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2 ce. tuméfaction qui diminuait lentement pour ne laisser vers le quinzième jour qu'un gros noyau induré.

Inoculation intra-péritonéale : avec 2 cc. mort en 8 jours ; avec 3 ce. mort en 5 jours. Au cours des deux dernières journées les animaux présentaient une très forte diarrhée.

Inoculation intra-veineuse : 2 ec. déterminaient la mort en 36 heures environ ; avec 1 ce. les animaux succombaient égale-

ment, mais seulement vers le quatrième jour.

Cultures de 7 jours, à 87°.

1° Cobaye.

Inoculation sous-cutanée : Mort vers le sixième jour avec une dose de 2 ce.

Inoculation intra-péritonéale : Mort en 3 à 4 jours avec 1/2 ce.

Inoculation intra-veineuse : Mort en 18-24 heures avec 1/2 cc.

2° Lapin.

Inoculation sous-cutanée : Avec 5 ce. mort en 5 jours; avec 2 cc. : abcès, suppuration et mort du 11° au 13° jour.

Inoculation intra-périltonéale : Avec 2 cc. mort en 4 jours environ.

Inoculalion intra-veineuse : Une dose de 1 ce. suffisait pour déterminer la mort en moins de 48 heures.

Les cultures de 7 jours en bouillon Martin se sont donc montrées notablement plus virulentes que les cultures de 48 heures.

b) Emulsion de corps microhiens vivants.

J'ai également étudié la virulence du Proteus Tr inoculé sous forme d’émulsion de jeunes corps microbiens. J’ensemençais ce microbe sur gélose ordinaire inclinée, exempte d’eau de condensation, et au bout de 24 heures de séjour à 37° je délavais la culture obtenue dans 10 cc. d’eau physiologique. Cette dilution correspondait sensiblement à une teneur de 2 milligrammes de microbes secs — soit environ 10 milligrammes de corps microbiens frais — par centimètre cube.

J'ai éprouvé cette émulsion par ènoculalion intrapéritonéale et j'ai constaté ce qui suit :

1° Cobaye (Poids moyen : 500 grammes).

Un demi centimètre cube, soit approximativement 5 milligram-

mes de microbes pesés humides constituait la dose suffisante pour provoquer la mort en 24 à 36 heures à la suite d’une violente péritonite.

20 Lapin (Poids moyen : 2.000 grammes).

Avec le lapin, la dose nécessaire pour déterminer la mort des animaux en 24 à 30 heures s'élevait à 2 cc. d'émulsion, soit environ 20 milligrammes de microbes frais.

Comme chez le cobaye il y avait une péritonite très violente ; à l’autopsie, on trouvait en abondance le Proteus dans le sang du cœur, même lorsque l’ensemencement était pratiqué moins d'une heure après la mort.

B. — Toxicité des cultures totales de « Proteus Tx » en divers milieux.

Pour déterminer cette toxicité je ne me suis servi que de cultures de 7 jours stérilisées de Ja façon suivante :

À 30 centimètres cubes de culture retirée de l’étuve à 37° depuis quelques heures j'ajoutais 5 ce. d’éther; j'agitais doucement pendant quelques instants, puis j'abandonnais à elle-même la culture ainsi éthérée en ayant soin de placer un bouchon de caoutchouc au-dessus de celui de coton. Après 48 heures de contact je chassais l’éther en maintenant le récipient contenant la culture plongé pendant un temps suffisant dans un bain d’eau à 40° ; à l’aide de la trompe à eau Jj'aidais à l'évaporation des dernières traces d'anesthésique. Je vérifiais la stérilité de la culture par un ensemencement en bouillon et c'est alors seulement que je l’utilisais.

Dans presque toutes les expériences que je vais rapporter j'ai injecté à des cobayes, dans le péritoine ou dans les veines, des doses croissantes des diverses cultures ; pour simplifier je n'indiquerai ici que les doses qu'il n'a fallu atteindre pour provoquer, dans un temps inférieur à 24 heures, la mort d'animaux d'un poids moyen de 500 grammes.

a) Cultures en bouillon Martin, stérilisées par l'éther. Toxicité pour le cobaye (Poids moyen : 500 grammes).

Voie intra-péritonéale. — Dose mortelle 5 cc. ; mort en moins de 18 heures.

Voie intra-veineuse. — Dose mortelle 2 ec. 5: mort en moins de 18 heures.

b) Cultures cbtenues avec une solution des produits abiuréliques (4) d'hydrolyse acide de la caséine, stérilisée par l'éther.

Le milieu employé pour cette expérience était une solution aqueuse à 15 pour 1.000 d'un mélange des acides aminés qui constituent la molécule de caséine.

J'avais préparé ce complexe en hydrolysant à l'ébullition par l'acide sulfurique dilué la caséine commerciale dégraissée. L'hydrolyse avait été poursuivie jusqu'à disparition de la réaction du biuret ; l'acide sulfurique avait été déplacé par la baryte. La liqueur contenant les produits abiurétiques ainsi libérés avait été évaporée à siccité dans le vide à 50°, après traitement par le noir animal ; au produit de cette évaporation j'avais ajouté 1 0/0 de tryptophane et finalement j'avais obtenu une poudre presque blanche, donnant, à la dose de 15 pour 1.000 d’eau, une solution à, peine teintée de jaune et très légèrement acide. Dans cette solution exactement neutralisée par la soude, le Proteus se développait rapidement et donnait des cultures très abondantes et dont la toxicité était identique à celle des cultures en bouillon Martin.

c) Cullures en solution de pepione de caséine, stérilisées par l’éther.

Je me suis servi d'une solution à 20 pour 1.000 d’une peptone pancréatique de caséine que M. Macquaire avait eu l’obligeance de me préparer pour mes recherches sur la fonction indologène.

Les cultures obtenues avec ce milieu étaient moins riches que celles en bouillon Martin, mais plus abondantes que celles de l’expérience précédente.

Toxicité pour le cobaye (Poids moyen 500 grammes).

4. Il me paraît bien inutile d’insister sur les avantages des milieux définis à base d'acides aminés, puisque Galimard les à exposés en détail et fort bien mis en lumière, il y a déja plus de cinq ans (J. Galimard, Quelques recherches nouvelles sur les cultures microbiennes en milieux chimiquement définis, Thèse de Médecine, Lyon, 26 janvier 1907).

Voie intra-périlonéale. — Dose mortelle 3 cc. ; mort en moins de 18 heures.

Voie intra-veineuse. — Dose mortelle 2 cc. 5 ; mort en 16 heures.

d) Cultures dans une solution d'un mélange commercial d'acides aminés de la viande, stérilisées par l'éther.

Je me suis servi d’une solution à 20 pour 1.000 d'un produit commercial préparé d'après Les indications d'Abderhalden, c'està-dire en soumettant de la viande à l’hydrolyse tryptique et éreptique, prolongée pendant longtemps en présence d'antiseptiques volatils. Cette solution constitue un excellent milieu de culture pour un grand nombre de microbes ; Le Proteus s'y développe très vite et très abondamment.

Toxicité pour le cobaye (Poids moyen 500 grammes).

Voie intra-péritonéale. — Dose mortelle 3 cc. ; morten 18 heures.

Voie intra-veineuse. — Dose mortelle 4 cc. ; mort en 6 heures.

e) Cultures dans un milieu chimiquement défini, stérilisées par l'éther.

Le milieu que j'ai employé avait la composition suivante :

HAL SEL ON AE PME CN UE RE CO EU Phosphate dipotassique : . . . . 1,00 Sulfate de magnésium. .: . , . . 0,50 CVCOCOUE MEN AT ITS EC EL 0,75 Aspartate de s6dium "Ne ue 0,50 Chlorhydrate de l'acide glutamique 0,50 Alanitetas alt dl er RENTE 0,50 Chlorhydrate d'histidmes … 0,50 T'YTOSDS FE RE EN RENE D 0,25 TEXYDIODhAnC METIER CORNE 0,25 LetCiie eue RSR OCR SES 0,30 PRÉNVARNINET SN NS 0,30 Chlorhydrate de guanidine . . . . 0,20 Créatite 20, RSR ER EEE 0,20 Chlorhydrate de glucosamine ‘. . . 0,20

CYSURE ne PMP ETS RE 0,10

dire Pour amener cette solution à la réaction convenable je la stérilisais à 120°, puis après refroidissement j'y ajoutais un volume déterminé à l'avance d’une solution de soude stérile. Dans le milieu ainsi préparé le Proteus ne donnait pas d'aussi belles cultures qu'en bouillon Martin ou que dans le milieu précédent ; mais elles étaient aussi riches que celles obtenues avec les acides aminés de la caséine.

Toxicité pour le cobaye (Poids moyen 500 grammes) (Proteus Tx). Cette toxicité est pratiquement nulle puisqu'il faut dépasser 10 ce. dans le péritoine et 5 cc. dans les veines.

in présence de ces résultats j’ai cultivé sur ce même milieu et sur la solution d'acides aminés de la viande un Proteus isolé d’une putréfaction (Proteus PV) sensiblement moins virulent que le Proteus Tx et jai constaté ce qui suit :

Toxicité pour le cobaye (Poids moyen 500 gr.) (Proteus PV).

Milieu D. — Voie intra-péritonéale. Dose mortelle 5 cc. ; mort en moins de 18 heures.

Voie intra-veineuse. — Dose mortelle 2 ce. 5 ; morten 18 heures.

Milieu E. — Voie intra-péritonéale. Dose mortelle 1 ce. ; mort en moins de 18 heures.

Voie intra-veineuse. — Dose mortelle 4 cc. ; mort en 20 heures.

L'absence de toxicité des cultures du Proteus Tr dans le milieu E ne dépendait donc qu'indirectement de la composition de celui-c1.