DE L INFLUENCE DES ACIDES DANS L INTERVERSION DU SUCRE PAR LA SUCRASE

Après avoir constaté l'augmentation rapide de l'activité de la sucrase dans un milieu d'une acidité très faible mais croissante, il y avait lieu de se demander ce que devient celte activité lorsque l'acidité va en croissant indéfiniment. C'est là une étude qui a été abordée par M. Kjeldahl*; il en a indiqué très sommairement les résultais, comme je l'ai fait moi-même plus haot, pour les besoins de l'exposé; mais ces résultats sont loin d'être aussi simples^ tout au moins à interpréter, qu'ils pourraient paraître au premier abord, et méritent de nous arrêter quelque temps.

D'une manière générale, la quantité de sucre interverti par la sucrase, en présence de doses croissantes d'un même acide, va en croissant à mesure que l'acidité croît. Mais le phénomène d'interversion, qui était d'abord uniquement dû à la sucrase, influencée par l'acide, ne tarde pas, à partir d'une certaine dose d'acide variable avec chaque acide, à se compliquer; il devient le résultat de la superposition de l'ellet de l'acide seul et de la diaslase, influencée par l'acide. La quantité de sucre interverti par Tacide seul va en croissant avec la dose d'acide ; celle qui est intervertie par la diaslase, influencée par l'acide, croit d'abord, puis va en décroissant, de telle sorte que nous devons trouver pour chaque acide une dose d'efi*et maximum.

Remarquons de suite que l'influence des différentes doses d'un même acide ne peut être exprimée par aucun chiflre, puis-

i. Mcddelelser fra Carlsberg Laboratorietf 1Ô8I.

qu'il nous est impossible de savoir la quantité de sucre que la diastase intervertirait en l'absence de Tacide : mais nous pouvons, par la marche générale du phénomène, saisir le maximum de l'efFet. !Il nous suffit pour cela d'étudier l'efi'et des dillérentes doses d'un même acide, en même temps et avec le même liquide diastasifère.

Afin de discerner, dans ce phénomène complexe, tel que je viens de le présenter, la part qui revient à chacun des deux effets, il faut nous faire une idée de la quantité de sucre que l'acide agissant seul peut intervertir. L'étude complète de Tinterversion du sucre par les. acides étendus, à une température inférieure à 100®, quelque intéi et qu'elle puisse présenter, est trop en dehors du cadre de ce travail pour que j'aie songé à Paborder actuellement; je ne veux en signaler ici que quelques points qui m'ont paru particulièrement importants, parce qu'ils jouent un rôle considérable dans toute l'étude de l'interversion du sucre par la sucrase en présence des acides, et qu'ils m'ont permis de trouver l'explication d'un certain nombre de faits dont le mécanisme me paraissait d'abord impénétrable. Je me bornerai à indiquer les principaux résultats, en les appuyant de quelques faits expérimentaux.

Interversion du sucre par les acides étendus à la température de 56<*.

Le phénomène de l'interversion du sucre, à une température relativement basse, par les acides étendus, dépend, comme celui de l'interversion par la sucrase, d'un certain nombre de conditions, moins délicates, il est vrai, dont on a bien une notion générale, mais sur lesquelles on n'a pas, à ma connaissance, fait d'expériences précises. 11 dépend, entre autres, de la concentration de l'acide, do la température à laquelle il agit, de la durée de l'action, de la concentration de la solution sucrée. C'est cette dernière condition qui, pour nous, est la plus importante à considérBr; examinons-la tout d'abord.

J'ai choisi trois acides, d'énergies variées, à des concentrations telles que l'interversion ne fût pa^ trop rapide, l'acide acétique, l'acide oxalique et l'acide sulfurique. Je les ai fait agir à la température de S6®, pendant 1 heure, sur des solutions

forées renfermant des poids croissants de saccharose. Voici résultats obtenus :

Concentration * de l'acide.

Acide acétique.

Quantité de saccharose

présent à Torigine

en grammes.

Acide oxalique.

Quantité de saccharose interverti au bout d'une heure, en centigrammes.

Acide sulfurique.

On voit que pour les trois premières séries d'essais, c'est-àe lorsque Taride agit lentement, la quantité de sucre interverti

presque exactement proportionnelle à la quantité de saccharose Isent à l'origine, ou à la concentration de la solution sucrée. Pour

autres essais, la quantité de sucre interverti croît plus rapifnent que la quantité de saccharose.

Nous aurons à revenir sur ces faits tout à Theure. Nous

l. Tous les chiiïre^ représentant i.^i et plus loin Ja concentration des acides riment des millièmes, c'est-à-dire le nombre des grammes renfermés d«DS litre.

pouvons, dès à présent, y trouver l'explication d'un aiilr j'ai observé dans Tétude de l'interversion du sucre par l étendus, à température basse. Lorsque Tinlerversidn très lentement, la quantité de sucre interverti est sens proi>ortionnelle au temps, au moins pendant les p heures, mais celte proportionnalité ne tarde pas à cesj phénomène à se ralentir. La quantité de saccharose va, constamment en diminuant, et par suite, la quantité d rose qui peut être interverti dans des intervalles de tem va en diminuant également.

La connaissance des faits que je viens d'exposer .1 met maintenant de passer à l'étude de l'influence d< sur la sucrase. Elle suflit pour préciser les conditic lesquelles nos expériences devront être faites. .

Interversion du sucre par la sucrase en présence de croissantes de divers acides.

Je me suis placé dans les conditions expérimentale décrites précédemment. La quintilé de saccharose dans chacun de m«^s tubes était toujours 2^'',5 (5*^*^ d'une à 80 0/0). Dans le bain-marie réglé a 56*^, à côté de chc renft^rmant la sucrase et l'acide, j'en plaçais un autre mesurer la quantité de sucre interverti par Tacide renfermait la même dose d'acide que le premier et quantité de liquide diastasifère préalablement débarra matière active par ébullition. J'ai constaté, en effet, q fait agir l'acide seul sur le sucre, en présence d'eau di quantité de sucre interverti n'est pas exactement la mé emfdoyant la méthode que je viens d'indiquer ; on tn jours un ou deux centigrammes de sucre interverti comme si les matériaux, en si faible quantité cependa liquide diastasifère renferme, avaient une influence lé retardatrice sur l'activité de l'acide. Je me suis toujuui à opérer avec un liquide diastasifère aussi neutre qi l'obtenir par le procédé que j'ai indiqué, et à n'étudie doses d'acide telles que l'acidilé apportée parle liquide fut négligeable.

Les nombres qui suivent expriment en centign

uantité de saccharose iaterverii au boni d^ine heure, déduction iite de celle que Tacide inlervertil daas lescoadîtious défioies lus haut. Je ne donne, en général, que lesrésuliafci d^unè seule érie d'expériences, choisie parmi toutes celtes qae j^ai faites omme me paraissant la plus probante.

Acide sulfurique.

Doses d'acide. Saccharose interverti

en centigrammes.

La difficulté de doser exactement, à cause do hi faible acidité u liquide diastasifère, une quantité d'acide inférieure à 0,025 m'a bligé à nepasponsserTessai plus loin. On voit que le maximum st inférieur à cette dose. L'acide ne commence à intervertir de ucre pour sa part qu'à partir de la dose 0,0S.

Acide oxalique.

L'acide oxalique présente un maximum net correspondant à i dose 0,066 ou ^. Cette dose d'acide n'intervertit pas de sucre Dur sa part. Nous verrons tout à l'heure l'influence de cette rconstance sur la netteté du maximum.

Acide tar trique. Aciie succiniqu£.

Doses d'acide. Sucre interverti Doses d'acide. Sucre interverti

en centigrammes. en centigrammes.

tf

Acide acétique.

iO.

Oa voit qu

'avec Tacide oxalique la marche du phénomène apparaît nettement, surtout dans la première série de chiffres que je donne, la seconde n'ayant pour but que de préciser plus exactement la situation du maximum. L'acide, qui active d'abord l'action de la sucrase jusqu'au maximum, la retarde ensuite jusqu'au moment où cette action devient nulle et où l'acide agit seul.

Il n'en est pas de même pour les autres acides, pour lesquels le maximum, ou du moins le maximum apparent, correspond à une dose capable d'intervertir pour sa part une quantité de sucre très appréciable. Voici, en effet, les quantités de sucre interverti, dans les conditions où je me suis placé, par ces doses maximum apparent :

Acide taririque .

» succinique » lactique. .

» acétique .

Doses d*acide

Sucre interverti

CQ ceatigrammes.

Avec ce dernier acide^ladose d'efifet maximum est encore moins nette qu'avec les autres, et si je lui assigne le chiffre de 10 ou ^^ / c'est parce qu'il est assez sensiblement la moyenne entre les chiffres 1 et 20 qui, comme l'expérience nous le montre, comprennent entre eux le maximum.

Pour trouver l'explication de la différence que présentent les derniers acides avec l'acide oxalique, il nous suffit de nous reporter à l'étude, par laquelle nous avons commencé, de l'interversion par les acides seuls. Comme je Tai dit plus haut, j'ai toujours fait, pour chaque dose d'acide, deux expériences simultanées dont l'une était destinée à mesurer la quantité de sucre interverti par l'acide seul. Or il est certain que le chiffre trouvé ne donne qu'une idée approchée et exagérée de ce que l'acide peut faire dans le tube voisin. Dans ce tube, en effet, il y a de

lasucrase, dont Teffet exagéré par la présence de Tacide, tend à diminuer de pins en plus la quantité de saccharose présent. Par conséquent, l'interversion par Tacide seul doit devenir de moins en moins active.

Cette différence, que le raisonnement appuyé sur les faits nous montre devoir exister entre nos deux tubes, ne peut, il est vrai, être considérable; elle ne dépasse certainement pas 3 ou 4 centigrammes; mais elle suffit pour effacer le maximun sans que nous ayons le moyen de le faire apparaître plus nettement. Si, en effet, l'emploi d'un liquide très actif exagère cette différence, remploi d'un liquide moins riche en sucrase nous donne des nombres qui, au voisinage du maximum, diffèrent trop peu les uns des autres pour qu'on ne doive pas les considérer comme identiques.

Nous ne pouvons donc, avec ces acides, que connaître les limites qui comprennent le maximum, sans savoir exactement à quelle dose ce maximum correspond,etnous devons simplement le considérer, dans une approximation suffisante, et lorsqu'une indication plus nette nous fait défaut, comme situé à égale distance de ces deux limites extrêmes. C*est ainsi que nous avons assigné, pour Pacide acétique, à la dose de maximum d'effet le chiffre ^^,

Nous voyons de plus un fait que j'ai énoncé précédemment et qui nous montre que l'approximation dont je viens de parler est suffisante: au voisinage du maximum, des variations notables dans la dose d'acide ne se traduisent que par des variations insignifiantes dans la quantité de sucre interverti.

Activité spécifique des divers acides.

Si nous considérons les acides dans l'ordre dans lequel je les ai étudiés, nous voyons que le maximum d'effet correspond à des doses de plus en plus considérables. Nous pourrons donc dire que l'activité qu'un acide communique à ja sucrase ou son activité spécifique est d'autant plus grande que le maximum d'effet est produit par une dose plus faible. On voit qu'en classant les acides d'après cette définition, comme je l'ai fait plus haut, ils ne se trouvent pas placés dans le même ordre que si on les rangeait d'après Taclivité avec laquelle ils intervertissent le sucre.

Indépendamment de celte situation du maximum, variable avec les différents acides, il y avait lieu de se demander si Peffet produit par la dose maximum de chacun des acides sur une même quantité de sucrase serait différent, et si, à l'activité spécifique telle que je viens de la définir, ne s'en ajouterait pas une autre se manifestant par une action plus ou moins énergique suivant la nature de Tacide. Il fallait rechercher si, en faisant agir sur une même dose de sucrase, en présence de la même quantité de sucre, les doses des différents acides qui correspondent au maximum d'effet, on trouverait des chiffres différents ou identiques.

Voici les résultats de l'expérience :

Doses d'acide. Sucre interverti Sucre interverti Différence par l'acide par Pacide des 2 chiffires

et la 4iastase.

seul.

précédents.

Acide sùlfurique. . .

» oxalique . . .

» tartrique . . .

» succinique . .

» lactique. . . .

» acétique . . .

iO

On voit que les chiffres de la dernière colonne sont assez peu différents pour qu'on puisse les considérer comme identiques, et n'envisager leurs différences que comme étant dues à des erreurs de dosage. Nous devons donc conclure que les différents acides ne manifestent pas d'autre activité spécifique que celle que nous avons définie plus haut.

Comment une même dose d'acide acétique se comporte-t-elle en présence de doses variables de sucrase "(

Si je me suis étendu aussi longuement sur cette étude de l'influence des acides sur la sucrase, c'est que, en dehors de l'intérêt qu'elle peut avoir en elle-même, il pourrait en sortir un résultat pratique au point de vue du dosage de la sucrase.

Revenons à l'interversion en présence de ^ d'acide acétique. Comme je l'ai montré au chapitre I, les différences de neutralité des liquides diastasifères disparaissent absolument devant cette dose. Aux raisons qui m'ont déterminé à faire choix de l'acide acétique vient s'ajouter la suivante, qui est bien plus importante:

en additionnant le liquide à sucrase d'acide acétique, on esl sûr, à cause du peu d'énergie de cet acide, de n*en déplacer aucun autre qui pourrait se trouver dans le liquide à l'état de sel, et d'opérer en présence d'un acide unique.

L'emploi de l'acide acétique étant justifié par ces raisons, demandons-nous s'il ne pourrait pas nous servir à doser la sucrase avec précision. Quelles conditions cet acide, qui fait disparaître les causes d'erreurs étudiées jusqu'ici, doit-il encore réaliser pour nous conduire à un semblable résultat? Il faudrait évidemment que son influence sur des quantités variables de sucrase fût proportionnelle à ces quantités. En d'autres termes^ en intervertissant du sucre en présence de ^ d'acide acétique, toutes choses égales d'ailleurs,avec des quantités de liquide diastasifère représentées par les nombres 1, 2, 3, 4, et retranchant des quantités totales de sucre interverti, celles qu'intervertit l'acide seul, trouve-t-on des nombres proportionnels à 1, 2, 3, 4? L'expérience d'abord, le raisonnement ensuite, nous répondent qu'il n'en est pas ainsi. Voyons d'abord l'expérience.

J'ai pris 1, 2, 3, 4*^*^ d'un liquide diastasifère aussi exactement neutre que possible, et j'ai trouvé les résultats suivants :

Quantité de

Sucre interverti

Sucre interverti

sucrase employée.

par le liquide neutre.

en présence d'acide acétique.

Jje liquide neutre ne donne de chiffres proportionnels aux quantités que pour les deux premiers essais; pour les deux autres les chiffres sont inférieurs à ce qu'ils devraient être dans le cas de la proportionnalité. Cela tient à deux causes : la première, que j'ai exposée au commencement de ce travail, résulte de ce que le liquide n'est pas absolument neutre, mais probablement légèrement alcalin; la seconde résulte de l'influence delà quantité de sucre interverti, qui est supérieure, à partir de l'essai 3, au ^ de la quantité totale de saccharose présent (2 gr. dans chaque tube), influence quia été mise en lumière par M. Duclaux. Mais même pour les essais 1 et 2, pour lesquels la proportionnalité existe, les quantités de sucre interverti en présence de l'acide ne sont pas entre elles comme les nombres ^ et 2. Il semble que

l'acide agisse plus énergiquement sur les quantités de diastase les plus faibles que sur les quautités plus fortes.

Voici une autre expérience dans laquelle, l'interversion étant moins active et le liquide diastasifère plus neutre, la proportionnalité presque absolue existe pour le liquide neutre, mais qui présente les mêmes faits pour le liquide agissant en présence d'acide acétique :

Quantité de

Sucre interverti

Sucre interverti

Chiffres proportionnels calculés.

de sucrase.

par le liquide

en présence

neutre.

d'acide acétique.

Ces chiffres étant moins élevés présentent avec les nombres qui répondraient à la proportionnalité, et que j'ai inscrits dans la dernière colonne, une différence moins grande que ceux de la première expérience.

Si nous nous reportons à ce que nous avons appris sur Tin- Lerversion par Pacide seul, nous trouvons de ce fait de l'exagération apparente de Tinfluence de l'acide sur la quantité de diastase la plus faible une explication simple, et nous voyons que les choses ne peuvent pas se passer autrement. En effet, si nous considérons deux- tubes renfermant des quantités de diastase représentées par i et 2, le saccharose disparaît plus vite dans le second tube que dans le premier, parce qu'il y a plus de diastase, et par suite l'acide intervertit moins de sucre dans ce tube, de sorte que dans le résultat final de l'expérience la part que nous faisons à l'effet de Tacide dans le second tube est exagérée, et la part qui doit être faite à la diastase est diminuée d'autant.

Nous ne pouvons donc pas appliquer immédiatement l'emploi de l'acide acétique au dosage de la sucrase. La variation de la quantité de sucrase, qui est précisément le fait intéressant à constater dans la sécrétion de cette diastase par un être inférieur, introduit dans le phénomène de l'interversion en présence d'acide acétique une complexité qui nous oblige à chercher une méthode détournée permettant d'arriver à un dosage exact. Je dois cependant faire remarquer que l'interversion en présence de Tacide acétique peut nous permettre d'étudier la marche de

la sécrétion de la sucrase, et, si elle ne nous donne pas de renseignements très précis sur sa quantité absolue, elle peut cependant nous indiquer si cette quantité va en croissant ou en décroissant.

DOSAGE DE LA SUCRASK DE l'aSPERGILLUS NIGER.

J'ai essayé de donner dans ce qui précède une idée des difficultés que présente le dosage de la sucrase; j'ai montré d'une part les graves causes d'erreur auxquelles on s'expose en cherchant à doser cette diastase en milieu neutre; j'ai fait voir, d'autre part, que son action en milieu acide, tout en faisant disparaître ces causes d'erreur, ne permet cependant pas d'arriver à un procédé de mesure immédiat, parce que les quantités de sucre interverti dans ces conditions ne sont pas proportionnelles aux quantités de sucrase employées.

On peut néanmoins songer à utiliser les notions qui résultent des faits que j'ai exposés et fonder sur elles une méthode de mesure un peu détournée, il est vrai, mais qui n'en conduit pas moins à un dosage précis. On ne saurait d'ailleurs s'attendre à un procédé de dosage simple pour une substance dont l'action est soumise à tant de causes de perturbation, si Ton songe que cette action même peut seule servir de moyen de mesure.

L'exposé de cette méthode exige le développement d'une notion nouvelle, la définition de ce que nous appellerons désormais Vunité de sucrase. Remarquons, en effet, que nous n'avons jusqu'ici introduit dans notre exposé aucune idée d^unité, pas plus que ceux qui se sont avant nous occupés des diastases. Il nous semble qu'il y a là une lacune qu'il sera facile de combler au fur et à mesure que les connaissances qu'on a sur chaque diastase en particulier se seront complétées, et que nous saurons mieux toutes les influences qui modifient leur action. Pour la sucrase, en particulier, nous pouvons dès maintenant définir ce que nous appellerons l'unité, et nous en tirerons immédiatement un avantage considérable, celui de fixer les idées eu abrégeant le langage, et de faciliter la comparaison des différentes quantités en présence desquelles nous pourrons nous trouver.

Qu'avons-nous appris au sujet de la sncrase? Nous savons que la quantité de sucre interverti par une dose déterminée de svr crase dépend de la température, de la durée de l'action, de l'acidité du milieu, sous la réserve des faits que nous avons rappelés plus haut. Nous devons donc, dans notre définition, tenir compte de toutes ces influences, et nous pouvons dès lors définir l'unité de sucrase comme il suit : L'unité de sucrase est une quantité de sucrase capable d'intervertir 20 centigrammes de saccharose en une heure à la température de 56% en présence de 4 d'acide acétique. Les 20 centigrammes ne comprennent pas le sucre interverti par Tacide seul; ils sont la différence entre le sucre interverti total et ce que l'acide intervertit pour sa part, cette dernière quantité pouvant subir, d'une expérience à l'autre, des variations sur lesquelles j'ai déjà appelé l'attention. Remarquons de plus qu'il ne faudrait pas attribuer à cette définition un caractère trop général, parce qu'elle ne vise que des faits établis en se servant de la sucrase de l'Aspergillus.

Les faits que j'ai exposés précédemment expliquent suffisamment le choix de la durée de l'action et de la température dans notre définition pour qu'il soit inutile dïnsister davantage. On pourra employer tout autre acide que l'acide acétique, à la dose de maximum d'effet, toutes les fois qu'on sera sûr que cet acide est le seul présent dans la liqueur. Quant au chiffre de 20 centigrammes, il est clair qu'il est choisi arbitrairement; mais son choix a été dicté par ce fait qu'opérant toujours l'interversion avec 10" de liquide et amenant avec les eau^ de lavage du tube à 20", j'ai toujours eu ainsi un liquide renfermant environ i 0/0 de sucre à l'état de sucre interverti, c'est-à-dire que j'étais toujours placé dans les conditions dans lesquelles on se place pour titrer la liqueur de Fehling, qui sont les seules dans lesquelles les dosages de sucre soient absolument comparables.

On remarquera que cette définition ne tient évidemment pas compte d'autres influences, spéciales à chaque essai, que subit l'action de la sucrase, en particulier des sels ou des matériaux en solution présents dans la liqueur en dehors de la sucrase ellemême; nous verrons plus loin comment on peut, dans la pratique, tenir compte de ces influences qui ne sont nullement négligeables lorsqu'on veut arriver à Un chiffre précis. Pour le moment, la définition telle que nous l'avons donnée nous permet

d'exposer la marche générale du dosage; elle en renferme implicitement le principe.

Un liquide à sucrase étant donné, au lieu de chercher la quantité dei sucre que peut intervertir un volume déterminé de ce liquide, en présence d'acide acétique, nous chercherons quel est le volume qu'il faut en employer pour intervertir une quantité de sucre fixée à l'avance une fois pour toutes, 20 centigrammes par exemple, et, de la quantité de liquide employé, nous déduirons par un simple calcul quelle est sa richesse en sucrase. Le premier mode de dosage nous eût conduit à fonder notre calcul sur une proportionnalité qui, l'expérience nous Ta montré, n'existe pas; dans le procédé de dosage que nous proposons, la proportionnalité sur laquelle le calcul repose est évidemment toujours réalisée.

Quelques détails sont nécessaires pour compléter l'exposé théorique de ce mode de dosage. Il exige tout d'abord que l'on ait en sa possession un liquide à sucrase, obtenu comme celui dont je me suis servi jusqu'ici dans mes expériences, et dont 1" renferme l'unité de sucrase telle qu'elle a été définie plus haut. C'est ce que j'appellerai dorénavant la sucrase normale. Nous allons voir tout à l'heure l'utilité de cette liqueur.

On commencepardéterminerl'acidité duliquide dans lequel on veut doser la sucrase. On fait ensuite un certain nombre d'expériences préliminaires simultanées, destinées à indiquer quel est le volume de liquide qui renferme l'unité de sucrase. Dans une série de tubes on introduit des volumes croissants de ce liquide, 1, 2, 3, 4, 5 centimètres cubes, et s'il y a lieu, la quantité de soude nécessaire pour neutraliser aussi exactement que possible les volumes de liquide employé. Puis on ajoute 1"<^ d'acide acétique à 1 0/0, et dans tous les tubes le même volume de saccharose à 80 0/0, de manière à ne pas dépasser le volume total de 10^^, et à le compléter même, le cas échéant, avec de l'eau distillée. En pratique, lorsque 4*^^ du liquide ne renferment pas Punité, il est assez peu riche en sucrase pour qu'un dosage approximatif, comme celui que nous exposerons plus loin, soit suffisant. En efi'et, si tel est le cas, lOO^c du liquide ne renferment pas assez de sucrase pour intervertir 5 grammes de saccharose dans les conditions oti on opère, c'est-à-dire dans des conditions de température et mênie, en général, d'acidité bien plus favorables à l'in-

terversion que celles que réalise la culture de l'organisme étudié. On peut donc s'arranger de manière à amener les volumes de liquide, de soude et d'acide employés à ne pas dépasser 6oc: on peut alors employer 4<^° de saccharose ou 2 grammes, et dès lors on est placé dans lesconditîons où les expériences d'interversion sont comparables, c'est-à-dire où il n'y a pas plus de 1/8 du sucre total présent interverti à la fin de l'expérience. Après avoir laissé la série de tubes pendant i heure au bain-marie réglé à 56°, on arrête l'interversion en ajoutant dans chaque tube un léger excès de potasse ou de soude, et on fait le dosage du sucre interverti dans le tube renfermant i^^ et dans celui qui en renferme 4, après avoir amené le contenu de chacun de ces tubes à 20^^.

Si la différence entre les chiffres trouvés pour les deux tubes ne s'élève pas à un centigramme, la quantité de sucrase renfermée dans le liquide peut être considérée comme nulle ou négh'geable. Mais la certitude à ce point de vue n'est acquise qu'à la suite d'une deuxième expérience dont la marche est un peu différente, et dont le résultat plus rigoureux doit venir confirmer ce premier essai préliminaire. Remarquons, en effet, que si le liquide étudié ne renferme pas de sucrase, et si, par suite, le sucre interverti dosé résulte uniquement de l'action de Tacide, il y a néanmoins entre nos deux tubes une différence qui provient de ce que l'un renferme V^ de liquide et l'autre 4, et que les matériaux que ce liquide apporte peuvent avoir une influence sur riuterversion par l'acide, influence qui ne sera pas la même dans les deux tubes. L'essai suivant permet de conclure plus rigoureusement à l'absence de sucrase. Dans deux tubes on introduit 4^® de liquide; on neutralise, s'il y a lieu, par la quantité de soude nécessaire^ déterminée dans le dosage de l'acidité; on porte l'un des tubes à l'ébuUition; on laisse refroidir et on complète le volume de 10^° de chacun de ces tubes par l'addition de l'acide acétique, du saccharose et d'eau distil^ lée. S'il n'y a pas de sucrase, la même quantité de sucre, à 2 ou 3 centigrammes près, s'intervertit en i heure, à 56°, dans les deux tubes. L'expérience m'a montré que c'est là une méthode des plus sensibles pour reconnaître la présence de traces de sucrase; dès que la différence entre les deux tubes dépasse 5 centigrammes, on peut affirmer la présence de la diastase. Il est clair que dans ces circonstances Tessai ne peut être que qua-

litatif ; mais la conclusion qu'il entraine n'en a pas moins sa valeur. D'ailleurs, si quelque doute subsistait relativement à cette conclusion, il suffirait de prolonger de 2 ou 3 heures l'expérience d'interversion pour voir la différence s'accentuer notablement. Nous avons donc là un moyen dé déceler des traces de sucrase.

Voyons maintenant comment le dosage doit être conduit dans le cas où l'on est en présence de quantités de sucrase notables. Les tubes qui ont servi aux essais préliminaires dont j'ai parlé plus haut nous donnent des quantités de sucre interverti variables, parmi lesquelles on choisit celle qui se rapproche le plus d'un nombre compris entre 25 et 30 centigrammes. On reprend alors l'essai avec le [volume de liquide employé dans ce tube et des volumes voisins ; par exemple, si le tube en question renfermait 2^'' de liquide, on recommence trois essais, l'un avec l^'^O, le second avec 2''**, le troisième avec 2*^*^,1. On a soin, pour chaque essai, d'employer deux tubes, dont l'un renferme le liquide chauffé, c'est-à-dire dans lequel on a détruit la sucrase par ébullition. En général on aura ainsi un essai dans lequel la différence entre les deux tubes se rapprochera beaucoup de 20 centigrammes ; elle sera comprise entre 19 et 21 centigrammes et celte approximation suffit pour qu'on puisse conclure par le calcul au volume qui renfermerait l'unité. 11 résulte en effet d'expériences que j'ai faites que si les nombres fournis par des quantités de sucrase très différentes ne sont pas proportionnels à ces quantités, il n'en est plus de même si les quantités employées sont très voisines. Dans ce cas, la proportionnalité aux quantités existe très sensiblement, comme le prouvent les expériences suivantes.

Quantité de sucrase

Sucre interverti

employée.

en centigrammes

Ici, si nous nous rapportons au chiffre moyen 4, nous voyons que la quantité de sucrase ne varie que de 1/20 de sa valeur. Si la variation devient plus grande, les chiffres cessent d'être proportionnels aux quantités de diastase. En voici un exemple ;

Quantité de sucrase

Sucre interverti

employée.

en centigrammes.

Je ferai remarquer, en passant, que ces derniers chiffres confirment une fois de plus le fait signalé plus haut, de l'exagération de rinfluence de Tacide sur les doses faibles de sucrase. 11 est, en effet, facile de voir que si, prenant pour terme de comparaison une quelconque des quatre quantités de sucrase employée, on calcule d'après le chiffre fourni par cette quantité les chiffres qui devraient être fournis par les trois autres, on trouve que tous ceux qui précèdent dans la série sont inférieurs, tous ceux qui suivent supérieurs aux chiffres trouvés par l'expérience.

Nous voyons, en somme, qu'il est inutile de s'astreindre à prendre exactement le volume de liquide qui renferme l'unité de sucrase. Il suffit d'employer un volume très voisin, pourvu qu'il n'en diffère pas de plus de 1/20 de sa valeur. L'emploi de la méthode que je viens de décrire nous présente en outre un avantage. Le liquide à étudier renferme souvent du sucre interverti; si le dosage de ce sucre peut être intéressant à d'autres points de vue, il n'y a pas lieu de nous préoccuper de sa présence dans le dosage de la sucrase. En effet, la faible quantité de sucre interverti introduite avec le liquide à sucrase est introduite dans nos deux tubes, et comme nous faisons la différence des chiffres fournis par ces deux tubes, elle disparait dans nos calculs. Le seul fait important à noter, c'est celui qui peut résulter de la présence du saccharose dans le liquide à sucrase. Cette circonstance peut introduire, dès l'origine, une faible différence entre nos deux tubes, en exagérant légèrement la quantité de sucre interverti dans le tube à liquide chauffé. Si, en effet, le liquide n'a pas été amené très rapidement au delà de la température de destruction de la sucrase, une petite quantité de saccharose pourra s'intervertir pendant le temps que le liquide met à atteindre cette température. Cette cause d'erreur est très faible dans le cas présent, parce qu'on n'emploie qu'un faible volume d^un liquide généralement peu riche en saccharose. Il est néanmoins utile de se mettre en garde contre elle, el de songer qu'en d'autres circonstances elle pourra prendre une importance beau-

coup plus grande. Le pouvoir réducteur d'un liquide riche en sucrase, renfermant du sucre interverti et du saccharose, pourra s'accroître après qu'on l'aura fait bouillir, et cet accroissement du pouvoir réducteur pourra varier notablement suivant que le liquide aura été porté plus ou moins rapidement à la température à laquelle la sucrase est détruite, parce que le temps pendant lequel la sucrase aura pu intervertir du saccharose avant sa des* truction aura été plus ou moins long.

Indépendamment de cette cause d'erreur, peu importante en somme, il y en a une autre sur laquelle il est utile d'insister, et qui va nous ramener à la sucrase normale dont j'ai parlé plus haut. J'ai signalé tout à l'heure l'influence que peuvent avoir les matériaux que le liquide apporte avec lui sur l'interversion par l'acide; il ne faut pas davantage perdre de vue l'influence que ces éléments peuvent avoir sur l'interversion par la sucrase, et cette influence nécessite l'introduction dans nos calculs d'un terme de correction qui sera plus ou moins important suivant les circonstances. Lorsqu'on a déterminé le volume qui renferme Punilé, il faut faire un essai en introduisant dans un tube ce volume de liquide préalablement chauff'é et 1^^ de sucrase normale. Si dans cet essai on trouve 20 centigrammes, on a la preuve que les matériaux présents en dehors de la sucrase n'ont pas d'influence ; si on trouve un chiffre différent, c'est ce chiffre qui dans le cas présent représente l'unité de sucrase. Supposons, par exemple, qu'on ait trouvé le chiffre 18 ; l'expérience nous prouvera que les matériaux présents dans le liquide ont une influence légèrement retardatrice, puisque une quantité de sucrase qui, en leur absence, donnait le chiffre 20, c'est-à-dire Tunilé, ne donne plus que 18 lorsqu'ils sont présents. Le chiffre 18 doit donc être considéré dans notre dosage comme représentant l'unité, et le volume de liquide qui renferme l'unité et qui donnerait ce chiffre 18 devra être calculé en partant du volume qui donne le chiffre le plus rapproché de 18.

Les explications dans lesquelles j'ai été obligé d'entrer, les nombreux détails qu'il m'a fallu donner, contribuent à augmenter, je ne me le dissimule pas, la complexité apparente de notre procédé de dosage ; mais la pratique delà méthode est en somme beaucoup plus simple qu'elle ne parait à la lecture, et les nombreux résultats dignes d'intérêt qu'elle peut fournir ne sont pas

à mettre en balance avec les quelques difficultés de son application.

11 me reste à indiquer ce qu'il y aura à faire dans le cas où ^^ du liquide ne renfermeraient pas l'unité. Dans ce cas, il faudra se contenter d'une approximation, en prenant pour base du calcul de proportionnalité le chiffre représentant la différence entre les deux tubes. Cette approximation sera, comme je l'ai dit plus haut, suffisante dans la plupart des cas, et se rapprochera d'autant plus de la réalité que le chiffre trouvé dans l'expérience sera plus voisin de 20. Plus la quantité de sucrase sera faible, plus le chiffre déterminé par le calcul sera exagéré, parce que le chiffre fourni par l'expérience sera plus élevé que celui qui correspond à la quantité de sucrase employée. 11 ne faut cependant pas oublier que bien qu'un liquide aussi peu riche en sucrase ne se prêle pas à un dosage précis, nous pouvons néanmoins savoir avec certitude si, dans une série de liquides, la quantité de sucrase .va en croissant ou en décroissant; et si la connaissance précise de tous les stades d'un phénomène de sécrétion nous échappe, il ne nous en est pas moins permis d'étudier le sens de sa marche, et quand cette marche est croissante, de faire un dosage précis dès que la quantité de sucrase atteint un chiffre qui, nous le verrons, est encore au-dessous de ceux que nous rencontrerons généralement.

Nous voilà donc en possession d'une méthode qui nous permet de déceler des traces de sucrase, et de la doser avec une approximation d'autant plus grande que sa quantité est ellemême plus considérable. Nous sommes maintenant en mesure de rechercher quelle est la marche de la sécrétion de cette diastase par un organisme déterminé.

FORMATION DE SUCRASE CHEZ L'ASPERGILLUS NIGER.

Étude de la sucrase dans le liquide de culture de [^Aspergillus.

L'organisme dont l'étude se présente naturellement à nous, c'est précisément l'Aspergillus Niger, qui nous a servi jusqu'ici comme source de sucrase; c'est par lui que nous commencerons cette étude, nous réservant de l'étendre ensuite à d'autres êtres,

pour démêler, dans les faits que nous allons constater, ce qu'il y a de particulier à l'Aspergillus et ce qu'il y a de général.

Commençons par étudier le liquide de culture de l'Aspergillus ; l'examen de ce liquide aux différents stades du développement de la mucédinée soulèvera une série de questions que nous verrons peu à peu s'éclairer à mesure que nous pénétrerons plus avant dans l'intimité du phénomène. Nous pouvons pour cette étude placer l'Aspergillus dans diverses conditions, et voir comment ces conditions influent sur l'apparition de la sucrase dans le liquide de culture.

Mettons à Tétuve, à 35^, un certain nombre de cuvettes renfermant le même volume de liquide Raulin, et ensemençons-les également, c'est-à-dire avec un nombre de spores aussi identique que possible, résultat que nous obtiendrons en introduisant dans chacune de ces cuvettes le même volume d'eau distillée tenant en suspension des spores d'Aspergillus empruntées à une culture récente. Dèjs que le développement a commencé sur ces cuvettes, nous en sortons une de l'étuve, nous décantons le liquide de culture, nous lavons la plante à l'eau distillée, nous ajoutons les eaux de lavage au liquide de culture, et nous ramenons le volume de ce liquide au volume initial, ou, si l'évaporation a été faible, à un volume supérieur que nous notons. Nous pouvons d'une part étudier ce liquide en déterminant ce qu'est devenue son acidité, sa teneur en sucre, interverti ou non, quelle est sa richesse en sucrase, et d'autre part mettre les données de ces diverses expériences en relation avec le poids de la plante produite, en pesant celle-ci après l'avoir desséchée à 100®. Répétons cette expérience toutes les 24 heures avec une nouvelle culture ; voici les résultats que nous obtiendrons.

Expérience I. — Chaque cuvette renferme dans 400cc de liquide Raulin :

Saccharose il^^,6.

Acide tarlrique libre 0K^72, ou 1,8 pour 1000.

jrée.

Sacch.

s. int.

Sucre cons.

Acidité.

Sucrase.

Poids

Cendres

restant.

de plante.

gr.

gr.

gr-

gr.

gr-

8 » traces. 283 3,380 0,198

Quelques détails compléteront utilement ce tableau. Le titre des deux dernières colonnes explique suffisamment les nombres qu'elles renferment. Les chiffres de la i^ colonne expriment le nombre de jours au bout desquels l'élude de la culture a été faite. La 2e et la 3o colonnes expriment le sucre restant^ dans'la 2^ à l'état de saccharose, dans la 3^ à l'état de sucre interverti, cette dernière quantité étant exprimée en saccharose. La 4® colonne indique la quantité de sucre consommé, la 5o l'acidité totale, évaluée en acide tartrique. Dans la 6e colonne, j'ai indiqué la sucrase en unités, les chiffres gras correspondant à un dosage approximatif.

Quelques indications relatives au dosage de cette sucrase serviront d'exemple au procédé de dosage que j'ai décrit plus haut. J'indique chaque dosage par le chiffre correspondant de la i^^ colonne.

2. l^c et 4°<5 du liquide ont donné respectivement 9^sr,4t et 9cgp,6 de sucre interverti : d'autre part Â^^ de liquide chauffé et 4^0 (je liquide tel quel ont donné respectivement Ocg»*,? et 9cgr,6. La conclusion est qu'il n'y a pas de sucrase.

3. 5co ont donné respectivement dans les deux tubes 23<^«^,3 et 9c6r,8, dont la différence est i3<^sr,5. En admettant la proportionnalité, il faudrait employer 7*^,4 pour avoir l'unité, ce qui fait en nombre arrondi, pour les 400ee de liquide, 50 unités.

4. Ici j'ai suivi une marche un peu différente, mais qui, en somme, revient au même. 50cc de liquide ont été amenés à 60<^<^ avec de IVau et la soude nécessaire pour les neutraliser. L'emploi de 4^'' de ce mélange, ce qui correspond à 3c<5,3 du liquide primitif, m'a donné comme différence des deux tubes 12,9. Le calcul montre qu'il faudrait employer S^c,! du liquide primitif pour avoir l'unité. En réalité, il en faudra plus, à cause des faits de non proportionnalité que j'ai indiqués. Je fais un essai avec 6«îc, et j'obtiens pour les deux tubes 27, 9 et 7, 9 dont la différence est 20, ce qui correspond en tout à 66 unités. Les 6cc employés n'ont d'ailleurs pas d'influence sur 4<^c de sucrase normale.

6. 4cc de liquide donnent respectivement 30,7 et 40, dont la différence est 20,7, ce qui fait 104 unités en tout. Même observation relativement à la sucrase normale.

8. L'essai avec 1, 2, 3, 4cc donne, comme chiffres pour 4 et 2cc, 25,2 et 37,8. Je recommence avec 4*^«,2, icc,3 et icc,4. Avec ce dernier volume, j'obtiens ;ies chiffres 28,4 et 8,8 dont la différence est 19,7 correspondant à 285 unités en tout. Même observation.

Voyons maintenant à quelles considérations peuvent nous conduire les résultats que résume notre tableau ; ils nous fournissent toute une série de faits intéressants. Nous voyons d'abord que le sucre reste toujours, jusqu'à sa consommation complète, en partie à Tétat de saccharose, bien qu'il y en ait une forte proportion à Tétat de sucre interverti. L'acidité va en augmentant notablement d'abord, par suite de la formation bien connue

d'acide oxalique, puis eu diminuant peu à peu, jusqu'à devenir à peu près nulle. Ces points intéressants, et qu'il était utile de signaler en passant, ne sont pas ceux qui doivent, pour le moment, attirçr le plus notre attention; ce qui nous importe surtout, c'est la marche que suit Tapparition de la sucrase dans le liquide. Nous remarquons que sa quantité est relativement faible tant qu'il y a du sucre à consommer, mais qu'à partir du moment où le sucre devient rare la quantité de sucrase augmente rapidement, et devient au bout de 8 jours environ 6 fois ce qu'elle était le 3^ jour. De plus, cette quantité de sucrase est insuffisante pour assurer dans la première période du développement, et dans les conditions de nos expériences de dosage, l'interversion de tout le sucre qui a disparu.

Nous nous trouvons donc en présence de ce fait singulier d'une substance qui se trouve dans le liquide en quantité insuffisante pour remplir le rôle qui lui est dévolu, et qui y apparaît, au contraire, en grande abondance, alors que sa présence est inutile et qu'il n'y a plus de matière à transformer. J'espère arriver peu à peu à donner dans ce qui va suivre une explication nette de ce fait en apparence paradoxal. Qu'il nous suffise, pour le moment, de l'avoir mis en lumière et de remarquer qu'il ne saurait s'accorder avec l'hypothèse qui tendrait à faire du liquide extérieur au végétal le siège de l'interversion ; si, au contraire, nous arrivons à établir que c'est dans l'intérieur des cellules que doit se passer ce phénomène d'interversion, que le sucre trouve dans ces cellules les conditions favorables à sa transformation, et que le passage de la diastase à l'extérieur est régi par une modification du contenu cellulaire qui rend sa difi'usion de plus en plus facile, le fait que je viens de signaler n'aura plus lieu de nous étonner.

Nous voyons, en outre, dans nos expériences, un autre phénomène curieux. Le poids de la plante, qui va en augmentant à mesure que le sucre disparaît, et qui atteint son maximum au moment où cet élément nutritif est à peu près entièrement consommé, va ensuite en diminuant régulièrement, à mesure que la quantité de sucrase augmente dans le liquide. De plus, c'est la matière organique du végétal qui disparaît ainsi, car à partir du moment où il diminue de poids, le poids de ses cendres, c'est-à-dire de son squelette minéral, reste constant. A quel

phénomène intérieur correspond cette diminution de poids, qui coïncide extérieurement avec Tapparition de grandes quantités de sucrase dans le liquide? Je vais chercher à montrer que c'est à une consommation de réserves nutritives que les variations de poids du végétal rendent probable; cette probabilité est confirmée et par les caractères extérieurs de la plante et par son aspect microscopique. •

Lorsque TAspergillus est arrivé à fructification complète, la culture a l'aspect florissant bien connu : son mycéliunà, très irrégulier et anfractueux à sa face inférieure, présente une dureté remarquable et une solidité telle qu*on peut soutenir la plante tout entière par un de ses angles sans qu'elle se déchire. Ces caractères disparaissent de plus en plus à mesure que la quantité de sucrase augmente dans le liquide ; la plante se ramollit, son mycélium s'aplanit peu à peu en devenant de moins en moins anfractueux, de moins en moins dur; au bout d'un certain temps, sa face inférieure devient glaireuse et gluante; sa résistance à la rupture est de plus en plus faible, et il arrive un moment où le moindre effort suffit pour rompre la couche mycélienne et la disloquer. A ces caractères viennent s'ajouter ceux que révèle l'examen microscopique. A l'origine, le mycélium est tellement serré qu'il est très difficile à dissocier. Il présente de place en place des renflements qui semblent bourrés, ainsi qu'un grand nombre de points dans les tubes mycéliens, d'une matière qui se colore fortement en rouge brun par l'iodure de potassium iodé, réaction qui a été indiquée par divers auteurs comme étant celle du glycogène végétal et que M. Laurent a mise à profit dans son étude sur la formation et la disparition du glycogène chez la levure de bière'. Plus tard, cette réaction devient de moins en moins nette; l'iode ne produit plus qu'une coloration jaune uniforme, les renflements mycéliens semblent devenir de plus en plus rares ou confus, et les filaments mycéliens eux-mêmes, en particulier les plus gros, semblent vides et flétris; ils sont de diamètres très variables en des points rapprochés et sont repliés sur eux-mêmes. Tout concourt donc à nous confirmer dans cette opinion qu'il y a là une consommation de réserves, produite, comme je le montrerai plus loin, par un état de souffrance de la mucédinée.

i. Annalei de V Institut Pasteur ^ 4889, p. i 13.

Les expériences que je viens de rapporter peuvent soulever une objection. Elles sont faites dans des cuvettes en libre communication avecTair extérieur, non stérilisées, et avec un liquide qui n'a lui-même subi aucune stérilisation. L'expérience apprend que ces conditions sont suffisantes pour mener une culture d'Aspergillus à bonne fin; il étouffe tous les êtres qui pourraient tenter de se développer à côté de lui, et, à moius que la semence employée ne soit vieillie et ne subisse dans son développement un retard notable, la culture est toujours pure. On peut objecter qu'il n'en est plus de même à partir du moment où les éléments nutritifs font défaut, et où le liquide est devenu de l'eau presque pure; dans ces conditions, les organismes extérieurs peuvent intervenir; il se produit une véritable macération d'Aspergillus qui, l'expérience me l'a montré, est un milieu de culture favorable à certains êtres. Les faits que nous observons pourraient donc être le résultat de la superposition d'un effet dû à l'Aspergillus et d'une b'écrétion due à d'autres microbes présents. En réalité, il n'en est rien. Je dois d'abord dire que le liquide que surnage la plante reste toujours limpide ; mais nous devons répondre à cette objection d'une manière plus rigoureuse.

Expérience IL — j Ces raisons m'ont conduit à faire des cultures en milieu stérile, non pas stérilisé par la chaleur, ce qui aurait pu produire une interversion partielle du sucre, et changer les conditions de l'expérience, mais dans un liquide Raulin stérilisé par filtration au travers d'une bougie Ghamberland. Ce liquide est introduit par portions de 40^^ mesurées avec une pipette flambée, dans un certain nombre de fioles à fond très plat, fermées par un tampon de coton et flambées. Chaque fiole renferme :

Saccharose lgr,7

Acide tartrique libre 0gr,066

c'est-à-dire environ 10 fois moins que chacune des cuvettes de notre première expérience. Ces fioles sont ensemencées aussi également que possible Avec des spores d'Aspergillus cultivé à l'élat de pureté. Voici les résultats de cette nouvelle expérience.

urée

Sacch.

S. int.

Sucre cons.

Acidité.

Sucrase.

Poids de plante.

restant.

gr-

gr-

gr.

gr.

traces.

A partir du septième jour, la diminution de la sucrase, qui est vraisemblablement due à une oxydation, devient lente et très irrégulière si Ton passe d'une fiole à l'autre, de 24 heures en 24 heures, ce qui peut tenir à ce qu'une légère différence, existant à l'origine entre nos vases de culture, et s'accentuant avec le temps, a produit une différence notable dans la formation de la sucrase et dans son passage dans le liquide. Si, comme je le montrerai et comme les faits signalés permettent de le prévoir, ce phénomène est un fait de diffusion, il peut fort bien, envisagé sous ce jour nouveau, perdre le caractère de régularité qu'on eût été jusqu'ici autorisé à en attendre. Ta\ d'ailleurs constaté, dans une expérience analogue à la première relatée, un passage notablement moindre de sucrase dans le liquide, sans qu'il m'ait été possible de saisir la cause certaine de cette diminution ; je reviendrai dans la dernière partie de ce travail sur un fait analogue et sur l'explication que je crois pouvoir en donner. Revenons au tableau ci-dessus pour examiner le phénomène tant que sa marche est régulière.

Notons d'abord que cette nouvelle expérience diffère de la première en ce que l'aération de la plante est moins facile ; de plus, le liquide est en couche plus mince, c^est-à-dire que le rapport entre sa surface et son épaisseur est plus considérable. Sans vouloir trop insister pour le moment sur cette circonstance, nous ne pouvons cependant nous empêcher de la rapprocher de ce fait que la plante a atteint son développement complet plus rapidement (la formation des spores commençait déjà au bout de 30 heures), le sucre a disparu plus vite, et la sucrase a passé dans le liquide en quantité relativement bien plus grande que dans la première expérience. Ce rapprochement est encore autorisé par une troisième série d'expériences, conduites en tout point comme les précédentes, ce qui me dispense d'en donner le détail, mais dans lesquelles les vases de culture étaient parcourus par un courant d'air destiné à maintenir constamment la plante en contact avec un excès d'oxygène. Dans ces conditions, bien que la diminution de poids du végétal se soit également produite, l'apparition de la sucrase dans le liquide a été très lente, et sa quantité plus faible; elle ne dépassait pas 12 unités à la fin du 5* jour; puis elle est montée à 30 unités, le 6« jour, pour décroître ensuite irrégulièrement.

v^oogle

En somme, si nous mettons de côté les diiTérences que ces deux nouvelles séries d'expériences présentent au point de vue des quantités de suc rase, différences dont nous ne sommes pas encore prêt à donner une explication solidement établie, nous voyons que la marche du phénomène est la même lorsque TAspergillus est cultivé en liquide stérile ou dans des cuvettes: la quantité de sucrase^ très faible à Voriginey croît rapidement ensuite^ à partir du moment où le sucre a disparu.

De différentes causes qui provoquent l'apparition de la sucrase dans le liquide de culture de VAspergillus.

J'ai fait voir que l'apparition de la sucrase dans le liquide de culture de TÂspergillus correspond à une consommation de réserves nutritives; comme cette consommation de réserves coïncide avec la disparition de l'aliment principal de la plante, on est conduit à penser que le passage de la sucrase à l'extérieur des cellules subit l'influence d'un état de souffrance de ces cellules. Je vais chercher à donner une preuve expérimentale de cette manière de voir; cette preuve expérimentale va en même temps répondre à une idée qu'on pourrait se faire sur la fonction diastàsigène de l'Aspergillus, en se fondant sur des faits qui existent dans la science au sujet de cette fonction.

M. Wasserzug a étudié * une mucédinée du genre Fusarium, chez laquelle l'apparition de la sucrase coïncide avec la formation des conidies ; il ajoute, il est vrai, fort justement, que l'absence de sucrase dans le liquide ne permet d'émettre aucune opinion sur ce qui peut se passer dans l'intérieur des cellules. D'ailleurs, avec l'organisme de M. Wasserzug, la disparition du sucre marche très lentement, et la quantité de sucrase qui apparaît dans le liquide, autant qu'il est possible de conclure à cette quantité en envisageant la dose de sucre interverti présent, est toujours assez faible, de sorte qu'il y a là une grande différence avec ce que. nous observons pour l'Aspergillus. Mais on peut considérer que ce n'est qu'une différence de doses, telle qu'on peutl'observer entre un organisme consommateur peu énergique de sucre et un organisme dont cette substance est, au contraire,