Action de la laccase. — Nous avons étudié l'ac
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tien de l'oxydase la mieux connue sur la bilirubine. La laccase que nous avons employée a été préparée par G.Bertrand, qui, le premier, a isolé ce ferment. La solution contenait : Laccase, 0 gr. 02 ou 0 gr. 04, pour 10 centimètres cubes d'eau distillée.
Cette solution a été mélangée à parties égales avec une solution de bilirubinate sodique.
Expérience. — On prépare deux tubes, l'un absolument plein, sans atmosphère d'air, l'autre contenant de l'air.
Les deux tubes sont laissés à la lumière diffuse, à la température ordinaire. Deux tubes témoins contiennent la même solution, à cela près que la laccase a été préalablement bouillie, avant d'être mélangée au bilirubinate.
Après 6 heures et 24 heures, on examine l'état de choses : la solution des tubes témoins n'a pas encore verdi, elle reste jaune. Le tube à la laccase et sans atmosphère d'air a changé très peu.
Le tube qui contient de la laccase et de l'air présente une belle couleur vert clair (c'est de la biliprasine) donnant la réaction acidoalcaline. Après 24 heures, la couleur est vert foncé : la liqueur ne donne plus la réaction acido-alcaline.On a le pigment biliverdinique.
Dans une autre expérience le tube contenant la laccase sans atmosphère libre, a subi un verdissement grâce à l'oxygène dissous.
En résumé la laccase favorise l oxydation de la bilb^ubine et fait passer ce pigment par l'état de biliprasine et enfin de biliverdine. La laccase rend un peu plus facile la fixation de l'oxygène dissous.
23. Action de l'eau oxygénée. — L'eau oxygénée que nous avons employée est à l'état neutre ; elle ne contient que deux ou trois volumes d'oxygène.
Avec la solution artificielle de bilirubinate, on observe un verdissement rapide suivi de décoloration; ceci à l'abri de la lumière.
ACTION DE l'iode ALCOOLIQUE 39
A la lumière, l'iiction est plus complète et plus brusque; il y a dégagement d'oxygène et décoloration accélérée.
L'oxydation, dans ce dernier cas, doit s'accompagner de quelque autre phénomène tel qu'une hydratation, de lelle sorte que le stade biliverdinate est mal représenté dans la série de ces transformations. On n'aperçoit pas de verdissement. La décoloration sans verdissement préalable est de règle avec les solutions plus concentrées d'eau oxygénée.
S4. Action de l'iode alcoolique. — La solution alcoolique d'iode, constitue un agent d'oxydation graduée, qui permet d'en suivre les phases. A. Jolies l'a employée pour transformer la bilirubine enbilivei'dine. La réaction a lieu d'après la formule suivante :
G^2H36Azto« + iJ + 2H-0 = C^^H^«Az*0' + 4HJ
Bilirubine Bilivordine
La liqueur jaune devient d'abord vert clair, puis vert foncé.
Expérience. — Dans un tube à essai, on met 10 ce. de la solution de bilirubinate et on verse goutte iigouUe la solution alcoolique centinormale d'iode (1 gr. 27 d'iode pour 1000 d'alcool). On emploie une petite pipette graduée en centièmes de centimètre.
Une division oula moitié d'une division d'iode versée sur 10 centimètres cubes de bilirubinate, fait virer la couleur rouge au vert clair ; ce vert clair est la biliprasine ; car en ajoutant quelques gouUes de la solution de soude, la couleur devient jaune brun (biliprasinate) et par l'acide acétique retourne au vert (biliprasine). Le bilirubinate a été oxydé (et probablement hydraté en même temps) ; il a passé à l'état de biiiprasinate et celui-ci, en présence de l'alcool acidifié par l'acide iodhydrique, a libéré la biliprasine.
En ajoutant encore de l'iode alcoolique, la solution de vert clair devient vert foncé : c'est de la biliverdine,car en ajoutant de la solu-
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tion de soude à 30 pour 100, la liqueur reste verte ; la couleur est stable.
Les mêmes faits s'observent en traitant la solution de bilirubinate par l'eau iodée, l'eau bromée, et l'eaii chlorée.
25. Réaction de Cineliii. — Dans un verre à pied, qui contient de l'acide nitrique nitreux, on verse avec précaution la solution de bilirubinate. On voit apparaître la série bien connue des couleurs caractérisant chacune un pign^ent distinct; si l'on fixe son attention sur la couleur verte, on voit que de vert clair au commencement, elle devient vert foncé, puis l'oxydation continuant il y a passage aux autres couleurs.
b) Retour inverse de la biliverdine aux piçiments hiliprasiniques et bilirubiniques . Série descendante .
Si par l'oxydation, nous avons obtenu, en partant du stade bilirubinique, les stades : biliprasinique et biliverdinique (chaque stade étant déterminé par des caractères spéciaux), nous pouvons par les agents réducteurs faire l'inverse: en partant du pigment définitif ou biliverdine arriver au pigment originel ou bilirubinique en passant par le pigment intermédiaire ou biliprasinique.
Ces agents sont les suivants : l'amalgame de sodium, l'acide chlorhydrique et le zinc, le courant d'hydrogène sulfuré, le courant électrique et le sulfure d'ammonium. Nous dirons seulement un mot de l'hydrogène sulfuré.
S6. Ac(îoii de l'hydrogène sulfuré. — La biliverdine (réaction alcalino-acide négative) soumise à un cou-
ACTION DK l'hydkogènii; sulfuré m
raiiUrhytlrogènc sulfuré naissant, passe rapidement de la couleur vert foncé au vert clair :
Ce liquide traité par un alcali (soude 30 0/0) devient rouge ; par l'acide acétique glacial il devient vert ; ce sont les caractères de la biliprasine et du biliprasinate.
En continuant l'action du courant d'hydrogène sulfuré, le liquide de vert qu'il était passe au rouge. La couleur est due à la bilirubine. En effet, la liqueur ofîre une réaction acide ; cliauffée elle devient verte ; le vide prolongé ne change pas sa couleur ; la réaction de Gmelin est positive ; l'eau iodée, chlorée, bromée la verdissent.
Tous ces traits caractérisent le pigment bilirubinique.
