaires, claires, autour desquelles la substance de la sphère est notablement plus sombre. Ces taches paraissent dues à des vacuoles de volume variable, creusées dans la substance des sphères et remplies par une matière, peut-être liquide, qui se distingue, entre autres particularités, par une moindre affinité pour le picrocarmin. La grande vacuole est souvent excentriquement placée. H est. facile de s'assurer, par l'examen des préparations dont il s'agit, que les globes colorés en rose sont en général plus volumineux dans la masse médullaire que dans la couche corticale du yitellas. On trouve cependant les uns à côté des autres des globes de volumes fort différents : les plus petits apparaissent sous la forme de globules dépourvus de vacuole. On rencontre toutes les transitions possibles entre ces corpuscules colorés et les globes à une ou à plusieurs vacuoles. Quand il y en a plusieurs, presque toujours l'une d'elles est beaucoup plus volumineuse que les autres. H est rare que la vacuole occupe le milieu même de la sphère : le plus souvent elle est excentriquement placée et dans l'anneau périphérique coloré, qui entoure la vacuole principale, on distingue la ou les vacuoles accessoires.

Gouttelettes homogènes. — Indépendamment des globes colorés en rose que nous désignons sous le nom de sphères hyalines^ à raison de l'apparence qu'ils présentent sur le vivant, on distingue dans les préparations au picrocarmin des goutelettes homogènes, de volume variable. Les unes sont arrondies, les autres polyédriques; elles ne prennent pas du tout la matière colorante et elles ont pour contours les lames ponctuées formées par le protoplasme ovulaire. H semble qu'il s'agisse ici de vacuoles creusées dans le protoplasme et rem-

EDOCARD VAN BENEOEH.

plies d'un liquide. Je ne connais pas de méthode, si ce n'e le traitement par l'acide osmique et le picro-carmin, qnî montre bien la distinction qu'il y a lieu de faire entre les sphères hyalines et les gouttelettes homogènes du vitellos.

lordH niett^^

Quand on examine les mêmes reuft durcis par 1' nitrique à 3 "/o, soumis ensuite à l'action des alcools et coloi par le carmin boracique ou la fuchsine, ou observe dans vitellus des tâches claires, homogènes, parfaitement incoloi les unes à contours très pâles, les autres un peu miet délimitées. Elles sont plus volumineuses dans la masse médullaire. D s'agit encore là bieu certainement des sphères hyalines et des gouttelettes homogènes; mais il est difficile de les distinguer les unes des autres. Elles ne montrent aucune affinité, ni poiu- le carmin lioracique, ni pour les couleurs d'anhiUne (pi. Xin. fig. 7ft). Dans les prépai-ations fitites en traitant les (pufs par l'alcool au tiers, puis par l'alcool à 70. en colorant pai' le carmin boracique et montant dans ta glycériue, les sphères sont très peu apparentes : eU< ne prennent pas du tout la matière colorante; tout le vitelll parait tbmié d'une masse granuleuse et réticulée; tiiiguo cependant les grandes tâches claires que l'on voit le vi>Tinl et qui sont dues à la présence des sphères h; et des gouttelettes homogènes (pi. Xllï, fig. 75).

Avant d'aller plus loin je dois dire nn mot des modificatii que subissent les sphères hyalines api-ès l'imprégnation, préparations À l'acide nsmique colorées par le picro( peuvent seules nous renseigner A cet égard, car aucune autre méthoile ne peniiet de les distinguer des gouttelettes homo- K^nes, avec le«N|neUes elles se confondent en apparence, quand on examine l'œuf >iva«t.

Les sphères liyalines diminuent de Tolonie; elles deviennent ptik) i^fi-ingentes; leur tonne devïeui irrégnliére: elles devit mut ntufluent4%i; elle^ tiitiiO^ent par di^pantitre complètemeol bi«u Umgteintts «v»it l'élimination da premier globale pol on n'en distiuffoe dèjA plus de ti-a^-es. Tandis que les sph^

RKi;jn:nt:iiF.s sir i.a FÉco^nATlll^.

j>erdent de plus en plus de leur importance, les gouttelettes homogènes s'éteudent; elles deviennent çt et là énormément volumineuses;- peut-être aussi leur composition chimique se modifie-t-elle. En même temps qu'elles snbissent cette sorte de dégénérescence qui, à en juger par la réfringence qu'elles' acquièrent, pourrait faire supposer qu'elles se transforment en graisse, les sphères hyalines subissent une sorte de concentration vers la vésicule germinative, autour de laquelle elles se groiQient en une masse obscure; cependant on ne trouve pas seulement les sphères dégénérées autour du noyau de l'œuf; on en voit aussi dans les lames protoplasmiques qui séparent entre elles les gouttelettes homogènes. A raison de lu réfringence qu'acquièrent les sphères en voie de dégénéi-escence, les parties de l'œuf où elles s'amassent se montrent plus obscures que celles qui en sont dépouiTues. C'est tout d'abord la couche corticale du vitellus qui s'éclaircit, ce qui résulte de la concentration des sphères autoui' de la vésicule gei-rainative. Tantôt cette concentration se fait uniformément, auquel cas toute la périphérie du corps ovnlaire se trouve débarrassée en même temps de sphères hyalines ; ces éléments réunis au milieu du vitellus y constituent un noyau obscur arrondi; tantôt la concentration se fait irrégulièrement et l'on voit alors le noyau central se prolonger en un certain nombre de rayons obscurs qui, en quelques points, peuvent atteindre la surface de l'œuf. Le noyau sombre qui reiiterine la vésicule germinative diminue rapidement de volume; les rayons qui en partent deviennent de moins en moins apparents et tout le vitellus finit par s'éclaircù'; la dissolution des sphères hyalines en est la cause.

n est à remarquer que le corps réfringent du spermatozoïde prend peu de temps, après la pénétration dans le vitellus, une forme arrondie, ovale ou même sphéroïdale. Ce corps présente alors une apparence très semblable k celle d'une sphère hyaline en dégénérescence. Quand, par suite de sou épaississement, la couche périvitelline s'oppose k la pénétration da carmin dans le vitellus, les sphères hyalines ne se colorent

plus ni en rose ni en brun, mais en jâune. Il en est de même du corps réfringent du zoosperme. C'est probablement la présence des sphères hyalines dans le vitellus et leur ressemblance avec le corps réfringent du spermatozoïde, qui ont fait croire à plusieurs auteurs, à Meissner (22) en particulier, qu'il entre plusieurs spermatozoïdes dans le vitellus. Tous ces éléments réfringents, aussi bien ceux qui à un moment donné font partie du vitellus que celui qui existe dans le zoosperme, ont été pris pour de la graisse. De là l'opinion erronée que les zoospermes disparaissent dans le vitellus par dégénérescence graisseuse et qu'il en entre plusieurs.

Peu de temps après la pénétration du zoosperme les sphères hyalines ont complètement disparu et le vitellus est devenu plus clair : on n'y distingue plus alors, indépendamment des grandes gouttelettes homogènes, que les corpuscules réfringents disséminés dans les trabécules protoplasmiques, interposés entre les gouttelettes. L'aspect de l'œuf a complètement changé.

Corpiiscides réfringente. — La substance vitelline interposée entre les sphèi^s et les gouttelettes, aussi bien que la couche continue de cette substance qui constitue le revêtement superficiel du coi-ps oculaire, sont fortement chargées de corpuscules réfringents. Ces corpuscules sont de volume très variable : ou tiH)uve toutes les tmnsitions possibles entre de petits graimles punctiformes et des corpuscules mesurant jusques 0,007 à 0,009"".

lieur forme est tantôt ciR^ulaire, tantôt ovâlaire, tantôt allongée eu bâtonnet; souvent elle est irrégulière. Ils sont très brillante et présentent des reflets veMâtres. Us ne l>arai8seut [uir homogènes, mais plutôt punctués, comme s*ils ét^uent de i>etits grumeaux de granules punctiformes agglutinés imr un ciment de même réfringence que les granules eux mêmes. Us conservent fort bien, dans les préparations À Tacide uitinque* montées dans la glycérine, les caractèivs qu*ils présentent sur le vivant. 11 en est de même.

au début, dans les préparations à Tacide osmique montées dans la glycérine. Mais avec le temps ils perdent dans ces dernières préparations leur aspect primitif, ils se résolvent en petites granulations. Ils ne se colorent pas en noir par Tacide osmique; ils ne se dissolvent pas dans l'alcool, quand" ils ont été soumis au préalable à Faction de l'acide nitrique ; mais dans les œufe montés dans la glycérine, après avoir été soumis directement à l'action de l'alcool et colorés par le carmin boracique, on ne les retrouve plus. H en résulte que les œufe préparés de cette façon deviennent relativement transparents. Us disparaissent également quand on monte dans le baume, quelque soit d'ailleurs la méthode employée pour la préparation des œufs. Dans la couche corticale du vitellus ces corpuscules sont souvent allignées dans une direction radiaire; ils contribuent à donner à l'œuf la striation radiée dont nous parlerons plus loin (pi. X, fig. 6).

Protoplasme. — Si l'on écarte par l'imagination les sphères hyalines, les gouttelettes homogènes et les corpuscules réfringents du vitellus, il reste une charpente réticulée, un système de couches, de lames et de poutrelles anastomosées en un réseau; elles sont constituées par une substance finement ponctuée et forment ensemble le corps protoplasmique de Tœuf. Le protoplasme forme à la périphérie une couche continue et ininterrompue; de sa face interne se détachent les lames et les poutrelles qui s'anastomosent entre • elles de feiçon à cii'conscrire des espaces d'étendue très variable, que remplissent les éléments figurés et les gouttelettes homogènes du vitellus. Le réseau protoplasmique se voit avec une parfeite netteté dans les préparations qui font disparaître les sphères hyalines et les corpuscules réfringents : en montant dans le baume des œufs durcis par l'acide nitrique, ou même en montant dans la glycéiine des œufs traités directement par l'alcool, voire même par l'acide nitrique, on distingue parfedtement le réseau. Cependant dans les préparations à la glycérine d'œufs durcis par cet acide, les corpuscules réfrin-

gents restent fort apparents; à raison même de lear réfraof liilité ils attirent tout d'abord l'attention et ils cachent tout an moins eu partie le caractère du protoplasme. Cependant un examen attentif de semblables préparations permet de reconnaître que les corpuscules réfringents sont assez nniformémeut répandus dans toutes les parties du réseau; qu'on les trouve non seulement dans la couche sarcodique superficielle, mais aussi dans les trabéeules qui séparent entre elles les gouttelettes et sur le pourtour de la vésicule gerniinative (pi. XIII, fig. 78). Les figures 75 et 80 de la même planche montrent l'apparence du réseau tel qu'il apparaît dans des œufe traités par l'alcool au tiers.

Cette composition i-éticulée du protoplasme, qui se maintient pendant quelque temps après l'imprégnation, <lépend donc de la présence dans le corps protoplasmique de l'œuf d'un gi-and nombre de vacuoles d'étendue variable. Ces vacuoles sont occupées on bien par des éléments figurés et isolables, tels que les sphères hyalines et les corpuscules réfringents, ou bien par des gouttelettes homogènes probablement liquides. Je croîs ne pas me tromper en cousidérant ces vacuoles creusées dans la substance prot-oplasmique et occupées par des produits de l'activité formatrice du protoplasme ovulaire, comme parfaitement comparables aux espaces intracellulaires, remplis d'un liquide aqueux dans les cellules végétales, d'une substance de consistance gélatineuse dans une noctiluque ou un Actinosphœrium, la cellule axiale d'un Dîcyémide, les cellules endodermiques des tentacules des hydroïdes, les cellules du tissu propre de la notocorde des vertébrés, par de la graisse dans une cellule adipeuse jiroprement dite ou toute autre cellule en voie de dégénérescence graisseuse.

Le réticulum est extrêmement irrégulier dans. les œufs A' Ascaris megahcephala, non seulement à raison des différences énormes que l'on constate dans l'étendue des vacuoles, mais aussi parce que leur forme varie considérablement : elles sont tantôt arrondies, tantôt polyédriques, tantôt tout à fait irrégulières. L'épaisseui- des trabéeules protoplasmiques varie

aussi beaucoup : certaines lames sont d'une telle ténuité qu'examinées aux plus forts grossissements, elles apparaissent comme de simples lignes; d'autres sont au contraii-e assez puissantes. Aux points nodaux du réticulum on observe d'habitude des amas étoiles de protoplasme; leur forme et leur étendue varient; ils se continuent dans les lames et les poutrelles. Les vacuoles sont-elles circonscrites de toutes parts par des couches protoplasmiques complètes? Constituent-elles des loges fermées? Je ne suis pas en mesure de répondre à cette question, qui n'a d'ailleurs qu'une importance fort secondaire.

Si l'on examine avec soin, en se servant de grossissements suffisants (Obj. 1/18 homogène de Zeiss) et en éclairant au moyen de l'appareil de Abbe, le réseau que je viens de décrire, on constate que la substance protoplasmique est partout manifestement ponctuée. Dans les plus minces lamelles on ne distingue parfois qu'une rangée de ponctuations; dans les trabécules plus épais on en voit deux ou plusieurs courant d'habitude parallèlement les unes aux autres.

Les points sont réunis entre eux par des lignes d'une extrême ténuité : il semble que les granules punctiformes sont enfilés sur des filaments ou plutôt que les grains ne sont que des renflements parfois équidistants de fibrilles moniliformes.

La substance protoplasmique se constitue seulement en partie de ces fibrilles ; entre elles doit exister une substance interfibrillaire. En effet, quand deux ou plusieurs fibrilles moniliformes courent parallèlement les unes aux autres, on distingue toujours entre elles des espaces qui ne peuvent être vides. On remarque parfois alors, que les grains équidistants se correspondent dans les fibrilles voisines, d'où résulte pour le faisseau une striation transversale manifeste. D'autre fois cette régularité n'existe pas. Je n'ai jamais pu voir d'une façon bien manifeste si les grains correspondants de fibrilles voisines et parallèles entre elles sont reliés entre eux; mais les détails de structure que révèle l'étude du protoplasme constitutif du

œrps des spermatozoïdes me porte à croire qa'il en est amsi daas le protoplasme ovnlaire, qae les grains ne sont qne les nœuds an niveau desquels les fibrilles s'anastomosent entre elles; en d'antres termes, que la charpente protoplasmique consiste en un treillage dont les mailles sont occupées par une snbstance interfibrillaire, tandis que les points de jonction des fibrilles constitutives du treillage sont de petites nodosités apparaissant sons forme de granules punctiformes. H est incontestable cependant, que, suivant certaines directions, les éléments constitutife du treillage présentent des dimensions plus considérables; il en résulte l'apparition de fibrilles différentiées, souvent rectilignes, que l'on peut poursuivre parfois sur une grande longueur.

C'est surtout suivant la direction des rayons de Tœuf que ces fibrilles apparaissent très manifestement; ce sont elles surtout qui déterminent la striation radiaire très apparente de l'œuf non fécondé. Les stries sont surtout nombreuses & la périphérie du vitellus; mais il en est qu'on peut poursuivre très loin dans l'intérieur de l'œuf. J'ai représenté planche Xm, figure 79, les fibrilles radiées du vitellus d'un œuf observé an moyen du 1/12 homogène de Zeiss. J'ai laissé intentionnellement de côté l'indication du réseau protoplasmique. Dans mon opinion ces fibrilles ne sont que des accidents du treillage protophusmique. Ijes grains sont plus volumineux suivant ces directions et ils sont réunis entre eux par des fibrilles plus épaisses.

Si Ton examine la surface de l'œuf au 1/18® homogène, de façon il voir de tace la couche sarcodique périphérique du vitellus, ou distingue la même appai*ence ponctuée (pi. X, flg. 10) et Ton iTconnait fort bien i^à et là que les grains sont réunis entre eux par des filaments excessivement tenus. Parfois on distingue une ftl)rille isolée, piufois des groupes de trois, quatre ou mènui d*uu plus grand nombi-e de fibrilles parallèles. On voit souvent aussi dans un même district deux systèmes de strit^s se ooui>iint perpendiculaiivment ou obliquement. Aux pointas d*entrecn)isoment se trouvent les grains. On croirait

BECHERCHES SIR L,\ FEC0I\I)AT10>. S.'j

voir des hachures régulières faites par un dessinateur ou par un graveur habile; les grains sont pai'faitement équidistants et l'image on ne peut plus régulière. Mais il est loin d'en être toujouis ainsi : en beaucoup d'endroits les grains sont disséminés sans ordre apparent et l'on ne parvient pas à voir les fibrilles qui les réunissent entre eux. Les fibrilles sont le plus souvent rectilignes; mais pas toujours. C'est ainsi que sur le poui-toar des vacuoles les grains sont souvent allignés en courbe et même, dans les amas protoplasmiques nodaux et dans la couche sarcodique superficielle du vitellus, l'on distingue des lignes incurvées, brisées et même parfois

Dans la couche superficielle du protoplasme on peut voir, même sur le vivant, les fibrilles moniliformes radiairement dirigées; les pi-éparations à l'acide osïnique sont parfois aussi suffisamment démonstratives à cet égard. Mais il est à remarquer que la striation radiaire que l'on observe déjà, en se servant de grossissements relativement faibles, le huit de Hartnark par exemple, dépend principalement de ce que, dans la couche corticale de l'œuf, les corpuscules réfringents sont disposés çà et là en séries plus ou moins régulières, dii'igées suivant le rayon de l'œuf. Il est probable que l'existence de ces séries radiées est le résultat de la structui'e radiaire du protoplasme lui-même et, au 1/18'^ homogène, l'existence de fibrilles protoplasmiques radiairement dirigées est des plus manifestes.

Éléments accidentels d%i vitelhts. — L'apparence du vitellns dajis les œufs également murs, provenant d'une même femelle, est à peu près identique. Mais d'une femelle à l'autre on trouve de légères différences, quant au nombre et au volume des sphères hyalines et aussi à la quantité de corpuscules réfringents disséminés dans le protoplasme. D'après cela le vitellus est plus ou moms obscur. On ne distingue pas non plus avec la même facilité, dans tous les œufs, les pôles ovulaîres, les limites de la région parapolaire, les différences

H6 FJlOI\RD VA> BE!«EDE>.

entre la conche corticale, la zone intermédiaire et le novan mérlnllaîre. Mais de plus j'ai rencontré dans tous les œufe de certaines femelles des éléments vitellins tout particuliers, qui d'iiabitmle font complètement défiiut. Je désignerai ces éléments sous le nom de plaques à bâtonnets: Taspect et les dimensions de ces éléments sont éminemment variables.

A première vue on ne disîingue que des tîgelles ayant la même réfringence que les corpascules réfringents dont il a été question plus haut et qui toujours coexistent avec les jylaques à bâtonnets (pi. X, fig. 11). Ces tigelles sont tantôt courtes, rectilignes, tronquées à leurs extrémités; d'autre fois beaucoup pins allongées et terminées en pointe soit à un de leurs bouts, aufiufîl cas ils ressemblent à des épingles, soit plus rarement A leurs deux extrémités; d'autre fois ils sont incurvés, en forme de virgule ou de croissant; le plus souvent ils sont accouplés, de façon à simuler de petits compas à branches tantôt droiteiî, tantôt courbes et formant entre elles un angle A ouverture très variable. Parfois les deux pointes du compas à branchiîs incurvées se rapprochent et alors l'image rappelle VJigiie.ment celle d'un étrier. H arrive aussi que l'on trouve trois tigelles réunies entre elles par leurs extrémités et délimitant un esptice triangulaire. En examinant avec attention ces élém(»nts isolés, à la suite de l'écrasement des œufs, on remarque», que ces tigelles réfringentes constituent toujours le rebord saillant d'une petite plaque pâle, limitée par un contour ti'ès pcMi apparcmt. Ces petites plaques minces ont d'habitude un contour triangulaire, qu'elles soient planes ou incurvées. I^intôt (»lles sont bordées d'un côté seulement, tantôt de deux côtés, tantôt de trois côtés. Il semble que ces éléments formés du vit(»llus se développent aux dépens de corpuscules réfringents oïdinaires, de forme ovoïde et aplatis.

l/amin(*isscMnent, souvent acc<)mpagiié d'une incurvation du corpuscule et d'un changement de foime, porte tantôt sur le m\\m\j tantôt sur un bord, le plus souvent à la fois sur le militai et. sur un bord. Il en résulte que la substance réfringiMito de la placiue est rejetée à la périphérie du corpuscule

RECHERCHES SIR LA FÉCOND ATIOiN. 87

transformé, soit sur tout le pourtour, soit d'un côté seulement, soit de deux côtés. Cette substance constitue alors des épaississements marginaux d'une lamelle et suivant la forme affectée par la plaque, ils se présentent sous des aspects divers que nous avons comparés à des bâtonnets, des épingles, des croissants, des compas, des étriers, des triangles, etc.

Je ne sais à quoi il faut attribuer l'apparition accidentelle dans le vitellus des plaques à bâtonnets. Je ferai remarquer que j'ai observé ces éléments chez des femelles parfaitement fécondées et chez lesquelles les œufs se développaient tout à fait normalement.

Structure radiaire du mtellus. — Avant de quitter le vitellus je dois attirer encore l'attention sur une particularité intéressante, facile à observer, tant sur les œufs frais que dans lés préparations permanentes à la glycérine ou au baume. Le vitellus montre dans toute son étendue, mais d'une manière beaucoup plus apparente à sa périphérie, une structure radiaire. Les rayons convergent vers le centre de figure de l'œuf. La vésicule germinative n'occupe pas toujours ce centre, tant s'en &ut. Sans être jamais refoulé à la périphérie, le noyau est souvent très excentriquement placé. Il ne semble pas que la position de la vésicule germinative exerce aucune influence sur la direction des stries. La structure apparaît non-seulement dans l'hémisphère neutre, mais aussi dans la région parapolaire. H n'est pas facile de se rendre compte tout d'abord de la cause de cette apparence radiée, que l'on remarque déjà à de faibles grossissements. Mais, en y regardant de près, on constate que fréquemment les corpuscules réfringents sont allignés en séries radiaires et que d'autre part les stries protoplasmiques, que j'ai attribuées à la présence des fibrilles moniliformes, dont le protoplasme ovulaire est partiellement formé, sont en majeure partie radiairement dirigées. H est probable que l'allignement des corpuscules réfringents n'est que le résultat de la structure radiée du protoplasme. Comme je l'ai dit, c'est surtout dans les préparations alcooliques à la

glycérine ou dans les œufs montés dans le baume que la structure fibriUaire du protoplasme se montre le plus nettement. Sur le vivant cette structure est en partie cachée par les corpuscules réfringents du vitellus. Cette structure radiée du vitellus est tout à fait distincte des phénomènes de structure qui apparaissent dans le protoplasme au moment de la division des noyaux.

J'ai le premier signalé cette structure radiée du vitellus dans les œufs de VAsteracunMon ruhens. Je Tai constamment observée dans les œufs mûrs du Lapin, aussi bien avant la fécondation qu'après la formation des pronucleus et jusqu'au moment où l'apparition d'une étoile, à chacun des deux pôles des pronucleus conjugués, annonce l'imminence de la division de la première cellule de l'embryon. Depuis lors l'attention a été attirée sur cette même particularité, observée dans l'œuf des Echinides par Flemming. Elle a été probablement aperçue par plus d'un observateur sur les œufs d'autres animaux; il est probable que Kupflfer l'a constatée dans les œufs des Ascidies ; mais cette structure radiaire du corps vitellin a été confondue avec les figures radiées bien connues qui apparaissent soit autour des pronucleus, soit au moment de la formation des globules polaires, soit quand le vitellus va se diviser pour donner naissance aux deux premiei-s globes de segmentation.

Disque polaire et bon^um d'imprégnation. — J'en anive maintenant à la description de cette partie de l'œuf qui avoisine le pôle d'imprégnation et qui occupe le milieu de la région parapolaire. H est facile de constater sur la plupart des œufs mûrs l'existence de particularités de structure tout autour du pôle d'imprégnation. Mais les diflférentiations dont il s'agit sont beaucoup plus apparentes pendant la période de maturation, qui s'écoule depuis le moment où, détaché du rachis, l'œuf se trouve complètement libre dans la portion terminale de l'ovaire, jusqu'à Tinstant où, arrivé à l'extrémité inférieure de l'oviducte, il va entrer en contact avec les zoospermes. Ces phénomènes de maturation, abstraction faite des change-

ments que subit la forme générale de Tœuf, consistent principalement dans les diflférentiations de la substance vitelline au pôle d'imprégnation. C'est pourquoi je rattacherai à la description du disque polaire et du bouchon d'imprégnation l'étude de l'ensemble des changements que l'œuf subit en passant à travers l'oviducte.

Les œufs retirés de la portion inférieure de l'ovaire présentent une forme différente de celle qu'ils affectent dans l'oviducte. Ces œufs ont la forme de massues : renflés à une extrémité en une sorte de tête, ils se prolongent vers l'autre extrémité en une queue qui présente à peu près dans toute sa longueur la même largeur (pi. X, fig. 1.) La queue se termine par un bout arrondi. La limite entre la tête et la queue est souvent marquée par un étranglement circulaire qui devient plus apparent dès que l'axe de l'œuf commence à se raccourcir (fig. 2). Le vitellus présente déjà la même composition que dans l'œuf mûr : les sphères hyalines, les gouttelettes homogènes, les corpuscules réfringents et même le protoplasme ovulaire, ne subissent pendant la première période de la maturation aucun changement. Cependant, la structure radiaire du vitellus affecte ici une apparence particulière qui se rattache à la forme différente des œufs. Les stries radiaires semblent converger non pas vers un point central, mais vers un axe central. Dans la queue les trainées linéaires de coiTpuscules réfringents, vues à la coupe optique, au lieu d'être normales à la surface sont au contraire très obliques et quand on les observe, en installant le foyer du microscope sur la surface, la striation parait à peu près parallèle à l'axe de l'œuf (pi. X, fig. 1). Il en est à peu près de même dans cette partie de la tête qui avoisine immédiatement la naissance de la queue.

La compression établit de la façon la plus certaine l'absence de toute membrane vitelline : la couche périphérique du vitellus ne paraît guère présenter plus de consistance que le reste du corps ovulaire. Ce qui frappe surtout c'est que la substance constitutive de la queue est beaucoup plus claire,

RDOPARD VAN BENEDEN.

!S con-

colore plus également dans tonte son épaisseur : tandis sa partie profonde montre une grande affinité pour la matière colorante, sa couche superficielle reste à peu près incolore (fig. 4). Je donnerai respectivement à ces deux couches constitutives du disque les noms de coucite chromophUe et adtromyihile. La couche chroraophile est beaucoup plus santé que l'autre. Bien distinctes Tune de l'antre au stodfe représenté par la figure 4, elles passent insensiblement l'une à l'autre aux phases plus jeunes de l'évolution. A la phase représentée figure 4 on remai-que que la couche achromophile est loin de présenter partout la même épaisseur; elle est fort épaissie à son milieu, amincie suivant ses bords. L'une et l'autre montrent distinctement la striation signalée plus haut. Cette striation est due à la structure fibrillaire du disque et chaque fibrille présente dans sa longueur un certain nombre de renflements allongés équidistants. Les renflements des fibrilles voisines sont allignés les uns à côté des antres, de façon k former ensemble une ou plusieurs lignes transversales parallèles à la surface.

A mesure que le développement progresse, que la queue se raccourcit et que l'œuf approche davantage de sa forme ovoïde l'étendue du disque polaire diminue, et en même temps son épaisseur augmente (fig. 8, et 5). C'est surtout k son milieu qu'il s'épaissit beaucoup; ses bords restent plus minces. Peu à, peu il prend l'apparence d'une lentille planconvexe ou même d'une lentille biconvexe. H montre toujours sa striation caractéristique et il conserve jusqu'ici la même affinité pour les matières colorantes. Sur le vivant on remarque maintenant une saillie centrale, limitée par un contour très pâle et nn peu ■irrégulier; elle est formée d'une substance claire et hyaline, chargée de quelques granulations; on n'y distingue plus la striation. Cette saillie est d'autaut plus étendue et d'autant plus mince que l'œuf est plus jeune (fig. 8 et 9).

Dans le stade représenté flgiu'e 9 on remarque que le polaire proprement dit est aminci à son milieu et pure les figufes 8, l.î et 9 aux dessins 3 et 4, il semble que

HECIlEnCIIES Si:U LA FECONDATION.

snbstance formant saillie au centre du disque n'est autre chose que la couclie achromopliCe qui s'est peu à peu épaissie à son milieu aux dépens de ses bords. Les œufs représentés figures 8 et 9 montraient clairement que la striation du disque ne s'étend plus jusqu'à la surface même du disque ; ime mince coache superficielle se continuant sur le pourtour du disque ayec une enveloppe sarcodique (sarcode-enveloppe de Fol) que l'on constate tout autour du vïtellus est dépourvue de striation (pi. X, fig. 9). Cette couche et la sarcode-enveloppe sont, à n'en point douter, la raembi-ane vitelline en voie de fonuatîon. La saillie centrale du disque se trouve en continuité avec cette couche homogène (fig. 9). La figure 5 nous montre au œuf du même stade traité par l'acide osmique et le picrocanniu. Le disque polaire est coloré eu bruu, dans toute son épaisseur. Plus de trace de la couche achi'omatiqne. Le disque, déprimé à son centre, y est interrompu dans toute son épaisseur. L'inteiTHption centrale est occupée par une substance un peu plus claire, granuleuse et dépourvue de striation, Cette substance occupe le fond de la dépression centrale du disque où elle constitue une très légère saillie. Cette sorte de bouchon fermant l'orifice que présente à son centre le disque polaire se colore légèrement en brun; il s'élargit sous le disque, qui se reconnaît facilement à sa striation et l'on y voit des corpuscules réfringents et une sphère hyaline empâtée dans la substance du bouchon. Cette sphère se fait remarquer par une plus grande affinité pour le carmin. C'est à ce bouchon que j'ai donné le nom de bowJion d'imprégnation. Nous verrons en effet que c'est au point où le bouchon se trouve à nu, au centre du disque polaire, qu'un zoosperme vient s'umr au vitellus. Le bouchon d'imprégnation occupe l'un des pôles de l'œuf; c'est par ce seul et unique point de la surface du vitellus que la pénétration d'un spermatozoïde peut d'effectuer.

Dans les limites du disque polaire le contour de l'œuf est marqué par une ligne très nette et brillante (fig. 5). H n'en est pas de même au niveau du bouchon d'imprégnation : Eon contoui" externe est très pâle, et le plus souvent un peu

94 EDOUARD VAX BENEDEK.

irrégulier et saillant à la surface du vitellus. Si Ton soumet à la compression des œufs de ce stade, c'est invariablement par le centre du disque polaire, par le trou occupé par le bouchon d'imprégnation que se fait l'écoulement du vitellus; et si l'on observe d'une façon continue, pendant que Ton exerce sur l'œuf une pression de plus en plus forte, on voit peu à peu la substance vitelline sortir par ce point, sans que jamais il se produise rien qui ressemble à une brusque déchirure. Alors même que Ton a pris toutes les précautions possibles pour éviter la compression des œufs, Ton voit fréquemment la substance du bouchon former à l'extérieur de l'œuf une forte saillie en forme de gouttelette et l'on distingue alors, avec une parfaite netteté, l'interruption centrale du disque polaire. Le bouchon d'imprégnation remplit complètement cette interruption qui a l'apparence d'un trou ou d'un canal (pi. XI, flg. 32). Il ressort de tout ce j'ai vu que la membrane vitelline qui se développe sur tout le pourtour de l'œuf jusques et y cromprig le disque polaire s'arrête sur le pourtour du bouchon d'imprégnation : au niveau du bouchon il ne se forme pas de membrane, le protoplasme 's'y trouve à nu. La membrane vitelline présente donc au pôle d'imprégnation une solution de continuité destinée à permettre l'entrée d'un spermatozoïde, un véritable micropyle; mais le bouchon protoplasmique qui occupe le trou se continue avec la membrane vitelline (pi. X, fig. 9). Quant à la formation du bouchon d'imprégnation, voici ce que je crois pouvoir conclure des faits que j'ai observés et que j'ai spécifiés ci-dessus. La partie médiane de la couche achromophile du disque s'épaissit de plus en plus à son milieu aux dépens de sa portion marginale, qui s'amincit progressivement pour se transformer peu à peu en membrane vitelline. L'épaississement central de cette couche marche parallèlement avec l'amincissement de plus en plus marqué du centre de la couche chromophile. Celle-ci devient le disque polaire proprement dit; elle finit par s'inteiTompre à son milieu et l'interruption, dès le moment où elle apparaît, se trouve occupée par la substance achromatique qui devient le

bouchon d'imprégnation. Le seul doute qui me reste sur la réalité de ce mode de genèse du bouchon d'imprégnation résulte de ce que dans plusieurs œufs, arrivés au stade représenté figure 5, la substance du bouchon était manifestement colorée en brun, tandis que la couche achromophile, aux stades plus jeunes, ne montre aucune affinité pour les substances colorantes. Mais cette raison ne me paraît pas suffisante pour mettre en échec mon explication. Nous verrons en effet que Taf&nité du disque polaire pour le carmin, si manifeste pendant la maturation de l'œuf, cesse d'exister dès que l'œuf atteint sa maturité complète.

Avant d'aborder l'examen des caractères du disque polaire et du bouchon d'imprégnation dans l'œuf arrivé à maturité complète, je dois attirer un instant l'attention sur la composition générale de l'œuf aux stades représentés figure 3 et suivantes. La limite du disque est marquée d'habitude par un étranglement circulaire de la queue de l'ovule. De là, à la surfiuîe de l'œuf, un cercle ayant pour centre le pôle d'imprégnation et plus tard le bouchon d'imprégnation. Celui-ci occupe un orifice, également circulaire, creusé au milieu du disque polaire. La région parapolaire se trouve réduite à un anneau limité à l'extérieur par le cercle parapolaire, l'ancienne limite entre la tête et la queue de la massue ovulaire, à l'intérieur par le bord du disque polaire. Plus l'œuf approche de sa forme ovoïde, moins ces limites sont marquées ; les étranglements circulaires tendent à disparaître. Voir les figures 5 et 6. Par suite de l'enveloppement progressif de la masse médullaire par la couche corticale retendue de l'anneau parapolaire diminue.

L'on peut constater sur beaucoup d'œufe frais que Taspect du vitellus sous-jacent au disque polaire présente des caractères particuliers; d'autre part, c'est la partie centrale de la masse médullaire qui devient la plus sombre ; c'est à elle que j'ai donné plus haut le nom de noyau médullaire. Il semble que ce noyau se trouve relié au disque polaire par la partie faiblement différentiée du vitellus sous-jacente à ce disque.

«0 EDOIARI) VA^î BENEDEN.

Il (iii résulte que Tanneau parapolaire se prolonge dans l'intérieur de l'œuf en une couche intennédiaire, interposée entre la couche corticale et le noyau médullaire. Le disque polaire lui, se prolonge vers l'intérieur dans le noyau médullaire occupant la concavité délimitée par la couche intermédiaire.

Enfin le bouchon d'imprégnation occupe le centre ,du disque polaire et s'étend vers Tintérieur de façon à remplir la solution de contmuité que présente à son centre le disque polaire.

Il (îu résulte pour l'ensemble de l'œuf une composition stratifiée, d'un caractère particulier. Les strates sont concentriques au bouchon d'imprégnation, qui occupe le pôle principal de l'cDuf. Les strates, au nombre de trois, affleurent toutes à la surface : les deux internes viennent constituer superficiellc»ment des anneaux concentriques, le disque polaire et la régit)n parapolaire ; la plus externe a l'appai'ence d'une calotte hémisphérique. On pourrait compai-er l'œuf à un système de cônes (anboités les uns dans les autres.

lia vésicule germinative occupe toujours primitivement le niiliou de la couche inteiinédiaii*e ; elle confine au noyau médullaiiH» et parfois proémine dans ce dernier. Si donc l'on envisiigo. les coucher dont se compose le vitellus, on constate qut^ les strates du vitellus sont centrés vei'S un point de -la surtlice, le polo d'imprégnation. D'autre part la structure du vitt'IUis indique une composition radiaire dirigée vers le centre (h^ tigun^ de Timif.

(^uand TuMif est arrivé à maturité le disque polaire, plus n^^Ulit tMieon^ qu'aux stades précédents, est difficile à distinguer t^t cela pour tnùs misons : l** il ne se colore plus par h* pienu'armlu; 2*' s;i struotiu'e tibrillaire est devenue beaucoup moins apjvuvute; souvent même on n'en distingue plus dt* tnuM^s; il' K^\\\\\ si\ substiuice se charge de corpuscules rêtVinKeut>i» voiiv \uème do sphèn^s hyalines (pi. X, fig. 6). Si Ton se rappelle eu outiv que le dis^iue ne forme plus qu'une tn'^s loii^rt^ Naillie A la surface, que les êtnxnglements marquant les limites du ilisqui^ et de la ivgiou parapolaire ne sont plus que Nauuou^eut iuiliquêes. que le Kmchon dlmprégnation n'est

BECHEUCKES sir I.\ FliCONntTiON.

plus guère saOlant dans beaucoup de cas et que la substance qui constitue le bouchon renl'enne aussi le plus souvent des éléments figui-és du vitellus, on comprendra que pour se rendre compte de la structure de l'œuf mûr il est absolument indispensable de suivre les phases successives de la maturation. Mais quîmd on a suivi pas à pas ces modifications l'on retrouve facilement dans l'œuf devenu ovoïde les diverses particularités de sti'ueture que j'ai signalées et figurées, et telles qu'on les observe après l'action de l'acide osmiqne et du picrocarmin (fig. 6).

n est & remarquer qu'aux stades antérieurs le disque polaire et par conséquent le pôle d'imprégnation se trouvent toiyoui-s à. l'extrémité d'un petit axe de l'ovoïde ovulaire (fig, 5). Dès les premières phases du développement de l'ovoïde cette particularité est déjà manifeste. L'œuf représenté figure 2 montre déjà la transformation de la tête de la massue en un ovoïde donc le grand axe est perpendiculaire à l'axe de la queue. Au contraire, dans l'œuf arrivé à matuiité complète, le bouchon d'imprégnation se trouve généralement à l'extrémité du grand axe de l'ovoïde. Ce fait s'explique facilement si l'on admet que l'ovoïde primitif s'allonge dans le sens de sou petit axe ou axe principal et qu'il se raccourcît dans la direction opposée. L'axe morphologique de l'œuf mûr, qui se confond d'habitude avec son axe de flgnre, répond donc à l'axe primitif de l'œuf, au moment où il présente la forme d'une massue, on, si l'on veut, à l'axe de la queue ovulaire.

Le seul auteur qui, à ma connaissance, ait attiré l'attention sur l'existence de deux pôles ovulaires chez les nématodes est Anerbach. " Bei genauerer Betraâittmg zekht sick nàmlidt, dass die beUlen Poh des befmchteten Etes nicht glachwerthig sind, mdméir von vom kerein differentiell charakteristische Eigenthiimîichlceiten darhîeten, tvekJie sich emerseits auf friihere YarhiQ,^i88e v/nmiiteïbar vor U7îd wàhrenà der BefnuJitung ivriifkfiihren lassen, a/ndererseits in gesetzmassigen Bezieliwujen eum weiteren Verlaufe der Dinge sleiien, insofem der Oegenaate der bsiden Bole maassgebend imrd fiir die hesondere Ihitmchelivtigsricbtiiiigde>-eiibprecheiideiiDotter-Alschnitte.„{2) (

EDOCARD \\y BEINEDEN.

L'une des extrémités de l'œuf, l'aoteur l'appelle le pôle riem-, est un peu plus étroite que l'autre, aussi bien Ascaris nùfrovenosa qne cliez Strongylus auricHlaris; cette demièi-e espèce le ritellus y est plus clair et i chargé de granules vitellius. C'est toujours à ce pôle q trouvent les globules polab'es; c'est ce pôle qui dei reitrémité antérieure de l'embryon; c'est à ce pôle l'activité vitale est la plus grande. Mais Auerbacb n'a pas recherché jusqu'à quel point la structure du vitellus présente des difléreuces aux deux points qu'il appelle les pôles ovulaires : 11 ne s'est pas occu|)é de la constîtatiun de l'œuf antérieurement k la copulation des produits sesuels n'a-tril rien vu ni des couches qui entrent dans la composition du vitellus, ni des anneaux polaires, ni du bouchon d'inipréguation, ni du niicroi)yle. Par contre ses excellentes obser^ tions sur les phénomènes consécutils à l'imprégnation, di leurs rapports avec les pôles ovolaires, présentent le plus intérêt.

Eschricht (22) a figuré il y a bien longtemps d^à, dans deux opuscules peu connus qui me sont tombés accidentellement entre les mains, quelques-unes des phases par lesquelles passe la massue o^Tilaîre avant de devenir ovoïde.

Les figures 10 et 11, a, b, c et d m'ont vivement inl Les observations de Eschricht ont porté sur l'Ascaris lombi coides. L'auteur u'a rien signalé, ni rien figuré de ce qui rapporte aux différentiations du corps ovulaire, au voisi du pôle d'imprégnation ; mais je crois reconnaître dans dei (le ses figures (fig. 11, a et c) qu'il a constaté que la queue la massue est formée d'une substance plus sombre que la de l'œuf. Escliricht est le seul auteur, à ma eonnaissam qui ait reconnu, quelques-unes des particularités qui térisent la première périiMie de la maturation de l'œuf.

J"ai des raisons de ci-oûe que le " Dutierhugel „ signalé Selenka (13) dans l'œuf d'un Ecbinide, le Toxopnemtes gaius, et que Flemming (14) a retrouvé chez le Tox< Uvidtis i-épond à ce que j'ai ap|)elé le bouchon d'imprégnatit

ition ipré- J

RECHERCHES SliR I.A FÉCONDATION, 9!>

W. Millier (23), Calberla (24), Kuptfer et Benecke (25) ont décrit dans l'œaf des Lamproies des différentiations polaii-es qui ne laissent pas que de présenter des analogies frappantes avec le disque polaire et le bouchon d'imprégnation. Je reviendrai pins loin sur ces rapprochements que je crois pouvoir établir entre ces observations faites dans dilféreuts groupes du règne animal, et celles dont je viens de rendre compte.

«EMURANE VJTKLLINE.

Dans les nombreux travaux dont l'ovogéuèse des nématodes a été l'objet, la question de savoir si, au moment de sa maturité complète, l'œuf est entouré ou non d'une membrane viteiline a été ardemment discutée. Meissner (26) a soutenu qu'à l'instant où il se détache du rachis et même longtemps avant sa libération, l'œuf ovarien est pourvu d'une membrane distincte. Au point de sa surface par lequel il était fixé au rachis, l'œuf présentent dans sa membrane nue solution de continuité et c'est par cet orifice, que Meissner appelle un micropyle, que se ferait l'enti-ée des spermatozoïdes. L'existence de cette membrane et de son orifice micropylaire a été niée pai' la plupai't des auteurs qui, soit avant, soit après Meissner, se sont occupés de l'ovogéuèse, chez les nématodes. En ce qui conserve la présence d'une vraie membrane autour de l'œuf mûr Bagge (27), Reichert (28) et Schneider (29) partagent l'opinion de Meissner, taudis que Nelson (30), Thompson (31), Bischoff (32), Munk (33), Claparède (34), Leuekart (3.5), Auerbach (2) et Butachli (1) nient qu'il existe aucune membrane avant la fécondation. Claparède admet, il est vrai, qu'avant l'imprégnation le vitellus est entouré par une couche sarcodique plus consistante que le protoplasme sans jacent; mais il aifirrae que cette enveloppe plotoplasmlque passe insensiblement au vitellus et qu'elle ne mérite pas, par conséquent, le nom de membrane. En ce qui concerne VÀsearis niegalocephala le doute n'est pas possible r comme je l'ai dit plus haut, les œufe sont absolument dépouiTUs

(le toute membrane, non seulement dans l'ovaire, mais aussi dans toute la partie supérieure de Toviducte et le micropyle, tel que l'entendait Meissner, résultant de la rupture du pédicule qui dans l'ovaire reUe l'œuf au rachis, n'existe certainement pas.

Mais il ressort des recherches dont les résultats sont consignés dans le présent travail que les œufe subissent, pendant leur passage à travers l'oviducte, une série de changements importants et que, quand ils sont arrivés dans la partie inférieure de ce conduit, ils montrent des particularités de structure, dont il n'existait pas trace dans l'ovaire. La conclusion négative formulée si dessus en ce qui concerne la présence d'une membrane vit^lline autour de l'œuf retiré de la partie terminale de l'ovaû^e ne peut donc être appliquée l}ic et nunc à l'œuf arrivé dans le voisinage de l'utérus et tel qu'il se trouve constitué au moment où U arrive en contact avec les zoospermes. H est impossible d'arriver, par l'examen pur et simple de la coupe optique des œufs, à aucune certitude. Le contour des œufs retirés de la partie inférieure de roviducte est marqué par une ligne très foncée ; mais le vitellns est-il & nu ou bien une mince membrane se trouve-t-elle intimement unie à sa surface? H n'est pas facile de trancher cette question. Si Ton soumet à une pression croissante un certain nombre de ces œuts. l'on ne tarde pas à voir le vitellns sortir par un point déterminé de la sur&ce. Quelque soit rintensité de la pression, c'est toiqours par un point unique, et toujours par le même point, que le vitellus s'écoule; ce point répond exactement au pôle d'imprégnation. H n'en est pas ainsi si l'on traite de la même manière des œois retirés de la iK^rtion inférieure de l'ovaire ou de la moitié supérieure de l'oviducte. Soumis à la pression exeivée sur eux par le couvren^bjet. quand on soutire peu à peu le liquide qui les tient en suspension, ces œufe ou bien se dêsagcr^^nt complètement après s'ètn? étalés en une suriaoe de plus en plus étendae. ou bien plusieurs déohinues se pn>duisant simultanément, les Cléments formés du litellus s'écoulât jviir plosieui^ points

à la fois. H est donc certain qu'au moment où il est sur le point de recevoir le zoosperme qui doit le féconder, l'œuf est entouré par une couche résistante, qui n'existe pas encore au moment où il se détache du rachis ovarien et cette couche présente un point de résistance minimum qui répond au pôle d'imprégnation. La présence de cette couche périphérique résistante est encore démontrée par une autre observation. Si l'on traite de la même façon, sur une série de porte-objets placés les uns à côté des autres, des œufs de la portion terminale de l'ovaire, des œufs de la portion supérieure de l'oviducte, des œufe de la portion moyenne de l'oviducte, enfin des œufs de la portion inférieure de ce canal, soit par l'acide nitrique, soit par l'acide osmique, et si, après avoir coloré de la même manière et pendant le même temps, on substitue lentement, au picrocarmin par exemple, de la glycérine diluée, les œufs de la partie inférieure de l'oviducte restent sphériques ou ovoïdes, tandis que les autres perdent leur contour régulier; ils se rattatinent légèrement au moment où ils sont atteints par la glycérine. Lé contour des œufs mûrs n'est pas seulement beaucoup plus régulier, mais il est aussi beaucoup plus foncé, comme si leur vitellus était devenu plus réfringent.

Si l'on observe la surface des œufe mûrs (*) pendant la compression ou bien et surtout, quand après avoir exercé une pression assez marquée, on diminue tout-à-coup cette pression, on remarque qu'il se produit dans la couche superficielle du vitellus des plis très marqués dont la direction est loin d'être constante, mais qui sont on ne peut plus apparents. Ces plissements de la surface se voient aussi très bien dans les préparations à la glycérine d'œufs légèrement comprimés au préalable.

Mais les faits que je viens de citer, s'ils prouvent l'existence

(*) Le mot mûr est employé ici pour éviter la périphrase ** œuf prêt à recevoir le zoosperme » ou •* œuf retiré de la portion inférieure de l'oviducte • ou encore •• œuf arrivé U la fin de la première période de sa maturation. ^

102 EDOIARD VAN BENEDEN.

à la périphérie du vitellus d'une couche superficielle différeutiée, douée d'une ceitaine résistance et assez consistante pour donner lieu à des plis, ne démontrent nullement l'existence d'une membrane isolable et nettement séparée du protoplasme vitellin. Il n'est pas facile de trancher la question de savoir si, avant la fécondation, une telle membrane recouvre le vitellus. Ce qui n'est pas douteux, c'est que, aussitôt qu'on zoosperme ^t venu se fixer au pôle d'imprégnation, et bien avant qu'il n'ait pénétré dans le vitellus, une semblable membrane parfaitement isolable a fait son apparition. Elle se dêcole avec la plus grande facUité du vitellus sous-jacent et se soulève tout autour du pôle d'imprégnation, de façon à simuler un vern^ de montre qui serait appliqué par ses bords sur une spliùiv à grand rayon de couibure (pi. XI, fig. 35, 36, 37). 11 est certain que la formation, dans la moitié inférieure de Toviduote, d'une couche résistante à la périphérie du vitellus pivlude à rapi>arition de cette membrane vitelline. Mais raohO'vement de Tenveloppe coïncide-t-il avec l'instant où le ztHksperme vient s'unir à Tœuf ou bien précède-t-il la copalation de Tanif avei* Télément spermatique?

Oans quelques cas. rares il est vrai, j'ai observé avec certitude» dans des pi^iKiratious d'œufs mûrs ne montrant aucun xiHvspenue, et cela aussi bien sur le frais que dans des pn^ivii^titnis iH'nuanontes, des œufs montrant la membrane vitelline i^irfaitement is^dêe et si^ulevee au-dessus de la surfaiv du vitellus. Nonualeuient ivtte membrane est intimement appUquiV sur le corps vitellin. mni-seulement avant, mais aussi apnV la vN^pulatiim; mais il n'est jvas douteux que cette uuMubi^auo no se ivmplt^te inaV^^it^iriffWcii/ de la fécondation; qu'elle e^^t a^^sojt ivmpK^tement diffèreutièe jH^ur jK^voir être is^^Uv a\îU\t la ivuuiou dt\^ punluits sexuels: mais que le \l<\\^loment arlifioiol s^^ pnnluit bien plus facilement après qu'avant l'union du 5\Hv>i|vrme avec l'anif.

\^ue la formation do la membrane vitelline consiitoe un pbeuouu^ne de uu-^turati^^u et ix>u {v^ une ov>nsÀ)Qence de l'uuiMxNiîuatiou^ \via it\>^ulto a\tv evidenox- de vv &it que chez

nEciiERi;iii;s sir la i-EcoîsnATio>.

les femelles qui a'ont pas été fécondées, qui ne renfeiment aucun zoosperme dans leurs organes sexuels, tous les œufs, dans la partie supéiieui-e de l'ntenis, montrent une membrane vitelline isolable, tout comme si la fécondation avait eu lieu.

Quand on compi-ime des œufs murs, mais non encore fécondés et que, après l'expulsion d'une partie du vitellus par le pôle d'imprégnation, on diminue la pression, d'habitude l'œuf revenant sur lui-même prend une forme in'égalière; le plus souvent il ne laisse pas apercevoir la membrane vitelline; celle-ci enc()re tmie an vitellus sous-jaeent suit tous les mouvements du corps vitellin. Mais ça et là, se voit un œuf dans lequel le vitellus, au moment de la rétraction, se décole de la membrane. Dans ce c^ l'on constate généralement aussi des déchirures de la membrane vitelline. Le décolement artificiel que l'on voit quelquefois se produire, à la suite de la compression, s'observe aussi, dans des pi-éparations d'œufe frais non comprimés, par suite de l'infiltration de liquides venus de l'extérieur.

D est probable que les œnfs dans lesquels on observe ces soulèvements partiels de la membrane vitelline sont déjà altérés, probablement morts ou sur le point de mourir. Ce qui tend à le prouver c'est que l'on obseiTe beaucoup plus fréquemment ces décolements, si l'on s'adresse à des femelles refroidies depuis vingt quatre heures par exemple, que si l'on examine des renls de femelles aussitôt après qu'elles ont été retirées du cheval. Mais si le décolement indique que l'on n'a pas à faire k des œufs normaux, personne n'admettra cependant que la formation de la membrane vitelline puLsse être le résultat d'une altération port-mortem.

La circonstance que l'on peut voir une mince membrane, parfaitement isolée, dans des œufs murs de femelles fécondées, soit quand on les soumet à la compression, soit quand, par suit* d'im commencement d'altération, des liquides infiltrés ont pénétré dans ces œufs, démontre irréfutablement que la membrane vitelline se trouve déjà complètement constituée avant le moment oii s'opère la copulation des produits sexuels.

104 EDOIARI) VAIS BEiNEDÉlN.

Le fait que cette membrane se forme aussi chez des femelles stériles contribue à établir que la formation de cette membrane est un phénomène de maturation. Comme nous lavons établi plus haut la membrane vitelline manque au pôle d'imprégnation, dans les limites de cette partie différentiée du corps ovulaii'e qui occupe le centre de la région parapolaire et à laquelle j'ai donné le nom de hoiicJion d'imprégnatiof^.