Réactif de Gmelin [Acide azotique nitreux). — Les

actions oxydantes précédentes, se prêtent à une gradation d'effet, qui nous permet d'obtenir chaque produit, caractérisé par une couleur différente. Avec l'acide nitrique nitreux (réactif de Gmelin), on obtient les mêmes produits, les mêmes couleurs ; mais l'action se précipite, les teintes se succèdent sans qu'on puisse les séparer.

La bile de bœuf donne mal la réaction de Gmelin (Salkowski). La bile humaine, la bile de chien et la bile de porc la donnent bien à la condition d'être diluées. Cette dilution supprime l'abondance du précipité de pseudomucine, qui dissimule ou empêche l'observation.

Le type de la réaction de Gmelin est fourni par la bile de veau. Cette différence de la bile de veau et de la bile de bœuf, est intéressante. C'est une différence de l'état jeune et de l'état adulte, qui traduit peut-être simplement la différence d'alimentation.

Que ce soit une différence d'alimentation, ou une différence d'âge, qui se manifeste ainsi, le fait n'en est pas moins digne de remarque.

uiiACTii'' iiH i;mi:i,i.n 61

On opôre sur la bile de veau jaune ou vcrLc. Voici brièvemenl la série des phénomènes :

Manière d'opih'cr. — Un verse dans le fond d'un petit verre à réaction une petite quantité d'acide azotique nitreux (acide nitrique traité par une goutte de mercure). Au-dessus, au moyen d'une pipette, on fait arriver la bile avec précaution, de manière à éviter l'agitation et le mélanjje des deux liqueurs. A la limite de séparation, l'acide azotique diffuse et réa^yit sur leli((uide biliaire ; il se produit dans celuici une série de couches superposées, correspondant à des degrés divers d'oxydation, les plus oxydées en bas.

Les phénomènes se succèdent d'ailleurs aussi dans le temps. Ces couches paraissent d'abord se partager en deux groupes : le groupe inférieur jaîfne rouge; le groupe supérieur : violet bleu.

Puis, chaque groupe se nuance ; au bas du groupe inférieur, le rose apparaît ; au haut, le vert clair, qui devient rapidement vert foncé et persiste quelque temps ; dans l'intervalle Torangéetle rouge, qui disparaissent bientôt et toute la couche prend une teinte rosée de plus en plus pâle. En même temps un précipité blanchâtre servant de support aux couches colorées s'accroît. Pour le groupe supérieur d'abord le vert passe par place au bleu, puis toute la couche verte devient bleue, puis passe au violet ; et à la fin de l'opération, qui dure de 15 à 20 minutes, au rose pâle.

Bile de bœuf. — Avec la bile de bœuf, les phénomènes sont moins nets. Cette particularité tient à ce que le précipité blanchâtre envahit irrégulièrement l'épaisseur tout entière de la zone biliaire et empêche la superposition régulière des couches d'oxydation.

La seconde particularité c'est que la couche verte, qui dans le cas précédent était persistante et bien marquée, ici est fugace. Toutes les couches sont mélangées à cause de l'apparition d'une bande (formée par le précipité) qui pousse des ramifications en haut et en bas.

Chez le veau la couche superficielle était formée, à la (în de l'expérience, par une série de zones concentriques variant du vert (au centre) au bleu et au violet en marchant vers les bords du verre. Avec la bile de bœuf, tout est mélangé.

En résLimié, les phénomènes essentiels sont les mêmes

62 AGENTS RÉDDCTEtJRS .

avec la bile de bœuf qu'avec celle de veau, mais l'observation est rendue difficile par le précipité azotique et c'est dans ce sens qu'il faut entendre l'assertion des auteurs que la « bile de bœuf donne mal la réaction de Gmelin ».

43. Action de l'acide carbonique. — L'acide carbonique pei'met de passer dans la série ascendante, d'un pigment intermédiaire au suivant. En faisant passer un courant de CO^ dans la bile jaune de veau, on obtient une coloration vert clair, qui traduit la transformation du biliprasinate de sodium en b'diprasine (réaction alcalinoacide). Plus tard, on arrive même au pigment biliverdinique ; alors, la réaction alcalino-acide est négative.

c) Pigments biliaires en série descendante . Agents réducteurs.

43. Hydrogène sulfuré. — Les artifices chimiques, consistant dans l'emploi des agents d'oxydation, nous ont permis, en partant de la bile naturelle, d'obtenir en série ascendante les divers pigments biliaires. Inversement l'emploi des agents réducteurs va nous permettre d'obtenir les mêmes pigments en série descendante. Ces agents sont: l'amalgame de sodium, le sulfhydrate d'ammoniaque, l'acide chlorhydrique et le zinc et le courant électrique.

Nous parlerons seulement du courant d'hydi'ogène sulfuré, qui est d'un usage commode.

On part d'une bile ne contenant que le pigment supérieur, biliverdinate et biliverdine.

On l'obtient de la manière suivante :

La bile verte fraîche de veau est chauffée pendant 20 minutes à 100°; il se produit un précipité, qui est séparé par le filtre ; le filtrat est recueilli : il est vert foncé.

llYl'Oi IliiSK l)K 1,'oXYUASH HÉPATIQUE 63

('e pigmciil vert c'csl de la bilivcrdino (la réaction alcali iio-acide est négative).

Cette bile, sonmise à un courant d'hydrogène sulfuré, change de couleur dès les premières bulles gazeuses. De foncée elle devient vert clair; et alors le liquide traité par la soude devient rouge, puis par l'acide redevient vert ; c'est la biliprasine.

En suivant l'action du courant, on voit la couleur passer au jaune rouge.

Qu'est-ce que ce pigment rouge?

C'est le pigment bilirnbinique mélangé au biliprasinate du début, comme le prouvent les caractères suivants :

r La réaction de Gmelin est positive ;

2" Traité parla chaleur, en présence de l'air, il verdit ;

3° L'eau iodée, l'eau bromée, l'eau chlorée le transforment en pigment vert;

4" Le vide ne change pas sa couleur ; ce sont là quatre caractères du pigment bilirnbinique;

5° L'acide acétique le colore en vert ;

6° Par le courant de CO- il devient vert clair, à réaction alcalino-acide positive, c'est-à-dire biliprasine. Ce sont là deux caractères du biliprasinate.

d) Formation et évolution des pigments biliaires normaux aux dépens du pigment originel.

44. Transforiuation «les pi«;iiicuts dans le foie à l'état vivant. Hypothèse de l'oxydase Itépatique. —

Après avoir VU les transformations des pigments biliaires, in vitro, il faut se demander comment elles s'accomplissent in vivo ?

Et d'abord, on ne peut douter de l'existence de ces transformations. 11 est infiniment vraisemblable que le

54 HYPOTHÈSE DE l'oXYDASE IIÉBAIIQUE

pigment originel de la bile est la bilirubine (bilirubine, bilirubinales). La bile première est donc jaune. Ce n'est que postérieurement que se produisent les pigments biliprasiniques et biliverdiniques qui la colorent en brun ou en vert dans la vésicule biliaire. Où se produit cette transformation ?

C'est la première question à résoudre.

L'observation faite chez quelques animaux à bile vésiculaire verte, trouvée jaune dans les canaux hépatiques, semble indiquer que les changements ne se produisent qu'au delà de la cellule hépatique et même des canalicules hépatiques, dans les gros conduits biliaires et dans la vésicule. C'est l'opinion que nous adopterons.

Mais d'autre part il y a des arguments pour admettre le contraire. Ces arguments sont tirés de la difficulté qu'il y aàcomprendre la production, dans les conduits biliaires, des phénomènes d'oxydation qui sont nécessaires au changement de la bilirubine.

La difticulté serait évidemment moindre au niveau de la cellule hépatique, qui est coutumière d'oxjdations. Là, les conditions physiologiques d'oxydation qui président au fonctionnement hépatique ont encore toute leur activité.

Au delà, les conditions physiques agissent seules et celles-ci ne sont pas favorables à la transformation du pigment bilirubinique.

En effet, les solutions de bilirubinate, pigment jaune fondamental, se conservent longtemps telles quelles en milieu alcalin, à l'obscuinté, à une température inférieure à 40° et cela en présence de l'air ; à plus forte raison à l'abri de l'air.

Dès lors, si l'on admet qu'au moment de sa formation, la bile est une solution de bUirubhiate dans les carbonates

IIVI'OTIIÈSI; DE L^bXYDASE lIÉl'ATiyUE 65

alcalins ; ou en d'autres lermes que le pigment originel, le premier formé, source des autres, est la bilirubine' on doit se demander comment la bile des dernières voies et tout au moins celle de la vésicule peut contenir ces autres pigments, les pigments biliprasiniques et la bilivei'dine.

En efTet, aucune des conditions d'oxydation et d'hydratation n'est réalisée ; il n'y a pas de contact avec l'oxygène atmosphérique ; l'oxygène dissous existe en très faible quantité (2 pour 1000), à la rigueur pourtant suffisante • mais la lumière n'a pas accès ; la température est inférieure à 40° ; enfïn, l'eau de solution diminue dans la vésicule et la bile se concentre, circonstance défavorable a l'hydratation. Et cependant, l'observation apprend que ces transformations se sont produites puisque les pigments biliprasiniques et biliverdiniques existent dans la bile normale; et, d'autre part, l'expérience faite avec la bile fraîche montre que les transformations qui restent à accomplir, sont plus faciles avec cette sécrétion naturelle qu'avec les solutions artificielles de bilirubinates.

Si donc l'on rejette l'idée que les pigments biliprasiniques existent dès la cellule hépatique, on sera obligé d'admettre qu'il existe un agent particulier d'oxydation Cet agent particulier subsistant dans la bile ne serait autre chose qu'un ferment hépatique de la nature desoxydases 11 y aurait une oxydase destinée à réaliser les combustions hépatiques. Telle est l'hypothèse, d'ailleurs assez vraisemblable. Le reste va de soi : une partie de cette oxydase pourrait être entraînée par la bile jusque dans la vésicule.

C'est elle qui faciliterait l'oxydation des pigments,

66 HYPOTHÈSE DE l'oSYDASE HÉPATIQUE

oxydation que des conditions physiques ordinaires ne semblent pas permettre d'expliquer suffisamment.

Les arguments plus directs à l'appui de cette supposition sont les suivants : 1° le fait que la bile fraîche bleuit la teinture de gaïac, tandis que la bile bouillie (même après agitation à l'air pour dissolution d'oxygène) ne donne pas cette réaction ; 2° le fait que la bile fraîche décompose immédiatement l'eau oxygénée et en dégage l'oxygène, tandis que la bile bouiUie ne se comporte pas ainsi ; 3° le ferment oxydant typique (la laccase de G. Bertrand) favorise l'oxydation de la bilirubine dans les solutions artificielles, c'est-à-dire la formation des pigments biliprasiniques et des biliverdinates. La solution verdit à la température ordinaire, même à l'obscurité.