MÉTHODES GÉNÉRALES

Avant de commencer l'exposé de mes recherches, je dois indiquer avec quelque détail les méthodes principales dont j'ai fait usage dans les cas les plus généraux, réservant seulement la description des procédés spéciaux employés dans quelques cas particuliers : je m'abstiendrai de tenir le lecteur au courant des {âlonnements par lesquels j'ai dû nécessairement passer; J indiquerai toutefois pourquoi, dans quelques cas, certains réactifs très usités n’ont pu réussir d’une manière satisfaisante ; à part cette exception, je décrirai exclusivement Les procédés qui auront donné de bons résultats.

Toutes les recherches qui sont uniquement du domaine de l’istologie ont élé conduites par trois méthodes générales.

$ 1. — Méthodes des coupes.

Je me suis adressé pour les coupes presque uniquement à des individus vivants; par exceplion pour certains animaux rares ou exotiques, J'ai eu recours aux animaux conservés de la collection du Muséum. Il va sans dire que, malgré l’état relativement satisfaisant des matériaux de cette dernière provenance, je devais attribuer aux résultats histologiques qu'ils m'ont fournis un moindre degré de certitude et, pour pousser aussi loin que possible l'étude des tissus, j'ai dû m'adresser seulement à des échantillons frais préparés par moi-même. Les animaux conservés me donnaient d’ailleurs

des résultats intéressants, principalement au point de vue de la comparaison et de la généralisation.

A. Fixation des tissus. — L'un des points les plus imporlants dans la série des opéralions relatives à la méthode des coupes était la conservation irréprochable des tissus. Cela se comprend de soi, puisque je m'intéressais le plus souvent aux éléments épithéliaux, qui sont, comme on sait, les plus prompts à se détériorer. Il fallait, dans tous les cas, plonger le plus rapidement possible l'animal ou l'organe à étudier dans un réactif capable de fixer immédiatement les tissus. Le Mollusque était donc dépouillé rapidement de sa coquille au moyen de pinces coupanles, le manteau élait délaché en entier et plongé dans un liquide qui devait toujours être assez forlement acide. L’acide acétique, par exemple, jouit de la propriété de coaguler presque instanlanément le mucus el d'arrêter ainsi la destruction épithéliale que ne manquerait pas d'entraîner le gonflement de cette dernière substance sous l’action de l’eau pure.

Le réactif fixateur que j'employais de préférence est l’acide picro-sulfurique de Kleinenberg, préparé suivant la méthode indiquée dans le Trailé classique de Bolles-Lee el Henneguy. Dans le cas où je m’occupais de préférence des éléments nerveux et neuro-épithéliaux, j'employais avec succès un mélange à parlie égale d'acide chromique au millième et d'alcool à 70°, dans lequel je laissais les fragments toujours fort petits pendant trois heures environ. Dans tous les cas, la préparation était mise dans l'alcool à 10° pendant vingt-quatre heures au moins, l'alcool étant changé plusieurs fois pour obtenir la décoloration parfaite.

Le fragment à étudier était, dans l'agent fixateur même, tendu par des épingles sur une lrès pelile plaque de liège qu'il ne quiltail qu'à la fin de la série des préparations. Ainsi maintenu et fixé, au sortir de l'alcool à 70°, il était plongé dans un réactif colorant.

L'acide osmiqgre à élé employé surlout avec succès pour l'étude des membranes : un feuillet branchial, par exemple,

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élalé sur une lamelle par la demi-dessiccation, était exposé pendant quelques minules aux vapeurs d'acide osmique. L'épithélium, il est vrai, n'était pas toujours fixé d’une manière salisfaisante, parce que l'acide exagère pendant un instant la sécrélion du mucus. Cependant, dans les cellules mucipares elles-mêmes, le réseau proloplasmique apparaissail alors en coupes avec une grande netteté. Mais c'était surtout pour l'étude de la membrane de soutien de la lamelle que cette méthode donnait de bons résultats.

B. Co'orations. — J'ai recherché les avantages et les inconvénients d'un assez grand nombre de réactifs colorants usilés habituellement (carmins variés, hématoxyline, violet de gentiane, safranine, purpurine, nigrosine, elc.). Mais les plus belles coupes que j'ai pu oblenir sont des coupes à double coloration bleue et rouge dues à une substance carminée et au bleu de méthylène. Le tissu à étudier fixé sur un pelit fragment deliège était, au sortir de l’alcool à 70°, porté dans une solution de carmin boralé, de carmin aluné, ou mieux, de ÿtcro-carminate d'ammoniaque; les deux premiers réactifs réussissaient surtout pour l’histologie fine des éléments nerveux; le dernier, d’un usage plus général, avait de plus pour moi l’immense avantage de mettre admirablement en évidence les cellules neuro-épithéliales. Le fragment étail, suivant sa grosseur, maintenu douze à vingl-quatre re dans la Laye carminée, et lavé à l’eau. Il était ensuite plongé pendant vingt-quatre heures dans l'alcool à 70°. Je faisais alors commencer la coloralion en bleu; je devais chercher à doser la quantité de bleu employée. Pour obtenir une coloration toujours identique, je faisais une dissolution saturée de bleu dans l'alcool à 90°, et je mélangeais une parlie de cet alcool avec une partie d'alcool à 90° pur. La préparation restait vingt-quatre heures dans ce mélange. Elle restait vingt-quatre heures encore dans une liqueur formée de même avec deux parties d'alcool absolu pur et une partie d'alcool saturé de bleu.