LA MESURE DU POUVOIR LIPASIQUE

Sommaire. — Méthode physique ; tension surperficielle el compte-goutles ; préparation d'une solution saturée de monobutyrine en milieu tampon de phosphates ; mesure del’hydrolyse de la monobutyrine par une lipase ; établissement du diagramme temps-nombre de gouttes ; évaluation du pouvoir lipasique d'un sérum où d’un organe ; ses variations. — Méthode chimique.

Nous savons que les lipases transforment la monobutyrine en glycérine et acide butyrique. Celte transformation est d'autant plus rapide que le pouvoir lipasique des sérums et organes examinés est plus grand ; par conséquent si nous avons à notre disposition un moyen de mesurer la vitesse d'hydrolyse d’une quantité déterminée de monobuiyrine, nous pouvons du même coup mesurer le pouvoir lipasique correspondant ; ce moyen nous est donné par la methode physique du comptegoulles.

D'autre part plus le pouvoir lipasique est grand, plus est grande la quantité d'acide butyrique apparu en un

DES Rs

temps donné à partir d’une même quantité de monobutyrine ; par conséquent en titrant cet acide butyrique par la methode acidimétrique usitée en chimie analytique, nous mesurerons encore ce pouvoir lipasique,

1, — Méthode physique.

Tension superficielle et compte-gouttes,

Les mélanges d’eau et de monobutyrine ont des tensions superficielles plus basses que l’eau pure. Si on les faitcouler par gouttes, sous un volume donné, à travers un orifice de dimensions constantes, le nombre de ‘: gouttes correspondant à chacun de ces mélanges est constant et, en outre, d'autant plus petit que la proportion de monobutyrine est plus faible. On a donc là un moyen de mesurer l’appauvrissement en monobutyrine d’une solution saturée au fur et à mesure qu’une lipase la transforme.

MopE D'EMPLOI DU COMPTE-GOUTTES. — [’instrument

imaginé par Duccaux est un compte-gouttes d’une capa-

cité de 5 centimètres cubes entre le trait de jauge supérieur et l’extrémité de l’ajutage cylindrique inférieur. Ce dernier est formé d’un tube capillaire dont le diamètre est tel que les gouttes se succèdent à la vitesse de une à une et demie par seconde; l'appareil est construit de telle sorte que, rempli d’eau distillée, à la température de + 15° il donne exactement 100 gouttes.

Pour doser de petites quantités de monobutyrine en solution aqueuse, on remplit la pipette jusqu’au trait d’affleure-

ment supérieur par aspiration, puis on nettoie et on essuie soigneusement avec du papier Joseph l'extrémité rodée de l’ajutage, qui doit être bien propre et surtout ne jamais être grasse. Le liquide est maintenu dans la pipette, pendant cette opération, grâce à la fermeture de l'orifice supérieur au moyen du doigt que l'on y appuie. On dispose alors le compte-gouttes bien verticalement, en le maintenant avecla pince d’un support fixe, puis on enlève le doigt et on compte avec soin les gouttes qui s'écoulent dans un récipient. On note en même temps la température, car le nombre de goutles pour une même solution varie avec la température. Si à la fin de l'opération une goutte reste adhérente à] extrémité de l'ajutage, on la compte pour une demi-goutte.

I faut répéter à plusieurs reprises, la détermination-du nombre de gouiles pour chaque solution ; elles doivent coïncider à une goutte près ; il n'y a guère de flottement à cet égard que pour les très fortes teneurs en monobutyrine.

Après usage, le compte-gouttes doit être très soigneusement nettoyé avec le mélange d'acide sulfurique et bichromale de potasse, lavé à l'eau courante, à l'eau distillée, à l'alcool, à l’éther et mis à sécher à l'étuve à 370.

Préparation d’une solution saturée de monobutyrine en milieu tampon de phosphates.

La solution dont nous partions pour faire nos mesures de vitesse d'hydrolyse élail une solution saturée de monobulyrine en milieu tampon de phosphates monosodique et disodique ; nous avons ainsi réalisé le p H optimum pour lPaction de la lipase ; d'autre part la saturation était faite à la température moyenne du laboratoire (+ 18 environ).

Pour préparer le milieu lampon de phosphates ; nous partions d’une solution d'acide phosphorique (PO*H*)

le

At —

molaire, Cesl-à-dire renfermant une molécule d’acide par litre ; cette solution est donc 3 fois normale puisqu’elle contient par litre trois H acides neutralisables chacun par un (OH) alcalin. Nous en avons vérifié le titre par la méthode volumétrique connue, avec une solution normale de Soude, en présence de méthylorange comme indicateur.

La solution phosphorique étant exactement molaire, si nous versons dans 10 cm* de celte solution acide 10 cm* de soude normale, le mélange renferme du phosphate monosodique (PO* NaH°). Si nous ajoutons de nouveau 10 cm° de soude normale, nous oblenons du phosphate disodique (PO* Na? 1). Ce sont ces phosphates que nous avons d’abord préparés pour réaliser la solution tampon. |

En versant dans un flacon 10 cm mesurés à la pipette d’abord d’acide phosphorique molaire, puis de soude normale et finalement d’eau distillée, nous obtenions une solution au fiers molaire de phosphale monosodique ; en ajoutant à 10 cm*° d'acide phosphorique molaire, dans un autre flacon, 20 cm° de soude normale, nous obtenions une solution au tiers molaire de phosphate disodique. Avec ces solutions, nous avons préparé le milieu tampon en mélangeant 100 em d’eau bidistillée, 1 em* de phosphate monosodique 1/3 molaire et 7 cm° de phosphate disodique 1/3 molaire, toutes ces quantités étant exactement mesurées à la pipette.

Enfin la solution salurée de monobutyrine était préparée en versant un centimètre cube de monobultyrine dans la solution (tampon de phosphates, Après avoir