R—SH+21—2 H+R—S—S—R

Cette réaction a été utilisée par HErFTER, par ARNOLD, FABRE et Mme Ranpoin [47], Taompson et VorT@uin [52].

D'autre part, BLancnerTière et Biner [17], puis BLANCHErière et MeLox [19], ont dosé le glutathion par l'iode en présence d’empois d'amidon, méthode qui, d’après Tunni- CLIFFE, THompson et VoETGLiN, KENNAWAY et HIEGER, FABRE, SIMONNET et Mme Ranpoix, donne des résultats plus élevés que la méthode au nitroprussiate. BLANCHETIÈRE et MELON ont confirmé d’ailleurs l’opinion de ces divers auteurs et ont attribué cette divergence de résultats à la sensibilité plus grande de la réaction à l’empois d’amidon.

La question s'est donc posée de savoir lequel des deux indicateurs doit être utilisé ?... Il semble résulter des travaux de BLANCHETIÈRE et MELoN [19] que la méthode à l’iode en présence d’empois d’amidon, quoiqu'elle puisse conduire à des résultats trop forts, doit être préférée à la méthode au nitroprussiate, qui, elle, conduit certainement à des résultats trop faibles et n'est pas plus rigoureusement spécifique par suite de son peu de sensibilité.

Dans nos recherches, nous avons utilisé l’empois d’amidon comme indicateur, la quantité de glutathion dans les organes des animaux inférieurs n'étant pas suffisante pour utiliser la méthode au nitroprussiate.

Nous ne nous dissimulons pas les imperfections de cette méthode. Il est possible que, en plus du glutathion, d’autres corps présents dans les filtrats trichloracétiques soient capables de fixer de l’iode. Suivant l'exemple de BLANCHETIÈRE, de FaBre, de Mile RéGnier, nous avons cependant exprimé en glutathion « l'indice d’iode » des filtrats trichloracétiques.

Un autre problème s’est posé au début de nos recherches le titrage direct ou le titrage en retour du glutathion par iodométrie.

Nous avons successivement essayé les deux méthodes et

1) ne

nous sommes arrivé aux mêmes conclusions que DELAVILLE et Kowarskr [27]. Nous avons constaté que

1° le titrage en retour donnait des résultats beaucoup plus forts que le titrage direct;

2° le résultat est d'autant plus fort que le contact avec l’iode à été plus prolongé.

Nous avons préparé une solution de cystéine (Hoffman- La Roche), à 50 mg. pour 100 cm? d’eau distillée. Par dosage indirect, nous avons oblenu les résultats suivants (en mg.) :

Prise diessai 2/0 — img. de cystéine.

Temps de contact de

30 secondes À minute 5 minutes 10 minutes 0,9359 1,04 1,21 1,36 0,968 1,08 1,16 0,9559 1,02

Ces résultats montrent nettement qu'il est difficile d’arriver à une valeur stable. Le titrage iodométrique direct, en présence d'empois d'amidon, nous a donné satisfaction. Pour nous assurer de la valeur de cette méthode directe, nous avons fait une solution de glutathion pur (Hoffmann-La Roche) à 50 mg. pour 106 cm d’eau distillée et nous avons effectué les dosages.

Prise d'essai : 2 cm3 = À mg. de glutathion en présence de 10 cm® d'acide trichloracétique à 10 p. 100. Nous avons trouvé (en mg.)

4,05 4,04 0,914 1,06 moyenne : 1,02 4,06 1,04 0,933 1,07 4,07 1,04 4,04 0,914

Cette méthode par titrage direct donne de bons résultats et évite l'intervention du facteur temps de contact; elle nous a paru plus précise et plus régulière que la méthode indirecte.

Nous avons également cherché une méthode pour doser le olutathion total, qui, par différence avec le glutathion réduit, donne le glutathion oxydé. Pour évaluer le glutathion total, Brericu et KaLLe ont dosé la totalité du soufre organique des

filtrats de sang et des tissus. Un certain nombre d'auteurs ont dosé le glutathion total par le même procédé que le glutathion réduit, le glutathion oxydé ayant été au préalable réduit par des procédés divers.

Hunrer et Eaces [36] ont réduit le glutathion par l'acide phospho-tungstique et le sulfite de sodium. Taompson et Vor@run ont recueilli le sang dans l’acide trichloracétique et ont réduit le glutathion oxydé contenu dans le filtrat trichloracétique par la poudre de magnésium. Hess a effectué la réduction du glutathion oxydé à l’ébullition par hydrogénation en présence de poudre de zine et d'acide chlorhydrique. GABBE à utilisé la réduction par l'acide sulfo-tungstique; enfin, Deravizce et Kowarskr ont traité le filtrat trichloracétique par le couple zinc-cuivre.

Nous avons essayé l’action directe du zinc dans le filtrat trichloracétique acidifié par l’acide chlorhydrique. Nous avons pris pour nos essais une solution de cystine (Hoffman-La Roche) correspondant à 1 mg. par cm et nous avons fait agir l’acide chlorhydrique en présence d’aiguilles de zinc distillé et pur ou de zinc amaigamé, en contact pendant dix minutes. Nous avons dosé la cystéine formée par la méthode directe avec l’iode N/100.

Prise d’essai : 1 cm — 1 mg. de cystine, qui, après hydrogénation, correspond à 1 mg. 008 de cystéine.

Nous avons trouvé (en mg.) :

41,02 1,04 4,04 41,04 Moyenne : 1,06 1,05 1,10 1,14 1,14 1,08 1,10 1,04 1,02

Ces résultats, constants et comparables, montrent la valeur de cette méthode.

PRÉPARATION DES EXTRAITS ACIDES. — Aussitôt la mort de l’animal, un poids P connu de tissu (environ de 0 g. 50 à 3 g.) est haché finement et rapidement; la pulpe, mélangée avec du sable lavé, est traitée par 20 cm3 d'acide trichloracétique à 10 % (par extractions successives à l’aide de 5 cm3). On transvase le tout dans deux tubes à centrifuger. On centrifuge pendant quatre à cinq minutes. La solution, claire, est décantée avec précaution dans un ballon jaugé de 20 cm3. Complé-

ter à l’aide d’un burette par l'acide trichloracétique à 10 % jusqu'au trait de jauge. Agiter. Ce liquide est ensuite divisé en deux parts de 10 cms.

DOSAGE DU GLUTATHION RÉDUIT (GR). — A 10 cm d'extrait trichloracétique, on ajoute 1 cm$ de réactif à l’empois d’amidon, puis goutte à goutte, une solution titrée d’iode N/100 jusqu’à teinte bleue stable. Soit n cm.

Une correction doit être faite, car certaines solutions pures d'acide trichloracétique à 10 % captent une petite quantité d'iode N/100, soit x cm, cette quantité exprimée en cm3 qui est déduite du volume n trouvé précédemment.

(n — x) correspond donc à l’iode qui a servi à l’oxydation du glutathion. P représente en g. le poids du tissu.

Go PI

— GR en mg. pour 100 g. de tissu.

(4 cm3 d’iode N/100 correspond à 3 mg. 07 de glutathion.)

DosAGE DU GLUTATHION TOTAL (GT). — A 10 cm3 d'extrait trichloracétique, on ajoute 1 g. de zinc en aiguilles distillé et pur ou de zinc amalgamé et 2 cm° d'HCI pur. Après un contact de dix minutes, filtrer la solution avec soin et doser comme précédemment en tenant toujours compte de la quantité d’iode N/100 que captent 10 cm? d'acide trichloracétique après hydrogénation.

(n — x) x 307 A s MT LT GT en mg. pour 100 g. de tissu.

GLUTATHION OXYDÉ (GO). — II a été calculé par différence :

GT — GR = GO en mg. pour 100 g. de tissu.

Zinc AMALGAMÉ (Technique de M. le Professeur DENIGÈS pour le réactif hydrostrychnique). — Dans un tube à essai, verser du zinc en grenaille, 2 em HCI concentré, 5 em H?0. Agiter pendant deux minutes. Ajouter ensuite 1 cm d'une solution saturée de bichlorure de mercure et agiter pendant une

minute, puis décanter le liquide. Laver le zinc à plusieurs reprises avec de l’eau distillée.

PRÉPARATION DE AR — ® g. d’amidon, ajouter 100 cm d’eau froide contenant 0 g. 05 de bichlorure de mercure. Verser par petites fractions de l’eau bouillante. Faire bouillir trente à quarante minutes. La liqueur refroidie, compléter à 1.000 cm3 avec de l’eau distillée. Cette solution se conserve au moins Un MOIS.