À) CULTURE DES SEMENCES EN MILIEUX ASEPTIQUES

A moins d’avoir été prélevées avec toutes les précautions utiles dans le fruit où elles se sont formées, les semences sont

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toujours contaminées de germes divers qui, mis dans un milieu humide et tiède, évolueront avec les graines. La stérilisation de celles-ci est donc la première opération qui s’impose.

Le procédé à l’hypochlorite de calcium, que nous avons choisi, entre autres, est de réalisation facile et peu agressif. Il ne nuit pas au pouvoir germinatif des semences. Voici le détail des manipulations :

Préparation de la solution d’hypochlorite :

35 g. de chlorure de chaux, titrant 200° chlorométriques, sont dissous dans 1 litre d’eau. Après agitation d’une durée de dix minutes, on filtre et recueille un liquide qui doit être incolore ou à peine teinté de jaune.

Stérilisation des semences

Les semences, placées dans un récipient, sont recouvertes de la solution d’hypochlorite et abandonnées pendant trente minutes à froid. Sitôt retirées du bain d’hypochlorite, elles scnt disposées à l’aide d’un matériel aseptique, äans les boites de Pétri préparées pour la germination. Aucun lavage n’est nécessaire pour les débarrasser de l’hypochlorite de Ca qui les imprègne, car ce sel se détruit rapidement.

Les boîtes de Pétri, où s’effectueront les premiers stades du développement des plantules, ont été garnies de coton hydrophile revêtu d’un disque de papier Joseph lavé. Le tout a été imbibé d’eau et stérilisé à l’autoclave.

Prélèvement et répartition des radicules dans les milieux de culture

Les plantules, dont le développement sera suivi, doivent faire l’objet d’une sélection extrêmement sévère, afin de constituer des lots aussi homogènes que possible.

Toutes les plantules appartenant à une boîte souillée doivent être rejetées. Le choix portera sur les échantillons dont les radicules mesurent de 1,5 à 2 cm. et paraissent également saines et vigoureuses. L'on isole de chaque radicule choisie

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un fragment mesurant 1 cm environ à partir de l'extrémité. Les cultures sont effectuées dans 25 cc. de milieu IT de White, modifié et stérilisé, dans des tubes en verre dur d’une longueur de 22 cm. et d’un diamètre de 22 mm. Les radicules sont portées par une baguette de verre recourbée en anneau à son extrémité et maintenue à un niveau convenable par la bourre épaisse qui obture le tube. Le milieu nutritif répond à la formule :

Eau bidistillée dans du Pyrex........:7. 0.0 1 litre

NitratendemcalciUM ER PER NI CENTER 0,142 &g. Sulate deMMArNESIUME APE CPC Tec 0,073 g.

NitratetdelnOlassiUmME #5). 2.00 RL NRC 0,081 g. Chlorure de potassium........:.........:...0. 0,065 g. Phosphate monopotassique.................... 0,0125 g SUIEA TE MTCFTIQUER PE RE A EN CNTEREREC EEE 0,0025 g SACCRATOSE M MAMAN A ET Men NE Core 20 8 NATAMINERE END RE REP FE 0,0001 g.

Vitamine RENE CAE CrE Et CT C,0004 g ACIde MICOIMIAQUER RENE ET AR MRC OAER EIRRe 0,004 g

L'introduction, à la place de la levure de bière, des vitamines B: et B6 et de l’acide nicotinique, qui rapprochent nctre milieu de celui de BONNER et DEVIRIAN (31), a permis un accroissement des racines plus régulier qu'avec le milieu de WHITE.

Les cultures sont effectuées à la température de 22°. Les milieux infectés sont éliminés des lots.

La longueur des racines est mesurée tous les deux jours, jusqu’au vingtième au moins, selon le comportement indivi- ‘duel de chaque élément. De nombreux auteurs ont, en effet, signalé des variations de vitesse d’allongement, demeurées inexpliquées.

Pour chäcune des racines, on évalue le taux de croissance donné par la formule :

Ln — L

T = taux de croissance .

= longueur de la racine au ni" jour de culture L = longueur initiale de la racine