I — METHODE DE DOSAGE DE L'ACTIVITE PHOSPHATASIQUE DU SANG

La méthode que nous avons appliquée à la détermination de l’activité phosphatasique du sang, diffé. re de celles de Kay (148) et de ROBERTS (152), qui sont critiquables sur bien des points.

Nous avons employé une méthode simple, qui nous a paru susceptible d'échapper aux critiques que l’on pourrait faire aux précédentes méthodes.

Nous nous sommes préoccupés, d’une part, d’évitér de faire interférer la phosphominéralisation autonome du sang avec la libération diastasique étudiée et, d'autre part, de savoir si la méthode molyb-

do-colorimétrique pouvait s’appliquer au dosage des orthophosphates dans un milieu contenant du 8 glycvérophosphate.

Nos recherches nous ont amené à appliquer notre méthode comme nous allons l'indiquer.

1°) Solutions nécessaires

a) Les solutions indispensables pour pratiquer un dosage des rRAposnUnres par, céruléo-molybdo-colorimétrie.

b) Solution de 8 glycérophosphate de Sodium à 1 %. Cette solution doit être préparée quelques instants avant l’usage. Dans un ballon de 100 cc. met- He

8 glycérophosphate de Na ........ 1 gr.

Batdistliee “jusqu'a hs. 100 cc.

On verse ensuite le contenu du ballon dans une capsule en porcelaine, dans laquelle on maintient une ébullition de 10 minutes.

Au bout de ce temps, on prélève, à l’aide d’une pipette stérile, 5 cc. de la solution de glycérophosphate et on les introduit dans un tube à essai stérilisé, qui sera aussitôt bouché, puis refroidi. On a ainsi obtenu, en même temps qu’une stérilisation sommaire, un début d’hydrolyse du glycérophosphate, grâce auquel on pourra appliquer la méthode molybdo-colorimétrique aux dosages des orthophosphates, sans que l'erreur soit trop grande.

En usant d’une solution ainsi préparée, les atténuations colorimétriques du Bleu Phosphomolybdi-

que les plus considérables, atteignent 15 % et l’atté-

nuation moyenne (sur 25 cas), est de 5 % seulement.

OO

2) Prélèvement et Phosphominéralisation autonome du sang à 37° pendant 24 heures

Le sang est prélevé vers les neuf heures du matin, sur un sujet éveillé, à jeun-et au repos. On le recueille aseptiquement dans un flacon stérilisé contenant des billes de verre.

Après défibrination, le flacon soigneusement bouché au liège est mis à l’étuve à 37° pendant 24 heures. On peut, pour activer l’autophosphominéralisation, agiter le flacon une dizaine de fois dans la journée.

3°) Dosage de l’activité diastasique

Au bout de 24 heures, on prélève avec une pipette stérile à complet écoulement, 1 cc. de sang que l’on verse dans le tube à essai contenant 5 cc. de la solution de 8 glycérophosphate de Na à 1 %, préparée extemponairement suivant nos indications. On rince la pipette avec la Solution de glycérophosphate du tube, de façon à réaliser un mélange parfait du sang avec le substrat à hydrolyser.

Puis, avec la même pipette, on prélèvera 1 cc. du mélange sang + glycérophosphate et on le versera dans un verre à pied contenant 3 cc. d’eau distillée.

On désalbuminera par 1 cc. d’acide trichloracétique à 20 %. e

Après une filtration sur filtre sans cendre, on effectue le dosage, comme nous l’avons indiqué dans la première, partie. Le dosage doit être fait aussitôt après la filtration. Le tube à essai, dans lequel se fait l’hydrolyse, est maintenu à 37° pendant. 24 heures. Au bout de 24 heures, on prélèvera 1 cc. du mélange qui sera dosé comme le précédent.

En multipliant par 0,006 le taux des orthophosphates exprimés en PO#HS par litre, on aura la quantité de P minéral libre contenu dans le milieu de la réaction.

Si p — quantité de P minéral exprimé en PO{HS présent dans le milieu de réaction à l’origine.

P — quantité de P minéral exprimé en PO#H% présent dans le milieu de réaction à la 24° heure.

P — p — Phosphate libéré par les phosphatases contenus dans 1 cc. de sang en 24 heures à 37°.