Chapitre XX

Orchitophrya stellarum Cépède.

(PI. XV et XVI)

J'ai déjà signalé brièvement (1907), Orchitophrya stellarum, qui constitue le premier exemple connu d'Infusoire astome parasite des Echinodermes, et le premier représentant de ce groupe qui infeste les glandes génitales. J'ai montré, en outre, l'intérêt qui s'attache à son étude éthologique en notant son action sur les testicules des Etoiles de mer. Par son abondance dans les glandes génitales mâles des Asteracanthion rubens, V Orchitophrya stellarum Cépède entraîne la dégénérescence d'un certain nombre de cellules sexuelles. Ce parasite gonotome cause la castration partielle et directe de son hôte. Il représente le groupe des Infusoires astomes dans la liste déjà si vaste des organismes qui produisent la castration parasitaire (1).

Habitat. — Orchitophrya stellarum est un parasite très rare. Depuis l'époque où il m'a été signalé par V. Willem (1906), j'ai disséqué aux diverses périodes de vive eau un grand nombre d'Etoiles de mer.

Toutes ces Etoiles de mer provenaient des stations classiques de notre côte boulonnaise : Audresselles, Pointe-à-Zoie, Wimereux (Tour de Croy), Roches-Bernard à Boulogne-sur- Mer. La majeure partie d'entre elles ont été récoltées à la Pointe-à-Zoie et à la Tour de Croy. Sur plusieurs milliers d'Etoiles sacrifiées (plus de 6.000), trois seulement étaient parasitées (2).

(1) Voir à ce sujet les belles recherches de Giard (1887-1908) et l'article très documenté et très clair de Julin (1894).

(2) L'extrême rareté de ce parasite, est encore confirmée par ce fait que GURD et ses nombreux élèves ne le rencontrèrent jamais au cours des multiples expériences de fécondation artificielle qu'on répétait en grand nombre annuellement afin d'étudier l'embryogénie des Etoiles de mer

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Les femelles étaient toujours indemnes. Ce fait est à rapprocher de celui rappelé par Giard (1907) chez une Entomophthorée : Entomophthora arrenoctona Gd qui infeste les mâles seulement de Tipula oleracea.

La taiUe des mâles parasités est variable : le premier mesurait 70 mm. de rayon, le deuxième 92 mm., le troisième 110 mm.

Si le nombre des Etoiles parasitées est excessivement restreint, celui des Orchitophrya qu'héberge un même hôte est, au contraire, considérable et le simple examen d'une coupe du testicule suffit à s'en convaincre (fig. 84).

Les Infusoires circulent à travers le testicule, parmi les cellules sexuelles. Ils chevauchent les uns sur les autres en se déformant à leur contact réciproque. Lorsqu'ils s'insinuent à travers des obstacles, la forme de leur corps se modifie beaucoup et quand la moitié de l'Infusoire est passé, l'organisme a l'aspect d'un bissac.

Aspect de l'Infusoire. — Etudié in vivo, dans les débris de testicule de l'hôte préalablement dilacérés, le parasite est très facilement visible parmi les cellules sexuelles.

Les nombreuses granulations, qui remplissent la majeure partie de son endoplasme, lui donnent une teinte grise plus accentuée dans sa région postérieure.

La forme générale de l'Infusoire est celle d'une poire plus ou moins allongée, légèrement comprimée surtout dans sa partie renflée (fig. 89). Cet aplatissement définit une face de reptation que j'appelle face ventrale ; je nomme face dorsale, la face opposée.

Orchitophrya progresse toujours dans un sens déterminé. J'appelle donc région antérieure la partie la plus étroite qui se trouve en avant dans la progression.

La plus grande largeur, variable selon les individus observés, est, en général, placée vers le tiers ou le quart postérieur du corps (fig. 89, 94, 106). Les bords latéraux sont plus ou moins convexes selon le mouvement de l'animal. La longueur oscille entre 35 jj. et 65 ^a. La combinaison de ces deux échelles de

INFUSOIRES ASTOMES 477

variations donne l'ensemble des formes possibles du parasite.

Ectoplasme. — L'ectoplasme est très mince (fig. 108). Il montre un nombre très peu constant de stries d'insertion ciliaire (16 à 20). Elles sont longitudinales sur presque toute la longueur du corps (fig. 108). Au fur et à mesure que le contenu de la glande génitale devient plus liquide, les stries d'insertion ciliaire s'incurvent légèrement selon la génératrice d'une hélice dont le pas devient de plus en plus court.

Ces stries viennent concourir à la partie postérieure acuminée en gerbe tournante de feu d'artifice (fig. 107).

Les stries d'insertion ciliaire sont des éminences cuticulaires (fig. 68 et fig. 108) dont la partie sous-jacente est différenciée dans un but cinétique. Cette région est plus épaissie sous chacun des cils. Elle montre, aux plus forts grossissements, à cet endroit, le corpuscule basilaire du cil qui prend le Magenta, et duquel part une racine très courte qui s'enfonce dans le cytoplasme (fig. 108).

Ces stries d'insertion ciliaire s'arrêtent avant la partie terminale antérieure et ventrale de l'astome. Cet arrêt définit une plage non ciliée qui figure, à mon avis, la place occupée par la bouche chez l'espèce ancestrale de notre parasite (fig. 91). Chez certains individus, on observe en outre, au-dessous et en arrière de la plage non ciHée, les restes du cytopharynx en dégénérescence. On aperçoit une série de petites Hgnes ponctuées qui forment une aire allongée granuleuse rappelant celle àUntoshellina Maupasi. La région antérieure du corps est beaucoup plus compacte ; elle est susceptible de s'incurver de façons très diverses.

Dans la partie supérieure, la région ectoplasmique paraît plus épaisse ; elle s'avance en une zone contractile et très résistante qui sert à l'Infusoire à se frayer un chemin au sein de la glande sexuelle parasitée.

Cils. — Les cils vibratiles sont distants l'un de l'autre d'une longueur variable avec le point du corps considéré. Dans la partie antérieure ils sont à peine distants de j de w ; dans Idf

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partie moyenne, au contraire, il y a, entre deux cils consécutifs, une distance de 2 a à 2 [j. 5 et, dans la partie postérieure, ils ne sont plus qu'à 1 ^w. 8 d'intervalle.

La taille est également variable : ils sont, sur tout le corps, épais, longs et flexueux, mesurant de 7 fj. à 7 a 5 vers le milieu du corps, et ont une longueur de 8 y. à 8 y. 5 dans la région postérieure.

Chez Orchitophrya stellarmn Cépède, les cils ne sont pas à section circulaire. Les plus forts grossissements (oc. 12 obj. 1.5) m'ont permis de voir que ces éléments sont aplatis, de telle sorte que leur section transversale est elliptique. Leur structure n'est pas homogène. La région axile est moins transparente que la région superficielle. Après double coloration, elle apparaît plus avide des colorants chromatiques que la région superficielle, laquelle est assez affine des réactifs cytoplasmiques.

Endoplasme. — Le cytoplasme est très limpide dans la région antérieure du corps ; il devient spumeux dans la région postérieure.

L'examen microchimique montre que certaines granulations endoplasmiques sont constituées par du glycogène (fig. 87), tandis que d'autres sont franchement de nature graisseuse, (fig. 88). Certaines d'entre elles sont basophiles, d'autres acidophiles.

Etudiées in vivo, les granulations les plus claires, plus petites que les autres, ont un aspect réfringent (fig. 85) ; elles se colorent en noir par l'acide osmique et par les fixateurs osmiques (fig. 88).

J'ai répété l'expérience de Daddi pour mettre en évidence l'existence de granules graisseux endoplasmiques (1). Cette méthode doit confirmer les résultats obtenus par la réaction osmique. Mais elle a comme elle l'inconvénient de réagir sur des Infusoires fixés.

(1) La méthode introduite dans la technique par Daddi est la suivante : Pour rechercher les éléments graisseux, on traite les Infusoires fixés au sublimé à 2 % avec une solution saturée dans de l'alcool à 70° de rouge Soudan m. Les granules graisseux se colorent vivement en quelques minutes. Les autres éléments du Protoisoaire restent incolores.

IXFUSOIRES ASTOMES 479

Il devenait intéressant d'étudier l'action in vivo d'un réactif permettant de déceler les éléments gras du cytoplasme sans altérer l'Infusoire.

Pour cela, j'ai adopté dans mes études cytocliimiques la méthode que Issel (1905) a recommandée dans son travail sur les Ancistrides du golfe de Naples. Cette technique est très simple. Elle consiste uniquement dans l'action colorante in vivo du rouge neutre en solution saturée dans l'eau de mer. Je l'ai employée sans modification pour le parasite des Etoiles de mer pour les raisons que j'ai déjà exposées dans un travail antérieur.

Pour mes recherches de biochimie cellulaire des autres Infusoires astomes altérés par l'eau de mer, j'ai modifié la technique de la manière suivante : J'ai remplacé l'eau de mer comme dissolvant du rouge neutre par la solution physiologique isotonique du liquide digestif des animaux hébergeant les parasites intestinaux considérés.

Les résultats obtenus ainsi ont montré l'opportunité de cette modification de la méthode de Issel.

Sous l'ectoplasme, et entre les stries d'insertion cihaire, des colorations très fines, m'ont permis de mettre en évidence des éléments myonémiques intéressants (fig. 88). Pour cela, j'ai employé avec les fixateurs ordinaires (sublimé acétique, subhmé alcoohque de Schaudinn et liquide de Bouin) la coloration à l'Hémalun-éosine-orange. Ainsi, il se différencie nettement en coupes, des plages mauves dont le contour est franchement circulaire. Ce sont les sections des myonèmes longitudinaux.

Macronucléus. — Le macronucléus, unique, est le plus souvent, au repos, subsphérique ou ovoïde. Quelquefois il prend une forme irrégulière mais toujours plus ou moins globuleuse (fig. 85, 86, 87). Il occupe ordinairement la partie centrale de l'endoplasme. Parfois, il est déjeté sur le côté jusqu'à venir presque au contact de la région sous-cuticulaire ectoplasmique.

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Sa taille varie en fonction de celle de l'Infusoire. Elle oscille entre 8 p et 13 p. de diamètre environ.

MiCRONUCLÉus, — Le micronucléus est plus colorable que le macronucléus. Il occupe une position très variable dans l'endoplasme et relativement au macronucléus. Au repos, sa forme est subsphérique ou ellipsoïdale. Dans le premier cas, il mesure 2 jU à 3 p de diamètre ; dans le deuxième, le grand axe de l'ellipsoïde a 4 p, et le rayon de son cercle médian de 1 |y. à 2 fx.

Division. — UOrchitophrya se divise transversalement. Le micronucléus s'allonge d'abord en même temps que sa chromatine s'ordonne dans le sens du grand axe fusorial (fig. 89). Puis chaque moitié du fuseau orienté dans le sens de la longueur de l'Infusoire se détache de l'autre et finalement le micronucléus a donné deux micronuclei-fils. Un sillon transversal apparaît vers le milieu de la longueur du corps et en s'approfondissant graduellement divise l'Infusoire en deux parties. Le macronucléus, très allongé, s'étrangle au niveau du sillon et chacun des Infusoires-fils est ainsi constitué.

Au cours des recherches que j'ai poursuivies sur l'accommodation d'Orchitophrya stellarum Cépède au milieu marin, j'ai pu constater que la division s'effectuait aussi bien dans le testicule de l'hôte que dans le milieu extérieur.

Adaptation au milieu marin. — En étudiant Orchitophnja stellarum Cépède dans les débris de testicule d'Etoile de mer, l'Infusoire conserve, pendant un temps assez long (jusqu'à une demi-heure) une morphologie et une cytologie normales.

Si, au contraire, je broie un peu de la glande génitale parasitée dans une assez forte quantité de solution physiologique, l'Infusoire subit des modifications pathologiques, analogues, quoique lentes, à celles qu'éprouvent les Protozoaires endoparasites et les Infusoires astomes spécialement (en particulier Anoplophrya (p. 425), Protophrya (p. 465), etc.), lorsqu'ils sont plongés dans Veau douce ou dans tout liquide ana-

INFUSOIRES ASTOMES 481

logue de tonicité inférieure à celle de leur milieu parasitaire habituel.

L'extrême rareté du parasite qui nous occupe, l'abondance des Etoiles de mer dans un même creux de rocher, la grande quantité d'Orchitophrya qu'on observe dans un même hôte et l'action tout à fait inattendue du Uquide physiologique sur la constitution d'Orchitophrya stellarmn m'ont conduit à étudier Faction du milieu marin sur cet intéressant Infusoire.

A cet effet, j'ai fait une série d'expériences qui consistaient :

P A prendre un fragment de testicule parasité et à étudier l'aspect de l'Infusoire dans le milieu semi-fluide obtenu par sa dilacération ; 2° à additionner progressivement de l'eau de mer filtrée à cette préparation et à observer les changements subis par VOrchitophrya au cours de ces additions successives ; 3^ à mettre dans un verre de montre un fragment du testicule comme un quart de noisette et à remplir ce verre de montre d'eau de mer ; 4P à mettre un testicule dilacéré dans un cristallisoir plein d'eau de mer et à étudier le sort réservé à l'Infusoire parasité; 5<^à tenter l'infection artificielle de nouvelles Etoiles par immersion dans les cristalHsoirs ensemencés.

La conclusion générale de ces recherches peut se résumer comme suit :

P Pendant la vie à Vintérieur du testicule de VEtoile de mer, le parasite accumule dans son endoplasme une grande quantité de substances de réserve, les unes amylacées, les autres de nature grasse.

2o L'appareU locomoteur de nature ciliaire montre les stries disposées selon des rangées longitudinales ou à peine incurvées selon une héUce à très long pas.

3° L'extrémité antérieure du corps, quoique plus étroite que la postérieure n'en est pas moins souvent très obtuse et bourrée de substances de réserve.

482 CASIMIR CÉPÈDE

4P Le corps est toujours massif. Le rapport de la longueur à la largeur du corps, variable selon les Infusoires, reste toujours très petit (fig. 89). La moyenne de quelques-uns de ces rapports chez des individus pris au hasard de l'observation nous donne comme indice d'allongement : y.

50 La progression de l'animal dans le testicule s'effectue surtout par simple translation.

6^ Dans Veau de mer, Orchitophrya stellarum Cépède ne subit pas de déformations pathologiques. Ulnjusoire s'adapte au milieu marin. Ses mouvements sont très rapides, son cytoplasme est tout à fait normal. L'appareil ciliaire conserve ses caractères cytologiques normaux et l'extrémité antérieure du corps augmente sa sensibiHté tactile.

7° L'adaptation de l'Infusoire peut être considérée comme instantanée. A peine dans l'eau de mer, le parasite imprime à son corps, à l'aide de ses myonèmes longitudinaux, une torsion autour de son axe longitudinal. Ce phénomène (fig. 85, 86, et 87) est suivi d'un allongement très net (indice ~). Il entraîne un changement de l'orientation des stries d'insertion ciliaire qui se disposent sur des hélices subparallèles.

8° Les cils continuant à battre activement d'avant en arrière suivant la direction de leurs lignes d'insertion ciliaire, l'action de la force de propulsion antéro-postérieure pendant la vie dans le testicule de l'hôte, s'exerce maintenant selon une hélice. De ce fait, à la simple translation s'est substitué un mouvement de progression par mouvement giratoire autour de l'axe longitudinal du corps. Ce nouveau mode de locomotion donne à l'Infusoire une vitesse beaucoup plus grande.

9^ L'endoplasme devient plus clair par disparition progressive et partielle des éléments graisseux et amylacés emmagasinés par le parasite au cours de la vie intratesticulaire.

10° Cette vie externe pendant laquelle le parasite épuise ses réserves semble devoir être d'assez longue durée et devoir s'achever avec la disparition totale de ces réserves.

IP J'ai pu suivre, en compagnie de mon regretté maître,

INFUSOIRES ASTOMES 483

le professeur Giard, qui a présenté mes résultats à l'Institut (1907), l'adaptation d' Orchitophrya stellarum Cépède au milieu marin pendant seize jours, soit en présence d'Etoiles de mer indemnes, soit dans l'eau de mer seule.

12° Tous mes essais (24) d'infection expérimentale directe m'ont donné des résultats négatifs.

130 L'adaptation au milieu marin 6! Orchitojphrya paraît être un phénomène normal de la vie de cet Infusoire.

140 Les transformations résultant de cette adaptation sont surtout d'ordre cinétique ; elles tendent au déplacement rapide de l' Infusoire au sein du milieu marin.

150 La rareté du parasite, son habitat si spécial, son adaptation prolongée unique jusqu'ici chez les Astomes au miheu dans lequel vit l'hôte, permettent de supposer que : P le milieu parasitaire et le milieu marin ont une tonicité égale ou très peu différente; 2° la contamination des Etoiles de mer (malgré les résultats négatifs de mes essais d'infection expérimentale) doit s'effectuer par un processus d'infection directe.

Action de la putréfaction de l'hôte

L'étude des transformations subies par VOrchitophrya stellarmn Cépède au moment de la mort de son hôte ou plutôt pendant la décomposition post-mortem de l'organe qu'elle parasite méritait d'être abordée. Pour cela, j'ai placé dans un verre de montre avec un peu d'eau de mer un fragment de testicule d' Asteracanthion rubens qui montrait de très nombreux Ciliés à son intérieur.

Après un jour, la glande génitale était en pleine pvitréf action. A son intérieur, les parasites vivaient très bien ; on en observait même qui se divisaient transversalement.

Enkystement

Une seule fois j'ai eu l'occasion d'observer l'enkystement solitaire d'Orchitophrya au cours de la putréfaction de l'organe

parasité. Ce kyste, que je considère uniquement comme un

stade de résistance du parasite, est caractérisé par l'épaisseur relativement grande de sa paroi; elle mesure en effet 12 a, alors que le diamètre total du kyste subsphérique n'est que de 68 IX. Par transparence, à travers la membrane kystique hyaline, on peut voir à l'intérieur le macronucléus et le micronucléus de V Orchitophrya

au sein de l'endoplasma renfermant de nombreux grains de

réserve (fig. xvi).

FiG. XVI. Kyste à' Orchitophrya stellarum. N, macronucléus ; », micronucléus, X 500.

J'ai pu suivre ad vivum le processus d'enkystement. Lorsque l'Infusoire va s'entourer d'une paroi résistante, il rabat la partie antérieure du corps, définie par ses granulations hyalines très nombreuses, précédant la zone prénucléaire homogène, contre la région postérieure de manière à constituer une sorte de tore à peine interrompu par le chevauchement imparfait des deux extrémités de l'Infusoire. Ainsi repliée, V Orchitophrya qui a un diamètre de 56 [j. 5 commence à tourner, l'extrémité antérieure dirigée en avant au cours de la rotation autour de l'axe du tore (fig. xvii).

Les cils, animés d'un battement très actif au début de l'enkystement se ralentissent peu à peu au fur et à mesure de l'individuaHsation de la membrane protectrice.

Finalement, l'épaisseur, relativement grande de la paroi

Fig. XVII. — Enkystement d'O.

stellarum. N, macronucléus; n micronucléus. Le sens de la rotation est indiqué par la flèche.

INFUSOIRES ASTOMES 485

du kyste infusorial solitaire ne permet plus de suivre les mouvements très lents de l'appareil ciliaire. UO}xJiitophrya forme un kyste analogue à celui que j'ai décrit plus haut (fig. xvi).

Pendant tout le processus d'enkystement le micro et le macronucléus ne cessent pas d'être visibles sous forme de taches claires, homogènes.

Par l'action du carmin acétique de Schneider j'ai pu, à la fin de mon observation, constater la structure et la forme de ces éléments nucléaires. Après quelques minutes, ils avaient pris une belle teinte rose caractéristique. Le macronucléus, ovale elliptique (fig. xvii), mesurait 15^7. de grand axe (longitudinal) sur 10 ,u de petit axe (transversal). Le micronucléus gisait à quelque distance du macronucléus entre ce dernier et l'extrémité antérieure. Sphérique, dans l'axe de l'Infusoire, il mesurait 3 a de diamètre.

Cycle évolutif jy' Orchitophrya stellarum.

Tandis que les processus sexués sont connus avec une grande précision chez les Infusoires ciliés holotriches libres depuis les belles recherches de INIaupas, confirmées et complétées par les travaux de ces vingt dernières années et que le cycle évolutif des Opalinidae a été tracé par Neresheimer (1904) et réétudié plus récemment par Metcalf (1907) nous ne connaissons aucun fait précis concernant celui des Astomata sensu meo.

J'ai dit ailleurs (1) ce qu'il fallait penser du travail d'AiMÉ Schneider (1885) sur Collinia circulans et j'ai indiqué les observations inédites de Caullery et Mesnil sur les phénomènes sexués des Astomes des Annélides.

Dans le présent chapitre, je me propose d'étudier aussi brièvement que possible le cycle évolutif d'Orchitophrya stellarum Cépède, le seul qui nous soit bien connu jusqu'ici, en

(1) Au cours de l'impression du présent travail a paru une intéressante étude de Collin (1909) sur la conjugaison de Collinia branchiarum Stein (V. Arck. de Zool. exp., 5« série, T. 1, n" 4, mal 1909).

ARt'H. DE ZOOt. EXP. ET UÉ.V. — 5» SÉRIE. — T. IH, — (IV), 33

486 CASIMIR CÊPÊDE

insistant sur la ressemblance très grande qui existe entre ce cycle évolutif et celui des Ciliés ordinaires.

Cette concordance constitue un excellent argument en faveur de la thèse soutenue dans ce mémoire, thèse d'après laquelle les Infusoires astomes sont des Ciliés typiques et dont le cycle évolutif s'éloigne considérablement de celui des Opalines.

L'observation des processus karyogamiques est rendue particulièrement délicate par l'accumulation dans la partie antérieure du corps des conjoints des granules graisseux qui se colorent fortement en noir (fig. 90, 92 et suiv.) par les fixateurs osmiques.

L'extrême rareté du matériel ne m'a pas permis de retrouver des Infusoires aux diverses périodes de la conjugaison. Seul V Asteracanthion rubens obhgeamment fixé par Willem, à l'aide du liquide de Borrel m'a montré les divers stades de cette intéressante évolution.

Les deux autres Etoiles que j'ai observées, infestées par VOrchitophrya, ne m'ont jamais montré d'Infusoires accouplés.

L'étude des processus de conjugaison eût été beaucoup plus facile à l'aide de la fixation par le sublimé acétique, sur frottis colorés ensuite par l'Hématoxyline de Heidenhain. Ne pouvant, malgré de longues recherches, me procurer les matériaux de cette étude, j'ai poursuivi mes observations sur les préparations obtenues par des coupes sériées du testicule de l'Etoile de mer.

Au moment de l'accouplement, les deux Infusoires s'accolent longitudinalement en maintenant au contact la partie ventrale antérieure du corps où j'ai signalé (1907) la présence d'un vestige de la bouche, sous la forme d'une plage non ciliée où viennent converger les stries d'insertion ciliaire (fig. 90).

L'extrémité postérieure du corps seule demeure libre. J'ai observé une seule fois, ad vivum, les phénomènes préliminaires de l'accouplement. L'accolement des deux conjoints s'effectue après une série de manœuvres qui durent assez longtemps.

INFUSOIRES|ASTOMES 487

Les Infusoires s'approchent, s'éloignent, se touchent par leurs extrémités antérieures, tourbillonnent, puis, finalement se saisissent par leur face ventrale antérieure. Lorsque l'union est achevée, les deux conjoints adhèrent l'un à l'autre par la paroi de la région d'accolement.

Chez les Infusoires libres, un certain nombre d'observateurs ont noté des « ménages à trois » et même des « ménages à quatre ». Stein (1867), Jickeli (1884), observèrent des unions de trois individus et Maupas (1889) des unions de trois et même quatre individus chez Paramœcium caudatum. Je n'ai pas vu de phénomènes semblables chez Orchitophrya.

Comme chez les Infusoires libres, les individus qui s'accouplent sont de taiUe très petite. Les plus gros Infusoires accouplés mesurent 26 [j. environ alors qu'on rencontre parfois des individus libres qui atteignent 65 ij. de longueur. Les accouplements se produisent, en général, entre individus ayant de 25 u. à 36 y. de longueur.

La morphologie externe des conjoints étant maintenant connue, nous allons étudier les processus intimes de la fécondation.

Ces changements résident entièrement dans l'étude de l'évolution des éléments karyogamiques issus du micronucléus.

MiCRONUCLÉus AU REPOS. — A l'état statique, le micronucléus a une forme sphérique ou ovoïde. Sa chromatine est disposée à son intérieur d'une manière assez irrégulière. Elle apparaît comme de très fins grains qui prennent fortement les colorants nucléaires ou sous la forme de très fins filaments chromatiques tassés dans sa région centrale ou contre sa paroi.

Dès que l'accolement des gamètes a lieu le micronucléus commence son évolution.

Stade d'accroissement du micronucléus. — Si, à l'exemple de Maupas (1889), nous considérons le stade de repos décrit au paragraphe précédent comme la première phase {Ax) du processus sexué, le stade d'accroissement représente la deuxième

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phase (^2). Bientôt le micronucléus des deux conjoints prend une forme ellipsoïde tandis que la chromatine s'éparpille à son intérieur d'une manière assez régulière. Cet accroissement se continue tandis que l'allongement longitudinal du micronucléus s'accentue davantage. Pendant ce temps, la membrane micronucléaire s'accroît considérablement. Elle se gonfle de manière à constituer un croissant irrégulier qui apparaît à une certaine distance du contenu micronucléaire. Celui-ci a pris un aspect de fuseau irrégulier légèrement arqué vers la face d'accouplement. Nous atteignons la phase (^3) de Maupas. Par suite de l'allongement qui se continue, la distance qui sépare la membrane nucléaire de la partie colorée de son contenu s'exagère. Les traînées nucléoplasmiques courent d'un pôle à l'autre de ce long fuseau irrégulier dans lequel on aperçoit la chromatine sous forme de très fins grains. Nous avons atteint le stade (^4) de IVIaupas (fig. 90).

A partir de ce moment, nous allons assister à une transformation considérable de la substance chromatique. Le long du fuseau micronucléaire qui se condense et se raccourcit, on voit les traînées nucléoplasmiques s'individualiser davantage et tracer finalement une série de stries méridiennes de plus en plus nettes et montrant parfois de rares anastomoses (fig. 92). Ces filaments longitudinaux précisent leur trajet. A ce moment, le micronucléus a achevé les transformations du stade A, il entre dans la phase 2 ou stade (B) de Maupas (fig. 93).

l La fréquence des stades Ai montre, qu'en accord avec les observations faites sur les Paramécies, le stade d'accroissement est le plus long du processus karyogamique.

Pendant le stade {B), le micronucléus condense sa chromatine sous forme de chromosomes. Ces chromosomes sont constitués par la réunion d'un certain nombre de granules chromatiques. Dans cette condensation, un des conjoints est en avance sur rau.tre (fig. 92). En même temps, la chromatine s'est portée vers l'équateur de la figure micronucléaire fusi-

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forme de manière à simuler une plaque équatoriale un peu irrégulière, certaines masses chromatiques étant placées sur les filaments entre l'équateur et les pôles du fuseau (fig. 92).

Après ce stade, apparaît un diaster presque typique. La chromatine s'est ordonnancée selon deux plaques très nettes, quelcpies granules se voyant en outre entre les deux plaques chromatiques (fig. 93). On peut rapprocher ces divisions de celles observées par Léger au cours de la gamétogénèse de Stylorhynchus (1904).

Finalement (fig. 93, individu de gauche) les deux micronuclei-fils se séparent.

Au stade (0), les micronucléus ordonnancent encore leur chromatine sous forme de fins grains disposés sur l'axe du fuseau (fig. 94). Les deux parties extrêmes du long boyau en bissac ainsi obtenu, se scindent bientôt de manière à donner naissance à quatre micronuclei (fig. 94 et 96). Nous atteignons ainsi la fin du stade C (fig. 102) ; à ce moment, les micronuclei qui vont donner naissance aux éléments copulateurs (fig. 104) sont placés dans le voisinage immédiat l'un de l'autre au niveau de la surface d'accolement des deux conjoints. Par une dernière division, qui marque le stade (D), laquelle apparaît déjà dans la forme de ces micronuclei, les corpuscules micronucléaires copulateurs s'individualisent et par leur copulation deux à deux achèvent la conjugaison des deux conjoints et nous arrivons ainsi à la fin du stade E.

Avec le stade suivant {F), commencent les transformations des éléments qui ont copule.

Par deux divisions successives, les corpuscules d'union donnent quatre masses chromatiques dont l'une se différencie bientôt en micronucléus reconnaissable à l'exiguïté de sa taille et au tassement de sa chromatine (fig. 105 et 106).

La comparaison de ces figures qui rappellent exactement la figure 53 de Maupas avec celle de Clara Hamburger (fig. 36) montre que l'évolution ultérieure des produits de copulation poursuit le même cycle que chez les Infusoires ciliés tvpiques.

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Considérations générales sur la conjugaison des astomes

La conclusion générale qu'il y a lieu de tirer de l'étude de ces phénomènes est l'analogie qui existe entre ces processus et les processus analogues chez les Ciliés libres.

Il est intéressant de noter en outre que le milieu dans lequel vit Orchitophrya stellarum est une glande génitale à cycle annuel. A ce titre, la constitution du milieu parasitaire subit une variation constante dont il est logique de soupçonner la répercussion sur le parasite. Le cycle de maturation de la glande génitale des Asteracanthion rubens en relation avec les variations cosmiques s'effectue dans les mois printaniers. Il se termine en général vers la fin d'avril, époque à laquelle Willem fit les fixations.

Les coupes de testicules montrent en effet une très grande quantité de spermatozoïdes mûrs tandis que celles que j'ai fixées antérieurement (fin mars, fig. 84) montrent encore un très grand nombre de cellules sexuelles aux divers stades de la spermatogénèse.

La maturité des éléments sexuels peut entraîner dans le chimisme du milieu parasitaire une transformation qui agisse sur le parasite comme l'appauvrissement des cultures agit sur les Infusoires libres en préparant les processus de conjugaison.

Une telle explication des faits est en concordance avec les théories actuelles qui essaient d'expHquer la sénescence des Infusoires par l'appauvrissement du milieu.

Pendant toute la maturation de la glande, les Infusoires se sont multipliés activement de sorte que les multiplications cellulaires de l'hôte et les multiplications du parasite constituent deux phénomènes concomittants dont le résultat est l'appauvrissement certain du milieu parasitaire.

Cette interprétation des faits permet de se faire une idée du peu|de fréquence des processus sexués chez les Infusoires

INFUSOIRES ASTOMES 491

astomes parasites du tube digestif de leurs hôtes, le milieu parasitaire dans lequel évoluent ces derniers étant constamment renouv(3lé par le fait même de la nutrition de l'animal qui les héberge. Cette idée peut ouvrir une voie nouvelle dans la recherche du processus sexué de ces derniers parasites. On pourrait obtenir un changement du milieu parasitaire en plaçant les hôtes dans des conditions biologiques particulières qui entraînent un appauvrissement du milieu dans lequel évoluent ces astomes. Cet appauvrissement pourrait être obtenu par le jeûne ou par le changement de nutrition des animaux hôtes et mettrait le parasite dans un nouveau milieu au sein duquel le cycle sexué pourrait se poursuivre.