C. Technique de la précipitation

Toutes nos précipitations, soit par l'alcool, soit par l’acétone, sont faites à froid. — L'alcool ou l’acétone maintenus pendant un quart d'heure dans un mélange de glace et de sel, sont versés d’un seul coup, dans la préparation diastasique également refroidie vers 0 degré. Le tout, après agitation, est rapidement centrifugé. Le liquide et le précipité ainsi obtenus sont séparés et chacun d’eux est transvasé quantitativement dans un cristallisoir. L'alcool ou l’acétone sont éliminés par le vide sulfurique, opération qui demande trois à quatre heures.

Lorsque l’alcoo! ou l’acétone est complètement éliminé on ramène avec de l’eau distillée le liquide et le précipité au volume primitif et on détermine la concentration diastasique, l’extrait sec, les cendres sulfatées, le fer et le manganèse du précipité et du liquide surnageant.

D. Précipitation de la laccase par de grandes quantités d’acétone ou d’alcool.

Voici un essai de précipitation :

Préparation diastasiqué- x. Miss es, . une partie NCÉLONE Een len As c a annee Dies a em ro deux parties

La précipitation est réalisée suivant la technique précédente.

Voici nos résultats, ramenés à 100 cm* de suc (1).

Acidité T. Mn C. D Mu en y extrait sec UD;

UD. p.100 cm* | p. 100 p. 100

Cendres sulfatées

Manganèse

Extrait sec en

en g.

en mg, p.100

Suc avant tout traitement...| 6,650/22,50 | 2,15

Précipité ramené au volume primitif par addition d’eau.| 6,600/18,350| 1,750]

Liquide ramené au volume primitif 2,50 | 0,250

Liquide + précipité ramenés au volume primitif et à parties égales 6,500

SUCr d'arbre Ale Que rer RO NU une partie

A'CÉLOT EE LR anne en re AU cinq parties.

après centrifugation, le précipité obtenu et repris par une partie d’eau, est précipité à nouveau par 5 parties d’acétone.

Voici nos résultats : (1)

Activité TM

QD Mn en y extrait sec| U. D.

Cendres sulfatées cn g. p.100 Manganèse en mg. p.100 Azote en mg. p. 100

Extrait sec en g. p. 100

Suc avant tout traitement ,...,ses.....e|7 200] 20,6/2,10 | 30

Précipité ramené au | volume primitif ....16,950| 16,9/1,510| 23,7| 2

Des précipitations avec l’alcool nous ont donné des résultats analogues et nous croyons inulile de reproduire ces expériences.

() Pour la signification des abréviations voir pages 69 et 70,

On voit d’après ces deux tableaux que la précipitation n’a pas amené de fractionnement sensible puisque l’aclivité (C. D extrait sec) d’après le tableau I passe seulement de 295 à 360 et d’après le tableau IT de 349 à 411.

L’extrait sec et la teneur en manganèse ont diminué environ de 20 p. 100, la teneur en azote a baissé de 15 p. 100.

L'activité du suc est restée sensiblement la même.

E. Précipitation de la laccase par de petites quantités d'alcool ou d’acétone.