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NH le second à l'indol :
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IL est bon de noter en passant que Paction des microbes sur le tryptophane peut se manifester d’une tout autre façon que ci-dessus ; en effet, certains microbes s’attaquent immédiatement au carboxyle et de même que le tyrosine donne la p-oxyphényléthylamine, le tryptophane peut par décarboxylation fournir lindol-
éthylamine D AN) n CS D à CAL à 16 re. NN" CH QUE NH
Enfin, étant donné ce que je viens de rappeler, on conçoit sans peine que les microbes capables d'attaquer Le tryptophane, de quelque manière que ce soit, manifesteront beaucoup mieux leur action lorsqu'ils se trouvent directement en présence de cet acide aminé libre et qu'ils n’auront pas à le séparer d’un édifice moléculaire le plus souvent très complexe.
Comme l’on sait que le meilleur procédé de préparation du tryptophane consiste dans la digestion tryptique, aseptique et prolonete, de matières albuminoïdes convenablement choisies, on doit
done, pour préparer les milieux destinés à l’étude de la fonction indologène, donner la préférence aux « peptones pancréatiques », particulièrement à celles de caséine. Toutefois, 11 vaut encore mieux, comme je vais le montrer, employer des milieux de composition bien définie auxquels on incorpore du tryptophane. Il y a quelques mois (1), j'ai rapporté sommairement les résultats que j'avais obtenus en examinant 57 races de Proteus vulgaris au point de vue de leur fonction indologène ; je vais maintenant les exposer plus complètement, tels que je les ai confirmés par l'étude de quatre autres échantillons, en précisant autant que possible les conditions dans lesquelles mes recherches ont été réalisées.
J'ai d'abord ensemencé tous mes Proteus dans de l’eau peptonée à 20 pour 1.000. Celle-ci était préparée avec une peptone commerciale obtenue par digestion tryptique de la viande et donnant nettement avec l’eau de brome la réaction du tryptophane ; comme l'extrait éthéré de cette même peptone donnait une légère coloration rose avec le réactif d'Ehrlich je prenais la précaution, indiquée par Porcher, de réduire au cinquième de son volume, par une vive ébullition à l'air libre, la solution à 20 pour 1.000. Après avoir rétabli, par addition d’eau distillée, le volume primitif de celle-ci, je la neutralisais par la soude ; j'avais ainsi une eau peptonée débarrassée des traces d’indol décelables par le diméthylaminobenzaldéhyde. J'ai donc cultivé sur ce milieu Les 64 Proteus dont je disposais et, après 24 heures de séjour à 37°, j'ai recherché l'indol dans les cultures par le procédé suivant :
1° Opérer sur 10 à 15 cc. de culture: prendre la réaction de celle-ci au papier de tournesol et, si besoin est, l’additionner de quelques gouttes de lessive de soude pour l’alcaliniser franchement.
2° Ajouter à la culture contenue dans un tube à essai son volume d’éther purifié spécialement (2) ; agiter doucement pendant quelques minutes,
1. Azgerr BerraEeLor, « Recherches sur quelques caractères spécifiques du Proteus vulgaris » C.R. de la Soc.de Biol., 15 mars 19148, &. LXXIV, p. 575.
AzBert BEerrheLorT, « Recherches sur le Proteus vulgaris considéré comme producteur dindol », C. R. de l’Acad. d. Sciences, 24 févr. 1913, t. CLVI, p. 041.
2. Sur la nécessité et la technique de cette purification voir la thèse de Louis Gauthier (page 20); pour purifier l’éther je me contente ordinairement de le ‘ laver avec le tiers de son volume d'une solulion ile soude à 5 0/0, puis, à deux reprises avec de l’eau distillée.
puis laisser déposer jusqu'à ce que la couche éthérée soit bien limpide, au moins dans la moitié supérieure de sa hauteur — dans le cas d’une émulsion par trop stable, disloquer celle ci par addition de quelques gouttes d'alcool, ,
3° Avec un tube à effilure courte dont on se sert à la manière d’un tâtevin, prélever en s'y reprenant à plusieurs reprises, quelques centimètres cubes de la solution éthérée, en prenant bien garde de n’entraîner aucune gouttelette du milieu de culture (1).
Aux trois ou quatre centimètres cubes d’éther ainsi recueillis dans un tube à essai, ajouter le quart de leur volume d'une solution de p diméthylaminobenzaldéhyde à 4 0/0, dans l'alcool à 96°; agiter pour bien mélanger les deux liqueurs.
° A l’aide d'un tube effilé faire arriver lentement au fond du tube renrun le mélange solution éthérée + réactif, deux ou trois centimètres cubes d'acide chlorhydrique. Laisser reposer cinq minutes; examineralors le tube devant un fond blanc. La présence d’indol dans la culture examinée est caractérisée par l'apparition d’un anneau rouge légèrement violacé dans la zone de contact des deux liqueurs; lorsque la proportion d’indol est assez forte la coloration s'étend à toute la couche inférieure Une teinte plus violacée, une tendance vers le bieu s’accusant avec le temps est l'indice de la présence de scatol (2) ou tout au moins d’un mélange de ce corps avec l’indol; bien entendu, dans ce cas, on ne doit pas s’en tenir à cette simple coloration et il faut utiliser les réactions différentielles plus nettes. qui sont fort bien exposées dans la thèse d'Hervieux.
Le procédé que je viens de décrire est moins rationnel que celui de L. Gauthier, es ainsi que je l'ai maintes fois vérifié, 1l fournit des résultats qualitatifs tout aussi exacts. Son seul point délicat réside dans la séparation de la solution éthérée, bien que, lorsqu'on opère avec soin, il soit impossible d’entrainer des gouttelettes aqueuses avec l ee
Il est d'ailleurs très simple de se mettre à l’abri de toute cause d'erreur de cette sorte en agitant doucement, dans un tube étroit, les quelques centimètres cubes de liqueur éthérée avec leur volume d’eau légèrement alcalinisée par la soude; en laissant reposer pendant quelques instants il est alors facile de puiser avec une pipette effilée une quantité suffisante de solution éthérée tota-
Î. Quand on opère sur un petit volume de culture il est très commode, ainsi que mon collègue M, D. M. Bertrand en a eu l’idée, d'employer une pipette de Wright à tétine de caoutchouc.
2, Avec le scatol seul la teinte primitivement violette devient complètement bleue en trente minutes.
lement exempte d'impuretés capables de donner une coloration avec le réactif d'Ehrlich. Mème en prenant l'excès de précautions que je viens d'indiquer il ne m'a jamais fallu plus de dix minutes pour rechereher l'indol dans une culture ; comme la technique que j'ai employée ne nécessite qu'un très petit volume de culture et qu'elle fournit d'emblée des résultats ne prêtant pratiquement pas à discussion, elle me semble susceptible de rendre quelques services aux bactériologistes.
J'ai donc examiné avec cette méthode les cultures de 24 heures de mes Proteus, sur peptone pancréatique de viande, et J ai constaté que seulement vingt-quatre d'entre elles contenaient l'indol. En présence de ce résultat j'ai ensemencé les échantillons qui ne donnaient pas d’indol dans plusieurs séries de tubes du même milieu et j'ai analysé les cultures après 2. 4 et 8 jours d'étuve ; cetté fois encore je n’ai pu trouver trace d'indol.
Mais dès le deuxième jour, les cultures de sept de ces Proteus non producteurs d'indol ont pris une teinte rose lorsque j'y ai ajouté les proportions habituelles de nitrite de potassium et d'acide chlorhydrique alors que toutes les autres restaient incolores. Les résultats obtenus par Herter ayant attiré mon attention sur la présence possible d'acide indolacétique je n'ai pas été, comme Steensma, intrigué par la réaction colorée que me présentaient ces cultures et J'y ai recherché cette substance.
Pour cela j’ai immédiatement ensemencé chacun des Proteus non indologènes dans 750 ec. d'eau peptonée et, au bout de 48 heures, sur 50 cc. des diverses cultures, j'ai répété la réaction avec lenitrite. En mêmetempsj'effectuais celle-ci avec de l'eau peptonée additionnée d’une part de traces d’indol, d'autre part de traces d'acide indolacétique (1). J'ai remarqué immédiatement que les cultures de Proteus et l'eau peptonée chargée d’acide indolacétique prenaient une teinte rosée légèrement violacée, peu accusée, tandis que l'eau peptonée chargée d’indol se colorait nettement en rouge. Dans toutes ces liqueurs j'ai extrait la substance colorante avec le même volume d'alcool amylique. Les différences de coloration se sont encore accusées ; J'ai alors dilué avec de l'alcool amylique les solutions trop foncées de manière à les amener à peu près à la même intensité colorante et je les ai examinées au spectroscope.
J'ai constaté que les solutions amyliques provenant de cultures de
1. Je dois cette substance à l'obligeance de la Badische Anilin und Soda Fabrik,
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Proteus non indologènes et d’eau peptonée chargée d'acide indolacétique donnaient pouf une même épaisseur un spectre caractérisé par une bande d'absorption dans le vert bien accusée entre les longueurs d'onde À — 560 et À — 530 se dégradant vers le jaune jusqu'à À = 575 et vers le bleu jusqu'à À — 515, tandis que la solution amylique de nitrosoindol absorbait le vert, le bleu, l'indigo et le violet du spectre à partir de la longueur d’onde À = 565, l'absorption commençant même au voisinage de À — 582.
Par l'examen spectroscopique il semblait donc bien probable que les Proteus qui donnaient une réaction colorée avec le nitrite étaient simplement des producteurs d'acide indolacétique. Je m'en suis assuré de la façon suivante : Les 700 ce. de culture qui me restaient après l'épreuve spectroscopique ont été fégèrement acidifiés par l'acide sulfurique et épuisés par l'éther dans une boule à décantation ; la liqueur éthérée (500 cc. environ) à été réduite au cinquième par distillation et agitée avec la moitié de son volume (50 cc. environ) d’eau faiblement alcalinisée par la soude. La liqueur aqueuse décantée, additionnée d'acide chlorhydrique jusqu’à très faible réaction acide, a été maintenue quelques instants à 45° pour chasser l’éther dissous.
De petites portions des liqueurs aqueuses ainsi obtenues pour les T Proteus ont alors été examinées en même temps qu’une solution aqueuse d'acide indol-3-acétique à 1 pour 1.000 ; toutes m'ont donné un résultat positif avec les réactions considérées par Salkowsky et Herter (1) comme caractéristiques : :
1° Avec HCI et NO°K production d’une coloration rose passant complètement dans l'alcool amylique et donnant une bande d'absorption dans le vert. |
29 Avec HCI et traces de Fe*Clf production d’une coloration voisine du rouge cerise.
J'ai alors épuisé par l’éther le reste des solutions légèrement acides, dont j'avais utilisé une très faible partie pour les réactions ci-dessus, et J'ai concentré par distillation les liqueurs éthérées résultant de cet épuisement. J'ai versé le résidu de ces distillations dans des petits ballons à fond rond et J'ai chassé le reste d’éther en les maintenant à 60°. À ce moment jai placé les ballons sur un bain de sable que j'ai maintenu à 110-115° pour chasser l’eau que l’évaporation avait laissée, puis J'ai élevé la température à 2109, mais en aÿant soin de ne chauffer que le fond des ballons, c’est-àdire la partie sur laquelle existait un léger résidu. Après 10 minutes de chauffage, j'ai laissé refroidir les ballons et j'ai repris par quelques centimètres cubes d’alcool le léger enduit qui se trouvait sur leurs parois ; j'ai traité la solution alcoolique ainsi obtenue par le réactif d’Ehrlich et
1ACEA HerTER, « On indolacetic acid », Journal of biological Chem., 1. IV, 1908, p. 254.
mi es
l'acide chlorhydrique. Toutes contenaient du scatol car elles m'ont donné une coloration violacée d'abord peu accentuée, mais qui a foncé rapidement et s’est changée assez vite en une teinte bleue présentant un spectre d'absorption parfaitement caractéristique. L'existence de ce scatol, qui se forme quand on chautfe à sec vers 200° l’acide indolacétique, était une preuve de la présence de cette substance dans les liqueurs que Je venais d'examiner.
J'avais donc établi par trois réactions qu'il s'agissait bien d'acide indol- 3 -acétique, confirmant en somme les faits observés par Herter et Ten Broeck avec seulement deux races de Proteus.
Pour me placer dans de meilleures conditions j'ai répété l'expérience que je viens de décrire en substituant à la peptone de viande une peptone tryptique de caséine que je devais à l’obligeance de M. P. Macquaire ; les résultats ont été exactement les mêmes que dans le premier cas : 24 Proteus producteurs d’indol, 37 Proteus non indologènes dont 7 producteurs d'acide indolacétique.
J'ai alors voulu rechercher si une variation plus importante dans la composition du milieu ne modifierait pas ces résultats. Pour cela j'ai utilisé un mélange de produits abiurétiques obtenus par l’hydrolyse chlorhydrique de la caséine, mais comme l'action des acides ne convient pas à la séparation du tryptophane j'avais soin d'ajouter à ce mélange, bien décoloré par le noir animal, 1 0/0 de tryptophane ; avec cet ensemble de constituants de la caséine je préparais des solutions à 20 pour 1.000 qui constituaient un milieu dans lequel le Proteus se développait remarquablement bien. Dans ces conditions les résultats ont été identiques en ce qui concerne la production d’indol, tout en moins qualitativement, mais le nombre des échantillons producteurs d'acide indolacétique est passé de 7 à 19; en même temps j'ai noté que, tant pour l’indol que pour l'acide indolacétique, la production de ces substances était beaucoup plus intense qu'en milieu peptoné.
Ces faits m'ont conduit à me servir d'un milieu encore mieux adapté à l'étude de la fonction indologène, plus riche par conséquent en substances mères de l’indol et de l’acide indolacétique, c'est-à-dire en tryptophane. J'ai d'abord utilisé un milieu chimiquement défini dont j'avais déjà indiqué la composition (1) et qui
1. Aserr BerragLor, « Sur l'emploi de milieux chimiquement définis à base de tryptophane», C. À. dela Soc. de Biol., 20 avril 49142, t. LXXIT, p. 595.
ut
renfermait avec 1,5 pour 1.000 de tryptophane. divers autres acides aminés et des sels, mais je l'ai abandonné pour l'étude du Proteus, car certains de ces éléments indispensables pour nombre de microbes étaient inutiles pour une espèce protéolytique et d'une telle activité biochimique.
Pour les expériences qui vont suivre il m'a done paru plus simple d'imiter Hopkins et Cole et d'ajouter de la gélatine à une solution nutritive analogue à celle que j'ai préconisée lors de mes premières recherches sur les microbes acidaminolytiques de la flore mtestinale. La gélatine ne renfermant pas de tryptophane, le Proteus n'avait done à sa disposition que celui existant à l’état libre dans le milieu, qui présentait la composition suivante :
LR RES CPR EE 1.000,00 Phosphate dipotassique. . . 1,50 Sulfate de magnésium . . . 0,50 LAS DIODOANCIE A SN LATE 1,50 Chlorure de calcium. . . . 0.02 RE RE NO ER EE I M TU 25,00
Grâce à l’amabilité de M. F. Hoffmann-La Roche qui avait mis à ma disposition une quantité assez importante de tryptophane par: faitement pur j'ai pu étudier l’action de toutes mes races de Proteus sur cet acide aminé.
J'ai examiné une première série de cultures après 48 heures de séjour à 37° et j'ai constaté que le nombre des échantillons producteurs d'indol était le même que dans Les essais précédents, par contre il y avait 31 Proteus producteurs d'acide indolacétique. D'autres cultures examinées après quatre jours d’étuve m'ont donné les mêmes résultats pour l’indol, mais cette fois tous les Pro/eus non indologènes avaient produit de l'acide indolacétique. Je ne m'en suis pas tenu là et j'ai recherché si les échantillons qui avaient donné de l’indol, n'avaient pas produit en même temps de l'acide indolacétique. Pour cela après avoir alcalinisé par la soude les cultures sur milieu au tryptophane chargées d’indol, je les ai épuisées par l’éther jusqu'à ce que ce dissolvant ne m'ait plus donné de coloration avec le réactif d'Ehrlich ; après cette opération Je pus déjà observer sur une petite portion de ces cultures complètement débarrassées d’indol qu’elles prenaient une coloration rose par addition de nitrite et d'acide chlorhydrique, alors qu'un tube témoin du milieu stérile n'accusait qu’une légère teinte jaune. Je
soumis alors ces mêmes cultures à un nouvel épuisement par l’éther après les avoir acidifiées et, après concentration de ce solvant, il me fut facile de constater la présence d'acide indolacétique.
En résumé, mes 61 Proteus cultivés sur tryptophane se montraient tous producteurs d'acide indolacétique au bout de quatre jours, tandis que seulement 24 d’entre eux étaient capables de former de l’indol. Ces résultats auraient pu me faire croire à l’existence de deux variétés de Proteus ; mais en présence des variations de ce mierobe sous l'influence du milieu, j'ai pensé qu'il devait plutôt s'agir de races différant simplement par une intensité plus ou moins grande de leur action sur le tryptophane ou les substances qui en renferment, action beaucoup trop variable pour que ses divers degrés puissent être utilisés comme caractères différentiels. Je n'ai pas tardé à m'apercevoir combien cette hypothèse était exacte.
En effet, au mois d'octobre 1912, j'ai examiné à nouveau 24 Proteus de diarrhées infantiles que j'avais étudiés au mois de février de la même année et qui avaient subi de nombreux passages en gélatine préparée avec du bouillon Martin ; bien que je me sois placé dans les mêmes conditions et que j'aie utilisé le même milieu (solution de peptone pancréatique de viande à 20 pour 1.000), j'ai constaté que 6 Proteus qui primitivement produisaient de l'indol et de l'acide indolacétique ne donnaient plus que de ce dernier corps, tandis que 11 autres qui ne formaient que de l'acide mdolacétique étaient devenus également producteurs d'indol. Le Proteus vulgaris présentait donc bien la grande variabilité d'action que Je lui attribuais à priori et qui me faisait paraitre peu probable l'existence de races bien fixées au point de vue du pouvoir indologène.
Ayant ainsi observé une variation spontanée de ce caractère du Proteus, j'ai essayé d'obtenir plus rapidement une modification analogue. Dans ce but j'ai pris au hasard parmi les échantillons dont l'expérience précédente m'avait montré la fixité d'action, 3 Proteus qui m'avaient toujours donné de l’indol, en solution de peptone pancréatique de viande, et 3 autres qui au contraire n'avaient Jamais produit que de l'acide indolacétique. Je les ai ensemencés en même temps dans une solution de peptone pancréatique de caséine à 3 pour 100, dans une solution renfermant, avec les sels habituels 2 pour 1.000 de tryptophane avec seule-
ment 5 pour 1.000 de gélatine et enfin dans une solution à 20 pour 1.000 de l’ensemble des acides aminés qui entrent dans la constitution de la molécule de caséine.
J'ai examiné les cultures au bout de 72 heures de séjour à 37° et Jj ai constaté que sur peptone de easéine les 6 échantillons donnaient de l'acide indolacétique et qu’un seul des 3 indologènes donnait de l’indol. Au contraire, sur les deux autres milieux, tous les échanüllons donnaient à la fois de l'indol et de l'acide indolacétique. Enfin, j'ai analysé de nouveau, après 15 jours d’étuve, les cultures sur peptone de caséine, mais j'ai obtenu les mêmes résultats, c'està-dire qu'une seule renfermait de l'indol. Pendant un mois j'ai continué à cultiver ces 6 Proteus sur les trois milieux, et après leur avoir ainsi fait subir six passages, j'ai constaté que leur action respective sur le tryptophane ne s'était pas modifiée. Par conséquent sur six échantillons un seul avait gardé ses propriétés primitives, trois autres semblaient avoir acquis, dans les milieux contenant du tryptophane libre, la faculté de produire de l’indol, tandis que les deux derniers, en passant par la solution de peptone de caséine, avaient perdu leur pouvoir indologène, En présence de ces faits il était intéressant de rechercher si les propriétés des Proteus ainsi cultivés en milieux spéciaux étaient modifiés définitivement ou sil s'agissait simplement de variations apparentes essentiellement dépendantes de la composition du milieu. C'est ce que J'ai fait en ensemençant à nouveau dans une solution à 20 pour 1.000 de peptone de viande les 5 échantillons dont les caractères semblaient avoir varié; j'ai alors constaté que les deux races qui avaient perdu leur pouvoir indologène ne le recouvraient pas dans le milieu primitif et que les trois autres, devenues capables de produire de l'indol, ne donnaient plus dans ce milieu que de l'acide imdolacétique, ainsi qu'elles le faisaient antérieurement.
Si j'avais borné là mes recherches j'aurais pu tout au moins conclure à la possibilité de variations regressives stables, mais connaissant l'extrême variabilité du Proteus j'ai continué à étudier les races que j'avais utilisées pour mes dernières expériences. J’ai repiqué ces 6 Proteus sur gélatine au bouillon Martin et après 8 passages effectués en deux mois, J'ai examiné de nouveau leurs cultures en solution de peptone de viande (72 heures à 37°). Dans ces conditions j'ai observé que les 6 échantillons avaient repris leurs propriétés primitives, c'est-à-dire que tous donnaient de l'acide indolacétique et que les trois anciens producteurs d'indol
en formaient comme par le passé. Les variations apparentes du pouvoir indologène que j'avais déterminées brusquement n'étaient done bien que des modifications essentiellement transitoires.
Enfin, j'ai étudié plus complètement l'action de ces 6 Proteus sur le tryptophane, à l’aide des cultures obtenues en présence de 2 pour 1.000 de cet aminoïque et de 5 pour 1.000 de gélatine. Ainsi que je l'ai déjà dit, dans ce milieu, après 72 heures à 37°, les 6 échantillons ont produit de l’indol et de l'acide indolacétique. J'ai laissé séjourner des cultures à l'étuve, pendant encore 15 jours et au bout de ce temps j'y ai trouvé beaucoup plus d'indol; par contre c’est à peine si J'ai pu y caractériser l’acide indolacétique, alors que cette substance existait en forte proportion dans les Jeunes cultures.
Toutefois si l'acide indolacétique avait presque complètement disparu, peut-être l’indol était-il accompagné d'un autre dérivé plus simple du tryptophane ? Par la recherche même de l’indol j'avais la preuve que mes cultures ne renfermaient pas de scatol, mais peut-être contenaient-elles de l'acide indol-carbonique, cette substance indologène dont Porcher à montré la présence dans les cultures de certains microbes ?
Pour m'en rendre compte j ai employé ce qui me restait de mes six cultures de 15 jours sur tryptophane ; à ce moment elles étaient déjà complètement débarrassées de leur indol par des lavages à l’éther, en présence d’un léger excès de soude. Je les ai exactement neutralisées avec HCL et je les ai distillées : Les 6 distillats contenaient de l'indol que j'ai caractérisé par le diméthylaminobenzaldéhyde et la formation du dérivé nitrosé : le liquide distillé renfermait done de l'acide indol-carbonique. Dans Le résidu de ces distillations j'ai retrouvé les traces d'acide indol-acétique dont J'avais antérieurement constaté la présence. J'ai extrait cette substance en épuisant par l'éther la liqueur légèrement acidifiée ; j'ai débarrassé celle-ci de l'excès d’éther en la chauffant quelques instants au bain-marie, puis après l'avoir étendue d'eau, je l'ai filtrée sur bougie de porcelaine. Dans le filtrat ainsi obtenu, avec l’eau de brome et le réactif glyoxylique, j'ai obtenu pour les six cultures, les réactions caractéristiques du tryptophane ; tout cet acide aminé n'avait donc pas été détruit en quinze jours par le Proteus.
Quant à l'acide imdol-carbonique sa présence, à côté de l’indol et de traces d'acide indol-acétique, est incontestable, car j'ai vérifié que la distillation de 200 ce. de milieu au tryptophane additionné
de 5 centigrammes d'acide indol-acétique et exactement neutralisé donnait un distillat ne réagissant en aucune façon avec le diméthylaminobenzaldéhyde, tandis que dans les mêmes conditions 5 centigrammes d'acide indol-carbonique (marque Badische Anilin u. Soda Fabrik.) produisaient une quantité notable d’indol.
Ayant constaté que le Proteus peut donner de l'acide indol-carbonique, j'ai recherché cette susbtance dans des cultures de tout âge en eau peptonée ou en milieu aux acides aminés de la caséine, ainsi que dans des cultures jeunes sur tryptophane ; bien que mes essais aient porté sur les six races de mes dernières expériences, je n'en ai pas trouvé par le procédé que je viens d'indiquer. Ce corps me semble exister surtout dans les vieilles cultures en milieu particulièrement favorable ; en pratique, au point de vue du simple diagnostic bactériologique, il n'y a donc guère lieu de s'en inquiéter.
On à pu remarquer, que dans mes recherches, j'ai négligé l'acide indol-propionique ; je tiens à faire observer que j'avais des raisons d'agir ainsi. En effet, toutes mes cultures ont été effectuées au large contact de l'air; par conséquent, en admettant que le Proteus ait pu produire ce corps aux dépens du tryptophane, Jamais 1l n'aurait trouvé dans mes expériences les conditions d’anaérobiose nécessaires. D'ailleurs, aucune de mes cultures, ainsi que je l'ai établi en recherchant l’indol, ne renfermait de scatol, composé qui accompagne ordinairement l'acide indol-propionique dans la destruction anaérobie du tryptophane par certains microbes.
J'aurais dû, pour être complet, rechercher également s’il y avait formation d'indoléthylamine; si je ne l'ai point fait, c’est que la recherche de cette substance ne peut s'effectuer par des méthodes aussi simples que la caractérisation de l'indol, du scatol et des acides à noyau indolique. L'examen de ce point de la biochimie du Proteus m'aurait du reste trop écarté de l'étude critique du pouvoir indologène et j'ai préféré Le réserver pour des recherches ultérieures.
Enfin, je tiens à insister sur ce fait que toutes les cultures dont je me suis servi au cours de cette étude ont toujours été obtenues avec des milieux donnant, par le brome, la réaction du tryptophane libre. J'ai laissé systématiquement de côté l'étude des cultures dans lesquelles le Proteus aurait dû effectuer une dislocation préalable d'une molécule albuminoïde quelconque pour en libérer le tryptophane, car 11 m'aurait fallu tenir compte
Berthelot 3
non seulement des variations de l’activité d'attaque de cet aminoacide, mais encore de la variabilité des pouvoirs protéolytique, peptolytique ou peptidolytique.
Je n'ai done pas examiné sous toutes ses faces la question de la production d’indol par le Proteus vulgaris, mais comme je m'étais placé uniquement au point de vue de la diagnose précise de cette espèce, je crois avoir fait œuvre plus utile en examinant un grand nombre de races dans des conditions assez limitées, mais bien définies.
Quoi qu'il en soit, de l’ensemble de mes recherches il résulte que le Proteus vulgaris est un microbe qui attaque le tryptophane en donnant, par le même mécanisme que les autres aérobies étudiés par Hopkins et Cole, une série de produits dont la dégradation plus ou moins avancée marque l'intensité de son action sur la molécule aminoïque. Dans certaines cultures très âgées, en milieu contenant beaucoup de tryptophane, on peut ne trouver pratiquement que de l'indol ; dans d'autres, en général assez jeunes et sur milieu pauvre en tryptophane libre, il n’y a que de l’acide indolacétique, mais ce que l’on rencontre le plus souvent c’est à la fois de l’indol et de l'acide indolacétique en proportions variables.
L'action du Proteus variant non seulement avec les divers échantillons, mais même pour une race donnée, il est impossible de se baser sur l'absence d’indol dans les cultures de ce microbe pour le différencier des autres espèces. Par contre, et autant que l’on puisse conclure de l'examen de soixante-et-une races, on peut dire que tous les Proteus vulgaris Hauser sont capables d'attaquer le tryptophane libre et de produire, aux dépens de cet acide aminé, au moins de l'acide indol-3-acétique.
L'espèce Bacillus proteus anindologenes Van Loghem n’a aucune raison d'être et l'on doit considérer comme Proteus vulgaris Hauser tout microbe possédant, avec les autres caractères de cette espèce, la propriété de donner, à 37°, dans un des milieux que je viens d'indiquer, soit de l'indol ou de l'acide indolacétique, soit un mélange de ces deux corps (1).
1. Pour la recherche du pouvoir indologène des microbes je ne saurais trop recommander les milieux à base de tryptophane ; leur préparation ne présente plus de difficulté maintenant que cet acide aminé se trouve dans le commerce à un prix abordable (5 franes le gramme environ). Il y à cependant une précaution à prendre : exiger des fabricants un produit dont l'extrait éthéré ne réagisse en aucune façon avec le réactif d'Ehrlich et dont la solution aqueuse presque incolore ne donne aucune coloration rose ou rouge avec les nitrites et l'acide chlorhydrique dans les conditions habituelles.
