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agité ce mélange pendant dix minutes dans un flacon fermé, nous avons filtré le liquide, mais en rejetant les premiers et les derniers centimètres cubes pour ne con: server que le cœur du filtrat,

Mesure de l’hydrolyse de la monobutyrine par une lipase.

Voici maintenant comment nous avons fait la mesure, en fonction du temps, de l’appauvrissement en monobutyrine de cette solution saturée, sous l’influence d’une quantité constante de lipase.

25 cm* de solution saturée de monobutyrineen milieu tampon de phosphates étaient versés dans un verre en pyrex et placés dans un bain d'eau à 16°-18°, c’est-à-dire à la température du laboratoire, En prenant cette précaution, nous avons rendu nos mesures, faites à plusieurs mois d'intervalle, absolument comparables les unes aux autres.

A ces 25 cm’, nous ajoutions soit 1 cm° de sérum, soit un gramme de pulpe d’organe de cobaye. Dans les cas où nous n'avions à notre disposition qu'une quantité moindre de pulpe d'organe, nous la faisions agir sur une quantité moindre de solution de monobutyrine, mais toujours dans le rapport de 1 à 25.

Aussitôt le mélange fait, nous aspirions le liquide dans le compte-gouttes ; après avoir essuyé l’ajutage inférieur de celui-ci, nous comptions le nombre de gouttes s’écoulant de l'appareil, Dans nos expériences ce nombre était compris entre 171 et 159, donc voisin

de 165 ; c'est parce qu’il pouvait varier avec la tempé-

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rature, que nous avons pris le soin d'opérer à température à peu près constante.

Le verre contenant le mélange était replacé dans son bain d’eau, puis nous recommencions cette opération de 10 en 10 minutes environ pendant une heure. Nous constations que .les nombres obtenus décroissaient régulièrement : la quantité de monobutyrine non transformée, résiduelle, était donc de moins en moins abondante. Les nombres de gouttes correspondant à chacun des temps mesurés avec précision étaient notés.

Il est bien évident qu’en mesurant ie pouvoir lipasique d’une pulpe d’organe, nous prenions le soin de ne pas aspirer dans le compte-gouttes des fragments de -pulpe ; celle-ci d’ailleurs, en raison de sa densité restait au fond du verre, et il nous était facile d’aspirer seule-

- ment le liquide opalescent qui la surnageaïit,

Etablissement du diagramme temps-nombre de gouttes.

Avec les nombres ainsi obtenus nous avons établi des diagrammes temps-nombre de gouttes, en portant en abcisses les temps et en ordonnées les nombres de gouttes correspondants ; les temps étaient comptés à partir du moment où nous avions ajouté soit le sérum soil la pulpe d'organes.

Nous ne donnerons pas dans ce travail les nombreuses courbes que nous avons dû établir au cours de nos recherches ; à titre d'exemple il nous suffira de repro-

duire celles qui correspondent aux mesures faites le même jour sur le sérum et les pulpes de foie, de rate,

COBAYE SAIN

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En ordonnées les nombres de gouttes ; en abcisses les

temps en minutes Diagrammes temps-nombre de gouttes,

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de poumons et de ganglions de l’un de fios cobayes sains, ayant servi de témoins.

Evaluation du pouvoir lipasique.

À l’aide de ces diagrammes, nous avons fait une évaluation (relative naturellement) du pouvoir lipasique d’un sérum ou d’un organe.

Pour cela il fallait au préalable déterminer des valeurs-étalons du pouvoir lipasique du sérum normal. Nous y sommes arrivé, en relevant dans les diagrammes temps-nombre de gouttes des sérums de cobayes sains, les temps correspondant à un même nombre de gouttes.

Dans une série d'expériences témoins où le sérum avait été remplacé par une égale quantité d’eau distillée, nous avons compté 171 goulles et ce nombre n’a pas varié avec le temps puisqu'il n’y avait pas de lipase. Dans les premières numérations portant sur les mélanges monobutyrine + sérum frais, nous avons compté des nombres de gouttes très voisins, mais en général un peu plus faibles : ils allaient, comme nous l’avons déjà dit, de 171 à 159 soit en moyenne 165.

Sur les diagrammes temps-nombre de gouttes des sérums normaux, nous avons alors relevé le temps: au bout duquel les mélanges monobutyrine + sérum frais ont donné 155 goutles ; nous avons trouvé comme nombre moyen 11 minutes. Puis nous avons relevé le temps au bout duquel le nombre 150 gouttes a été atteint ; nous avons trouvé comme nombre moyen 22 minutes.

Le 10 es Ce sont ces valeurs :

155 gouttes : + 7: 00 OEMnUlES 450 gouttes ....-. , +:.1 2,22 minuies

que nous avons retenues comme valeurs-étalons.

Nous avons ensuile comparé à ces valeurs-étalons les valeurs données par les sérums des différents cobayes sains, inoculés ou traités. Nous voyons immédiatement qu’à cause de cette comparaison il est absolument nêécessaire de faire toutes les mesures à la même température à 2 ou 3° près.

Supposons qu’un sérum donne les valeurs suivantes : 155 gouttes au bout de 17 minutes, et 150 au bout de 32. Les premiers nombres montrent qu'il faut 17 minutes pour que la transformalion de la monobutyrine soit égale à celle déterminée en 11 minules par le sérumétalon ; les seconds montrent qu’il faut 32 minutes pour déterminer la même transformation que le sérum-étalon en 22 minutes.

Les pouvoirs lipasiques des sérums sont inversement proportionnels aux temps nécessaires pour produire des actions identiques. Nous voyons donc que d'après les premiers résultats le pouvoir lipasique du sérum

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examiné est égale à ne — 0,65, d'après les deuxièmes à

22 « N 3 DR 0,69 de celui du sérum-étalon, soit en moyenne

de 0,67, la Leneur du sérum normal moyen étant prise comme unité,

En appliquant cette méthode physique au dosage re-

latif de la lipase des sérums ou des organes, nous avons obtenu des nombres que l’on peut comparer en les groupant de différentes façons. Nous avons pu suivre ainsi pendant plusieurs mois les variations du pouvoir lipasique du sérum de chacun des cobayes sains, inoculés, traités où non, comparativement à la teneur du sérum normal moyen ; nous avons pu suivre aussi les variations du pouvoir lipasique du sérum de chacun des cobayes, comparativement à la valeur qu’il avail au début des expériences avant loute intervention. |

Pour les organes, nous avons établi d’une part leur pouvoir lipasique comparativement à celui des mêmes organes chez les animaux sains, et d'autre part comparativement à celui du sérum de l’animal le jour où il a été sacrifié.

$ 2. — Méthode chimique

Pour doser le pouvoir lipasique du sang ou des or- ganes, on peut évaluer la quantité d’acide butyrique produite en un temps déterminé par une certaine quantité de ces produits agissant sur une solution aqueuse saturée de monobutyrine (HANRIOT, 6).

L’acide butyrique libéré est neutralisé avec une solution décinormale de carbonate de soude, en présence de phénol-phtaléine ; la réaction est représentée par l’équation suivante :

2 (CH°. CH?. CH2. COOH) + CO'Na’ — 2 (CH. CH2. CH2. COONa) + CO? + H°0

d'après laquelle 1 em de la solution décinormale de carbonate de soude correspond à 8 mgr. 8 d'acide butyrique.

Au lieu de représenter les résultats de nos mesures en poids d’acide butyrique libéré, nous avons trouvé plus simple d'exprimer directement en centièmes de cm* les quantités de liqueur décinormale de carbonate de soude nécessaires pour la neutralisation.

Voici la technique que nous avons suivie. Nous faisions tout d’abord un mélange à 1 % de monobultyrine dans l'eau distillée ; ce mélange agité pendant 10 minutes dans un flacon fermé, était ensuite filtré sur papier ; les premiers et les derniers centimètres cubes étaient rejetés car nous n’utilisions que le cœur du filtrat.

A 10 cm de ce filtrat, mesurés à la pipette et versés dans un tube stérile, nous ajoulions 1 cm° exactement de sérum clair et deux gouttes de solution alcoolique de phénolphtaléine à 1 %. Au besoin ce mélange était neu tralisé très exactement avec la solution décinormale de carbonate de soude contenue dans une microburette donnant le centième de cm°. Le tube était ensuite placé au bain-marie à 37°.

Au bout de 20 minutes, dans le tube retiré du bainmarie, nous neutralisions exactement l’acidité produite en versant du carbonate de soude jusqu’à l'obtention de Ja teinte rose persistant un instant ; nous notions le volume employé de liqueur alcaline.

Ce premier dosage effectué, le mélange était replacé au bain-marie pendant le même temps ; puis nouvelle

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heutralisation et ainsi de suite par trois fois. Pour préciser le résultat définitif, nous prenions la moyenne des 3 volumes mesurés de liqueur alcaline,

Un excès de la solution de carbonate de soude hâte et augmente le dédoublement de la monobutyrine ; il faut donc avoir soin de ne pas dépasser la teinte rose exactement limite de la phénolphtaléine. Par contre une trop grande quantité de phénolphtaléine retarderait l’action de la lipase.

D’après nos déterminations, à l’état normal le sérum sanguin du cobaye a un pouvoir lipasique correspondant à o cm* 97 de la solution décinormale de carbonate de soude.

Remarque. — Cette méthode chimique n’a présenté pour nous qu’un intérêt de contrôle. Dans le compterendu de nos résultats expérimentaux que nous donnerons plus loin, nous avons seulement indiqué en centièmes de cm les volumes moyens de solution décinormale de carbonate de soude obtenus chaque fois ; en comparant ces volumes avec les résullats de nos mesures et de nos calculs suivant la méthode physique, nous pourrons vérifier que ces valeurs varient le plus souvent dans le même sens. |

D'autre part nous avons renoncé à l’emploi de la méthode acidimétrique pour la mesure du pouvoir lipasique des organes, En effet la pulpe obtenue par broyage est, sauf pour les ganglions, généralement si colorée par l’hémoglobine sanguine qu’il est impossible d'apprécier

le virage de la phtaléine.

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