A HD LEA QE LEUR LED ES

“se

sos segesse

….re...e

essor ae eee eg

OI AS NS Dee SePEtRee,? eee eee SRE

lier.

eee eese 00000...

ee... ece

& [] FN ca œ «

FicurE III.

On voit que cette courbe présente sensiblement la même allure que la précédente, de nouveau on peut constater une adsorption quei que soit le pH (entre 4,4 et 9,7) mais toutefois très variable selon le pH.

ETUDE DE L’ADSORPTION EN FONCTION DU TEMPS ET EN FONCTION DE LA QUANTITÉ D’ALUMINE B.

Connaissant un ensemble de conditions suffisantes pour réaliser une adsorption complète nous avons cru intéressant avant d’étudier l’élution, de faire des essais d'absorption soit en fonction du temps, soit en fonction de la quantité d’adsorbant utilisé.

Ho

a) Adsorption en fonction du temps. — Dans les deux essais précédents, l’adsorption complète a été réalisée, pour un suc purifié, à un pH déterminé, après une agitation mécanique d’une heure.

Nous avons fait avec ces mêmes sucs et au pH convenable des essais d'adsorption en réduisant le temps d’agitation. Pour un suc dialysé dont la concentration diastasique était de 4.100 pour 10 cm, l’activité du liquide surnageant est devenue nulle au bout de vingt minutes d'agitation avec la suspension d’alumine B (voir page 130).

D'autres essais nous ont donné des résultats analogues —— un contact de vingt minutes était suffisant pour réaliser l’adsorption intégrale.

b) Adsorption en fonction de la quantité d'alumine B.

- L'étude de l’adsorption en fonction de la quantité d'alumine B revient en somme à l'étude de la valeur d'adsorption (A. W.) qui est, pour la préparation diastasique déterminée, le nombre d'unités diastasiques adsorbées par un gramme d'adsorbant. La suspension d'alumine B, utilisée est celle qui nous a servi précédemment, ses caractéristiques étaient les suivantes

EXTRAITS 60 TUTO ES PEN 4 g.,560 par litre Ac A DES TCRICINALION SN RUES TES 3 g.,300 par litre

A. W. est fonction, pour une préparation diastasique déterminée, de la quantité d'adsorbant, ou ce qui revient au même, pour une quantité déterminée d’adsorbant de la quantité de préparation diastasique utilisée.

Nous avons effectué des adsorptions au pH optimum 44 en utilisant des quantités double et triple de préparation diastasique, et en maintenant fixe la quantité d'alumine B.

Voici les résultats trouvés.

1, — 10 em° suc purifié adsorbé par 10 Cm suspension alumine au pH

Temps d’agitation : 30° adsorption 100 p. 100 — A.W, — 140,

Il, — 20 cm8 suc purilié adsorbé par 10 cm? suspension alumwine au pH

Temps d’agitation : 30° adsorption 100 p. 400 — A.W. — 280.

III, — 20 cm3 suc p'rifié adsorbé par 10 cm suspension alumine au pH

Temps d'agitation : 30° adsorption 100 p. 100 — A.W. = 280.

IV. — 30 cm? suc purifié adsorbé par 18 cm suspension alumine au pH

Temps d’agitation : 30° adsorption 60 p. 100 — A.W. = 275,

On voit d’après ce tableau que la « saturation » de l’alumine ne se produit qu’à partir de 20 cm” de suc purifié.

Conclusions. — Nous avons ainsi fixé les conditions nécessaires pour réaliser une adsorption totale par l’alumine B. de Pactivité diastasique du suc préalablement purifié par le carbonate de sodium et par dialyse.

Cette adsorption est maximum pour une réaction acide du milieu pH compris entre 4 et 5) mais le pH optimum est variable selon le suc utilisé et ses caractéristiques ; d’ailleurs l’adsorption existe, plus ou moins marquée, quel que soit le pH où l’on opère.

ELUTION DE LA LACCASE ADSORBÉE. — L’adsorption complète de la laccase par l’alumine B étant réalisée et ses modalités connues, nous allons passer à la deuxième partie du problème, celui de l’élution de la laccase.

Il semble, d’après les courbes précédemment établies, que pour réussir à éluer la laccase, il suffit d’agiter l’adsorbat qui la contient avec des solutions dont le pH soit situé au delà des limites où s’est effectuée l’adsorption, en opérant par conséquent à un pH inférieur à 4,4 ou bien à un pH supérieur à 9,4 on devrait avoir des résultats satisfaisants.

Des essais d’élution effectués avec des solutions légèrement ammoniacales, n’ont cependant pas donné de

bons résultats. Avec des solutions alcalinisées par le carbonate de sodium, les résultats ont été relativement faibles. Mais nous avons obtenus de bons rendements avec des mélanges tampons de phosphate de sodium et carbonate de sodium.

Essais d’élution.

Avec le suc précédent (page 142) pour lequel l’adsorption par l’alumine B était de 100 p. 100 au pH — 4,4 APN == 1280!

Nous avons effectué d’abord l’adsorption totale.

Adsorption. — 20 cem* de suc carbonaté purifié par dialyse sont agités avec un culot d’alumine B, provenant de 100 cm; d’une suspension d’alumine B au pH — 4,4. L'adsorption a été totale, c’est-à-dire qu'après centrifugation, le liquide surnageant était inactif. Ces 20 cm; de préparation diastasique renfermaient 128 U. D.

Elution 1. — L’élution a été réalisée de la façon suivante : Le culot d’alumine centrifugé — qui est en somme l’adsorbat, — est agité mécaniquement pendant une

demi-heure avec 10 cm* d’une solution de phosphate disodique de (pH = 8,2). Après centrifugation et séparation du liquide surnageant, l’adsorbat est traité une deuxième fois de la même façon. Les deux liquides surnageants amenés à un volume de 20 cm* renfermaient 73 unités diastasiques, ce qui équivaut à une élution de 57 p. 100.

2° En suivant la même technique nous avons effectué un autre essai, dans lequel le pH du liquide éluant est un peu plus élevé et voisin du pH — 9,5 ce pH est obtenu par un mélange de phosphate de sodium et carbonate de sodium dans les proportions suivantes :

Sol. phosphate disodique L SES EU CL LaCie Sol. carbonate :de:sodium N —..:......,:..4 ee 1 cmè

EAU TS Dr res RS PA SDS ssseesoes da ant CUP LU ACTES

ton

Après une adsorption totale à pH — 4,4, de 128 unités diastasiques, nous avons obtenu après élution, 92 unités diastasiques ce qui équivaut à une élution de 72 p. 100.

3° Un autre essai fut réalisé sur un suc purifié, différent.

Adsorption. —— 50 em* de suc purifié sont adsorbés par un culot d’alumine provenant de 28 cm? de suspension d’alumine B à pH — 4,4. L’adsorption a été de 90 p. 100 et représente 310 unités diastasiques.

Elution. — Réalisée comme précédemment l’élution nous a donné 222 unités diastasiques ce qui représente un taux de 71 p. 100.

Nous avons fait de très nombreux essais d’élution en élevant le pH (obtenu par mélange de soude normale et de phosphate de sodium) jamais nous n’avons pu réaliser une élution supérieure à 75 p. 100. D’ailleurs ces pH si élevés ne sont pas sans action sur l’activité de laccase, à ce degré de pureté. + |

Comment expliquer cette élution incomplète ? Doit-on supposer une perte de l’activité ? Des mesures d’activité, faites sur l’adsorbat lui même après adsorption totale, nous ont montré que l’on retrouve sur cet adsorbat l’activité première.

Existe-t-il une partie de la diastase qui n’est pas éluable ? Les courbes des adsorptions établies précédemment permettent de faire cette hypothèse, puisqu'il y a adsorption à tous les pH.